일반기술

세포침투성 티에이티-씨3 트랜스페라제 융합단백질, 이융합단백질의 발현벡터 및 티에이티-씨3 트랜스페라제를이용한 로 단백질의 생리적 기능 분석방법

인간 글루탐산 탈수소효소(GDH) 유전자를 9개의 아미노산으로 이루어진 인간 면역결핍 바이러스 타잎-1 TAT 단백질 형질도입 부위 (RKKRRQRRR)를 발현시키는 유전자와 박테리아 벡터를 이용하여 융합시켜서 유전적으로 하나가 된 TAT-GDH 융합단백질을 얻었다. 이렇게 만들어진 TAT-GDH 융합단백질은 배양액에 넣은 후 웨스턴 블랏 방법과 효소 활성도로 측정해 본 결과 PC12 세포 내로 효율적으로 침투한다는 것을 알 수 있었다. 변성된 TAT-GDH 융합단백질이 변성되지 않은 경우보다 더 효율적으로 세포 내로 침투하였다. 이렇게 침투한 TAT-GDH 융합단백질은 세포 내에서 GDH의 완전한 활성도를 나타내었으며, GDH의 N-말단에 붙어있는 9개의 TAT 단백질 형질도입 부위는 GDH의 활성도나 열 안정성에 아무런 영향을 미치지 않았다.