일반기술

발효에 의한 L-쓰레오닌의 제조방법(리팜피신 내성변이주)

본 기술은 미생물의 발효에 의한 L-쓰레오닌의 제조방법에 관한 것으로, L-시스테인을 요구하고, 동시에S-2-아미노에틸-L-시스테인과 마크로락탐계 항생물질인 리팜피신에 대한 내성을 가지는 변이주를 분리하여 슈크로스 등의 당류를 탄소원으로 이용, 호기적으로 배양하여 L-쓰레오닌을 제조하는 방법에 관한 것이다.본 기술의 목적은 발효에 의한 L-쓰레오닌의 제조에 있어서 보다 높은 수율로 L-쓰레오닌을 생산하는 방법을 모색하기 위한 것이다.본 기술에서 이용한 균주는 L-쓰레오닌 생산에 이용되고 있는 L-시스테인 요구주이며, 그 분리 방법은 S-2-아미노에틸-L-시스테인에 내성을 가지는 세라티아속 SW9410을 친주로 하여 통상의 변이처리방법에 의해 얻은 변이주중 L-시스테인에 대한 요구성과 S-2-아미노에틸-L-시스테인과 리팜피신에 대한 내성을 동시에 가지는 변이주 SW9506을 유도하였다.본 기술에 의해 분리된 균주를 이용하여 동일 조건에서 배양할 때, 친주에 비하여 다량의 L-쓰레오닌을 배양액내에 축적된다는 것을 알 수 있었다본 기술상의 균주분리 방법을 자세히 설명하면 다음과 같다.본 기술의 친주인 세리티아속 SW9410 균주를 통상적인 변이처리 방법 즉 자외선 조사나 화학변이 유기제인 NTG(N-메틸-N-니트로-N-니트로소구아니딘), DES(디에틸설페이트)로 처리하여 리팜피신이 50㎍/㎖첨가되어 있는 완전한 평판배지에 도말하고 30℃에서 2~3일간 배양하였다. 그리고, 이 평판배지상에서 생육하는 콜로니들을 분리하여 S-2-아미노에틸-L-시스테인, L-시스테인을 첨가한 배지와 첨가하지 않은 2 종류의 최소한 천평판배지에 각각 레플리카하여 친주의 균주 특성 변화를 확인하였다.이와 같은 방법으로 리팜피신과 S-2-아미노에틸-L-시스테인에 내성을 가진 동시에 L-시스테인 요구성을 가진 변이주중 특성이 명확한 신균주 SW9506을 분리하였으며, 이 새로운 균주는 배양액내에 많은 L-쓰레오닌을 축적시키는 것을 특징으로 한다