일반기술

리컴비네이즈 매개 선택표지 유전자 발현유도에 의한 목표유전자 간편 클로닝 및 목표 단백질 신속 발현 방법

본 발명은 상동성 유전자조합반응에 의하여 대량 유전자의 고속클로닝, 간편한 단백질발현을 구현하는 방법과, 이를 위한 플라스미드, 그리고 재조합 대장균의 제공에 대한 것이다. 보다 상세하게는, 리보솜 인식서열을 포함하는 프라이머로 목표유전자를 증폭한 후, PCR산물을 재조합 대장균에 도입함으로써 상동성 유전자조합효소에 의한 리보솜 인식서열의 클로닝과 목표유전자의 발현(RECOMBINASE-MEDIATED TRANSLATION)을 유도하는 유전자 조작방법, 그리고 이를 위한 플라스미드의 제공에 대한 것이다. 본 발명의 방법에 따르면, 항생제를 이용한 간편한 선별법에 의하여, 목표유전자의 클로닝 및 단백질발현을 신속하게 수행할 수 있다. 특히 본 발명에 의하면 플라스미드 준비, 제한효소 처리, 선형DNA 연결반응 등 까다로운 유전자조작단계를 필요로하지 않으므로, 유전자 조작에 필요한 비용을 크게 감소시킬 수 있다.