일반기술

반응특이성이 향상된 중합효소 연쇄반응용 튜브

PCR용 튜브 또는 원심분리용 튜브 내측면에 PCR에 필수 성분인 마그네슘클로라이드, 데옥시뉴클레오사이드 트리포스페이트, 프라이머 및 열배 증폭 완충액에서 선택된 1종 이상을 비이온성 계면활성제와 혼합한 후, 튜브 내측면에 피페팅하고 미리 녹여둔 왁스로 코팅하여 반응의 특이성이 향상된 PCR에 사용되는 튜브를 제조한다. 또한 제조된 튜브는 DNA를 증폭시키고 핵산서열을 판독하기 위한 키트 제조에 이용될 수 있다.본 기술은 중합효소 연쇄반응(PCR)을 수행하는데 사용되는 PCR용 튜브의 특이성을 높이기 위해, 왁스를 이용하여 하나 또는 둘 이상의 반응 필수 성분을 튜브의 벽면에 코팅함으로써, 바람직하지 않은 부반응이 감소된 PCR에 사용되는 튜브를 제공한다.일반적인 PCR을 이용하여 단일카피의 표적 DNA를 증폭, 검출하는데 있어서 주요한 장애가 되는 부반응의 대부분은 PCR이 진행되기 전 실온에서 몇십초 이내에 일어나는데, 이 부반응을 최소화하기 위해 고안된 것이 핫스타트 PCR이다. 이 핫스타트 방법보다 더 진보한 방법은 PCR의 반응성분들중 데옥시뉴클레오사이드 트리포스페이트나 열안정성 중합효소를 왁스메디움 펠렛으로 제조하는 것이다. 그러나 왁스메디움 펠렛 제조에 다섯 단계의 제조공정이 요구되며, 또한 연구용이나 진단키트 등에 포함시켜 사용하기에 왁스 펠렛은 직접 다른 반응성분과 함께 반응튜브에 넣어야 하기 때문에 오염이나 분리 보관해야하는 문제점이 있었다.중합효소 연쇄반응(PCR)은 두개의 올리고뉴클레오타이드 프라이머가 반대편가닥에 하이브리다이즈되어 표적DNA의 원하는 영역을 효소적으로 합성해 나가는 in vitro 방법이다. 주형의 변성, 프라이머 결합, DNA중합효소에 의해 결합된 프라이머가 연장되는 일련의 반복되는 과정이 일어나며, 프라이머의 5-말단에 의하여 중합이 끝난 특이 분절체가 기하급수적으로 축적되며, 합성되는 DNA의 카피수는 매주기마다 약 2배씩 증가한다. 이런 식으로 PCR이 30주기가 시행되면 약 10억배의 증폭이 일어난다.본 기술에서는 PCR 반응 튜브 벽면에 반응시 필수성분중 하나 또는 두 가지 이상을 피펫팅한 후 그 위에 왁스로 코팅함으로써 반응에 필요한 나머지 성분을 반응튜브에 넣고 반응을 수행하면, 적어도 왁스가 녹는 온도가 되어야 정성적인 반응이 시작되기 때문에, 기존의 PCR에서와 같이 왁스가 녹는 온도이하에서 일어날 수 있는 부반응을 제거시킴으로써 반응의 특이성을 증가시켰다. 본 튜브는 종래의 오염과 분리보관 등의 문제가 완전히 해결되어 특히 진단키트용으로 우수한 장점을 가진다.응용분야는 핵산의 서열분석에 이용될 수 있고, RNA 표적서열의 상보적인 DNA를 증폭하는 데에도 적용가능할 뿐만 아니라 클로닝을 목적하는 유전자는 증폭에도 이용할 수 있다. 또 다른 측면으로 병의 진단이나 키트화에 이용할 수 있는데, 예를 들면, 병원성 세균인 결핵균, MRSA균, 위궤양을 야기하는 헬리코박터 파이로리, 클라미디아 트라코마티스의 진단에, 그리고 병원성 바이러스인 에이즈바이러스, 간염바이러스, 감기바이러스 등의 진단키트의 구성성분으로 도입될 수 있다. 더불어 법의학분야에서도 도입 가능한 기술이다