일반기술

미생물에 의한 5-크산토필의 제조방법

본 기술은 브레비 박테리움 암모니아 게네스의 특수한 변이주에 의해서 탄소원 및 질소원, 기타 미생물에 유용한 유기 및 무기영양원을 함유하는 배지에서 호기적인 배양을 하여 5-크산틸산을 공업적으로 제조하는 방법에 관한 것이다.본 기술의 목적은 5-크산틸산의 생산능이 우수한 균주를 검색하는 것이며, 이미 브레비박테리움 암모니아게네스의 특수한 변이주 MW-4768-8이 개발된 바 있는데, MW-4768-8주는 발효진행중 복귀변이주가 발생한다는 것이 발견되어, 복귀변이주가 발생하지 않는 유전적으로 안정된 균주의 개발에 의해서 생산성을 더욱 향상시키고자 하였다.본 기술에서의 변이주 브레비박테리움 암모니아게네스 MW-4768-2471주가 친주 및 종래의 여러 변이주와 특별히 다른 생리학적 특성은 아데닌 생육촉진, 구아닌 요구성, 라이소자임 감수성, 슬파구아니딘 내성을 가지고 있다는 점, 장시간의 액체배양에 의해서도 복귀 변이주가 전혀 발생하지 않는 유전적으로 안정된 균주로서 5-크산틸산의 생산성이 대단히 높다는 점으로 요약될 수 있다5-크산틸산은 핵산 생합성 대사과정의 중간물질로 정미성을 가지고 있으며, 특히 핵산조미료로 많이 사용되는 5-구아닐산의 제조에 전구물질로 사용된다. 종래 5-크산틸산의 미생물에 의한 제조 방법은 대부분의 미생물 변이주들이 5-크산틸산이외의 핵산물질 5-이노신산, 히포크산틴, 구아노신, 크산틴, 크산토신 등을 다량 부생시키거나 생산능이 낮았다. 본 기술의 특수한 변이주 MW-4768-2471을 효과적으로 분리한 변이처리 및 선별방법은 다음과 같다. MW-4768-871주를 30℃, 12시간 배양한 균체를 인산 완충액에 잘 현탁시킨 후 자외선 등으로 조사하고, 배지에 30℃에서 7일간 배양한다. 생육한 균집락을 취하여 각각 배지에 식균한 후 30℃에서 5일간 진탕 배양후 흡광도 조사에 의해서 생육도를 조사한다. 이중 생육이 가장 적은 균주만을 선발하여 다시 슬파구아니딘 내성 및 변이복귀 발생여부를 조사한 후 생산능 시험에 의해서 생산능이 가장 우수한 본 기술의 변이주 MW-4768-2471이 최종 분리되었다.배양 종료후 이미 알려진 이온교환 수지처리 혹은 활성 탄소에 흡착, 용리하므로 배약액에서 5-크산틸산을 회수할 수 있다