일반기술

핵내 신호 전달 조절 선도물질 탐색기술개발

● 1차년도 연구과정중 선정된 균주 배양여액 추출물로 Colo320/NIH3T3 cell line에 대해 c-myc, -actin gene 발현 영향을 평가한 결과 최종 4개균주가 Colo320에대해 c-myc gene의 발현을 특이적으로 저해하였다. ● 4개 균주중 northern blot hybridization에 의해 검정한 결과 2개 균주(YP-1, YP-2)의 경우 Colo 320의 c-myc gene의 발현을 특이적으로 저해하며 -actin gene 발현에는 영향을 주지 않음을 확인할 수 있었다. ● YP-1의 항암물질 생성 최적 배양조건은 3.0% glycerol, 3.5% peptone, 0.4% NaCl, 0.4% CaCO3를 포함하는 경우, YP-2는 3.5% galactose, 4% casamino acid, 0.4% NaCl, 0.2% CaCO3를 포함하는 경우 최상의 배지조건을 형성하였다. ● 두 균주 배양여액의 항균 spectrum을 조사한 결과, Gram(+)세균 8종, Gram(-)세균 6종, 효모 5종, 곰팡이 5종에 대해 검토한 결과 두균주 모두 진핵생물에 특이적으로 작용하는 것으로 확인되었다. ● 균주동정 실험 결과 Streptomyces sp. 임을 알 수 있었다. 이 중 Streptomyces sp. YP-1은 spore chain이 open-spiral한 형태이며 표면이 warty한 형태를 보이는 것과 기타 특징으로 보아 Streptomyces endus와 동일한 것으로 동정되었다. ● 선별된 균주로부터 c-myc 유전자 발현 저해물질을 분리, 정제하여 Streptomyces endus YP-1으로부터 1개의 물질(YP-1-1)이 순수정제되어 그 구조가 동정 되었고 YP-1으로부터 1개의 물질(YP-1-2), YP-2로부터 1개의 물질(YP-2-1)이 추가로 정제되었고 그 구조가 동정중에 있다. 그리고 Streptomyces sp. SP-2로부터 1개의 물질(SP-2-1)이 정제중에 있다. ● YP-1-1물질은 구조분석을 통해 기존 항생제인 Azalomycin B와 동일한 것으로 동정되었다. 이 물질은 염증 치료제로 활용된 바 있으나 항암제로는 활용되지 않고 있어 본 연구진은 향후 그 가능성을 검토하고자 한다. 그리고 현재까지 Streptomyces endus로부터 본 물질이 생성된다는 보고가 없어 Streptomyces endus에서 Azalomycin B의 생산은 처음으로 보고되는 결과이다. ● YP-1-1과 SP-2-1은 c-myc 유전자를 저해함과 동시에 apotosis를 일으키면서 항암작용을 나타내었다. 이 중 SP-2-1은 암세포의 분화유도에 관여하였다. ● YP-1-1의 세포주기에 대한 영향을 조사한 결과 세포주기의 초기에서 가장 강한 영향을 미치는 것으로 나타났다.