일반기술

신규 엔도키티나제 및 그 생성능을 가지는 상귀박터속 미생물

신규 엔도키티나제 및 그 생성능을 가지는 상귀박터 속(Sanguibacter sp.) 미생물에 관한 것으로, 엔도키티나제 (endochinase) 생성분비능을 가지는 신규 미생물 상귀박터 속 KCTC 10714BP, 상기 미생물로부터 생성분비되는 엔도키티나제, 상기 엔도키티나제를 코딩하는 유전자 및 상기 미생물을 배양하여 엔도키티나제를 제조하는 방법에 관한 것○ 키틴분해효소를 생산하는 해양 미생물의 분리 및 배양 - 다량의 키틴분해효소를 생산하는 해양 미생물인 상귀박터 속(Sanguibacter sp.)의 순수배양 기술○ 해양 미생물로부터 키틴분해 효소 생산 기술 - 순수분리한 해양미생물 배양으로부터 키틴분해효소의 생산 및 순수 분리정제○ 키틴분해효소를 이용한 팽윤키틴으로부터 dimer 생산 - 남극 세종기지 주변의 해양환경에서 분리한 chitolytic activity를 가진 선별균주 - Chi21702는 가용성 키틴을 함유한 배양배지에서 생산유도 - dimer를 인식하는 endo-chitinase (exo-type 보다 활성이 - 염기서열은 1,888 bp이었으며, 5'-UTR은 388 bp, ORF는 1,449 bp 이었고, 3'-UTR은 51 bp 임 - 483개의 amino acid로 구성되어 있으며, N-말단 부분에 cleavage site가 존재, ORF 내부에는 chitin/cellulose binding domain을 가짐 - 분자량은 약 56 kDa이었고, 온도별 효소활성은 0 ℃, 4 ℃ 및 70 ℃에서 효소활성은 각각 64 %, 70 % 및 74 %를 유지, 0 ℃에서 70 ℃의 온도범위에서 효소활성이 60 %이상을 유지 - pH에 따른 효소활성을 조사한 결과, 염기성 조건에서 효소활성이 안정되며, pH 4~9의 조건에서 활성을 70 % 이상 유지 - NAG 생산에 있어 팽윤키틴에서 1 단계에서 dimer 생산이 가능○ 공정용 키틴 dimer 생산효소로 이용 - 높은 pH 안정으로 다양한 생산공정에 이용이 가능 - 넓은 온도 적응성(0 - 70℃)으로 효소반응을 위한 반응공정에 온도선택성이 다양하여 공정비용에 유리 - endo-type으로 exo-type에 비교하여 dimer 생산활성에 용이함 ○ 사업화 전망 - Chi21702를 팽윤키틴으로부터 chitin dimer 생산을 위한 공정효소로 이용