일반기술

대장암 단백질 마커

대장암은 암환자들의 사망률로 볼 때 세계 3위이다. 암환자 사망률의 총 10%를 차지하는데, 러시아도 예외가 아니다. 게다가 대장암 발병률이 계속 증가하고 있다.현재 일련의 대장암 단백질 마커들이 알려졌는데, CEA, 암항원 (СА) 242, 19-9, 72-4, 그리고 Tu M2-PK 등이 있다. 그러나 이러한 마커들은 민감도가 낮기 때문에 초기 진단에 이용하는 데 어려움이 있다. 한편 종양전이로 인해 간에 주로 나타나는 단백질은 혈청에서도 발견될 가능성이 크다. 그래서 초기진단용 마커로 이용할 수 있는 가능성이 크다.건강한 간조직과 종양이 전이된 간조직의 샘플은 대장암이 간에 전이된 후 이를 제거하는 수술을 통해 확보하였다. 그리고 간조직 샘플을 저온저장하는 은행이 만들어졌다. 저온저장은행에 보관되었던 인간 간조직 샘플의 프로테옴을 두 종류의 질량분광법으로 분석하였다 (이온 트랩 XCT Ultra와 4중극자 Time of-Flight 분석기 Q-TOF).간조직에서 정체가 확인된 마이크로솜 파편의 단백질들은 총 500여 가지였다. 프로테오믹스 SpectrumMill 소프트웨어를 이용해 일부 대장암 환자들의 간조직 샘플들에서 시토크롬 p450수치가 정상인의 것보다 더 많은 것으로 나타났다. 시토크롬 p450의 isoform들의 생화학 활성 테스트로 대장암 환자의 경우 그 활성도가 훨씬 높은 것으로 나타났다. 프로테옴 분석법으로 인간 간세포의 마이크로솜 멤브레인에서 시토크롬 p450을 발견하고 정체를 파악하였다.수술로 혈관종(정상세포)과 대장암이 전이된 간암(병든 세포)을 치료하기 위해 절단한 간조직을 연구재료로 이용하였다.분석과정은 다음단계들을 포함한다.모노머와 이합체 전기영동으로 단백질 분리질량분광법으로 45~66 kDa 젤부분의 분자를 스캔 (시토크롬 p450의 분자질량에 해당하는 부분).1D-ZOO 기술로 단백질 분석. 1D-ZOO는 개별 질량분광분석을 하였던 기존의 표준분석법과 달리 복수분석으로 하였다.간에 병이 들었을 때 단백질 수가 정상수치 보다(445) 많아졌다 (825). 45~66 kDa 부분에서 13개 마이크로솜 멤브레인 단백질의 정체가 확인되었으며, 그 중에는 1А2, 1В1, 2А6, 2Е1, 2C8, 2С9, 2С10, 2D6, 3А4, 4A11, 4F2 같은 시토크롬 p450들도 있었다.1А, 2В, 2С, 3А, 2Е 같은 시토크롬 p450 효소활성 연구를 통해 1А1/1А2와 3А4 시토크롬 p450의 O-dealkylation과 N-demethylation 속도가 감소되는 것을 알게 되었다. 그리고 프로테옴 분석과 생화학분석을 겸하는 것이 시토크롬 p450의 종류를 확인하고 그 발현정도를 파악하는 데 훨씬 효과적임을 확인하였다.