일반기술

아밀라제 생산 유전자 재조합 균주 및 이를 이용한 아밀라제 제조방법

본 기술은 아밀라제 생산 유전자 재조합균주 및 이를 이용한 말토올리고당 생산 아밀라제의 제조방법에 관한 것으로서, 스트렙토마이세스의 말토테트라오즈를 생산하는 아밀라제 발현 유전자를 바실러스에 옮겨 아밀라제를 제조하는 방법에 관한 것이다.말토올리고당은 보습성 강화, 점도의 증가, 빙점 강하, 결정 형성방지와 같은 식품의 물리적 성질을 개선할 수 있으며 특히 지나친 감미나 갈변과 같은 변화가 없는 특징 때문에 식품 첨가물로서 가치가 있다. 아밀라아제를 생산하는 균주로는 스트렙토마이세스 KSM-35가 있으나 이 균주는 효소의 생산능이 낮을 뿐만 아니라 원하지 않는 물질의 생산 가능성 때문에 사용에 어려움이 있었다.따라서, 본 기술의 목적은 말토올리고당생산 아밀라제 효소를 고수율로 생산하며 부산물을 생산하지 않는 균주를 개발하기 위한 것이다.본 기술에서는 유전자 재조합 방법에 의하여 아밀라제 생산능력이 크게 향상된 형질전환체 바실러스 섭틸리스 KFCC-10880 균주를 생산하였는데, 이 형질 전환주에 의해서 생산되는 아밀라제는 모균주보다 20배 이상, 대장균 pSJ1 형질 전환주보다도 10배 이상 생산성을 향상시켰다본 기술은 말토테트라오즈 생산 아밀라제를 생산하는 균주 스트렙토마이세스속 KSM-35균주에서 아밀라제 유전자를 클로닝하여 플라스미드를 만든 후 제한효소를 이용하여 발현과 분비에 관계된 유전자 서열이 결실된 플라스미드를 다시 제조하고, 바실러스 섭틸리스에서의 발현 및 분비능력이 강한 플라스미드와 재조합하여 아밀라제 유전자를 포함하면서 동시에 아밀라제의 분비능력이 강한 새로운 플라스미드를 만들어 숙주세포인 바실러스 섭틸리스 LKS88에 주입하여 아밀라제 생산능력이 크게 향상된 형질전환체 바실러스 섭틸리스 KFCC-10880 균주와 이 형질전환체를 사용하여 발효에 의해 아밀라제를 생산하는 방법에 관한 것으로 아밀라제를 고수율로 수득할 수 있는 유용한 방법이다