일반기술

CD9를 발현하는 인간 중간엽 줄기세포의 선별 및 배양방법

"본 발명은 동물혈청 없이 인간혈청을 포함하는 세포 배양 배지 조성물에 관한 것으로, 더욱 구체적으로 50~60 %(v/v) DMEM , 40~50 %(v/v) IMDM, 4~6 μg/ml 인슐린 (insulin), 4~6 μg/ml 트랜스페린 (transferrin), 4~6 μg/ml 셀레니움 (selenium), 10-7~10-9 M 덱사메타손 (dexamethasone), 80~120 U 페니실린 (penicillin)/800~1200 U 스트렙토마이신 (streptomycin), 5~15 ng/ml FGF, 및 1~10 % 인간혈청을 포함하는 것을 특징으로 하는 인간 중간엽 줄기세포 배양 배지 조성물에 관한 것이다.본 발명에 따르면, 인간 중간엽 줄기세포의 배양에 사용하는 자가혈청의 농도를 감소시키기 위하여 F-12를 대체하는 배지를 검색한 결과 DMEM/F-12 대신 DMEM/IMDM 배지를 사용하였을 때 인체혈청농도를 5%로 감소시켜도 세포증식능이 대조군 (DMEM/F12, 10% HS)과 유사한 수준으로 유지되어 인체혈청사용을 최소화하며 생체 안전성을 확보한 배양방법을 확립하였다. 또한, CD9 표지인자의 발현이 중간엽줄기세포의 증식능, 부착능 및 생체생존능을 증가시킴과 DMEM/IMDM배지사용시 CD9발현이 증가됨을 발견하고 CD9 표지인자를 띄는 세포개체를 분리하여 DMEM/IMDM배지에 배양함으로써 중간엽 줄기세포의 세포치료효과를 증진시킬 수 있는 방법을 확립하였다."