일반기술

형질전환 식물체의 유전자의 분석방법

발명의 목적 DNA칩을 이용하여 특정 유전자로 형질전환된 지황 식물체 및 동종 식물체에서의 유전자 발현양상 변화를 확인할 수 있는 유전자 분석방법을 제공하고자 함.발명의 주요 내용 DNA칩 제조방법 ① 분석대상 핵산에 상보적으로 결합 가능한 DNA를 기판에 배열하여 DNA 포획칩을 제작함. 이때, 분석대상 핵산은 DNA 및 RNA를 포함하여 형질전환된 식물체 스틸벤 합성효소를 코딩하는 유전자가 도입된 형질전환 지황 식물체를 사용하며, 상보적으로 결합 가능한 DNA는 스틸벤 합성효소의 활성부위를 코딩하여 유전자단편을 증폭할 수 있는 전구체에 의해 증폭된 것을 사용함 ② 분석대상 핵산에 포함되는 시료용액을 제조함 ③ ①의 DNA 포획칩에 ②의 시료용액을 가하여 분석대상 핵산들을 혼성화(Hybridization)시키고, 비특이적으로 혼성화된 분석대상 핵산분자를 제거함 ④ 대응되는 DNA에 상보적으로 결합된 분석대상 핵산들을 새로운 기판으로 이동시킴 유전자발현양상 분석방법 ① 분석대상의 뉴클레오티드군이 점적된 DNA칩을 제조함 ② 분석대상으로부터 mRNA를 추출함 ③ ②의 mRNA에 각각 다른 형광물질을 표지하여 프로브 DNA를 제조함 ④ ①의 DNA칩에 ③의 프로브 DNA를 혼화시키고, 혼화되지 않은 프로브 DNA를 세척하여 제거함 ⑤ 형광분석기로 DNA칩의 형광을 검출함발명의 효과 생물체에 구성되어 있는 유전자의 핵심부분(active site)에 프로프(probe)를 사용하여 해당 유전자의 발현여부를 신속하게 분석할 수 있음 유전자가 도입된 형질전환 식물체를 이용하여 다수 개의 유전자 발현양상을 비교할 수 있으므로, 변형된 유전자가 삽입된 식물체에서의 해당 유전자 및 다른 유전자의 발현양상 을 용이하게 분석할 수 있음