일반기술

세포내 맥아당의 정량적 측정을 위한 맥아당 바이오센서

본 발명은 CFP-MBP-YFP로 구성되는 세포내 맥아당 정량을 위한 바이오센서에 관한 것으로서, 맥아당의 인식부위인 말토오스 결합 단백질의 유전자를 변이시킴으로서 신호발생부인 형광단백질 사이의 FRET 변화를 증대된 것을 특징으로 하는 신규한 세포내 맥아당 정량을 위한 바이오센서에 관한 것이다. 또한 본 발명은 (1) 세포 내 대사물질과 결합하는 단백질의 양 말단에 FRET을 유발할 수 있는 형광에너지 공여체와 수여체가 각각 연결된 바이오센서의 기본 염기서열을 구성하는 단계; (2) 상기 기본 염기서열에서 대사물질과 결합하는 단백질 유전자와 형광단백질 유전자의 연결 부위의 염기서열을 다양화한 라이브러리를 구축하는 단계; (3) 상기 라이브러리를 클로닝하여 감지신호가 증가한 바이오센서를 고속탐색(high-throughput screening)하는 단계로 이루어지는 감지신호가 증가한 바이오센서를 개발하는 방법에 관한 것이다. 본 발명에 의해 얻어진 바이오센서는 살아있는 세포의 대사에 의해 변하는 맥아당의 농도를 형광의 변화를 비교하는 방식으로 보다 정확하게 정량적으로 측정할 수 있으며, 본 발명에 의한 상기 방법은 말토오스 결합 단백질과 유사한 기능을 수행하는 세포막간 결합 단백질군 (periplasmic binding protein family)들에도 이용될 수 있다.