일반기술

디엔에이가 손상된 세포의 종양억제인자로 작용하는아이알에프-3와 그 발현 벡터

본 기술은 종 DNA가 손상된 세포의 종양억제 인자로 작용하는 IRF3에 대한 기술이다.야생과 돌연변이(S385A와 S386A)된 IRF3발현 프라즈미드를 제조하였다. GAL4-IRF3, GAL4-IRF1 및 GFP-IRF3를 제조하기 위해서, IRF1 및 IRF3 cDNA 삽입체를 PCR에 의해서 얻었다. PCR 생성물을 Clontech사의 GAL4프라즈미드 pSG424 또는 GFP 프라즈미드 pEGFP-N1에 클론하였다. E1b TATA 박스를 갖는 다섯 개의 GAL DNA 결합자리를 갖는 G5E1b-CAT 표지 프라즈미드를 제조하였다.IRF-CAT 표지 프라즈미드의 제조를 위해서, 인터페론-β인헨서 부분의 다중체에 의해서 6 카피의 IRF DNA 결합자리를 만들고, 인터페론-β최소 프로모터 지역과 CAT표지유전자를 갖는 -40IFN-βCAT 프라즈미드에 클로닝하였다. 이렇게 얻은 프라즈미드들을 NIH3T3, REF52, HeLa 등의 세포주에 트랜스펙션시킨 후 자외선, 독소루비신, 미토마이신 C, 시스프라틴 및 에토포사이드 등의 DNA 손상 물질들을 처리하여 관찰한 결과 모든 경우에서 IRF3의 전사 활성이 증가함을 확인하였다.또, 같은 세포주에서 정상 IRF3을 지닌 플라즈미드와 대조군, IRF-3 dominant 음성돌연변이를 지닌 플라즈미드를 각각 트랜스펙션 시킨 후 그 생장을 관찰한 결과, IRF-3는 HeLa 세포등 다양한 암세포의 성장을 80%이상 억제할 수 있는 종양억제인자 로 작용할 수 있음을 확인 하였다.