일반기술

인간 혈장 알부민 발현벡터를 함유한 형질전환 효모 사카로마이세스 세레비시에를 이용한 인간 혈장알부민의 제조 방법

효모 사카로마이세스 세레비시에에서 재조합 인간 혈장알부민을 효율적으로 생산하기 위한 고효율 알부민 발현벡터 조립 및 이를 함유한 형질전환체의 배양 방법에 관한 것이다. 본 기술에서는 인체에 대해 병원성이 없고 내독소를 생산하지 않는 GRAS 미생물이며 현재 여러 효모 시스템 중에서 숙주-벡터 시스템이 가장 잘 확립되어 있는 효모 사카로마이세스 세레비시에를 숙주로 하여 분비 발현율이 우수한 재조합 알부민 발현 벡터를 개발하고 이로써 알부민 단백질을 높은 발현율로 생산할 수 있는 배양조건을 확립하고자 하였다. 이에 본 기술은 효모 사카로마이세스 세레비시에에서의 알부민 발현 벡터들을 제조하는 과정과 상기 발현 벡터를 함유한 효모 형질전환체의 선별, 이로부터 재조합 인간 혈장 알부민의 발현을 극대화하고 동시에 분비된 HSA의 분해를 최소화하여 고농도로 축적된 재조합 인간 혈장 알부민을 생산하는 공정으로 구성된다. 본 기술에 따르면 조립된 HSA 발현벡터로 형질전환된 효모균주를 완충용액이 첨가된 배지에서 배양하면 고효율로 발현분비된 재조합 HSA 단백질을, 분해되지 않은 완전한 형태로 배지에 축적된 상태로 얻을 수 있어, 의약산업상 매우 유용한 기술이 될 것이다인간 혈장알부민(HSA)은 585 개의 아미노산으로 이루어진 분자량 66.6 kDa 크기의 단백질이다. 혈장 단백질 함량의 약 60%를 차지하는 알부민은 혈장의 삼투압을 유지하는 역할과 더불어 지방산, 담즙 색소, 아미노산, 스테로이드 호르몬, 금속 이온들을 운반하는 역할을 한다. 알부민은 혈장 확장액의 대체용액으로 또는 출혈시 혈액보충액으로 사용되고 있어 의료학적으로 그 수요량이 크게 증가하고 있다. 현재까지 인간 혈장알부민은 혈액으로부터 분리 정제한 것을 주로 사용하고 있으나, 병원균이나 바이러스의 오염에 의한 안정성 문제가 최근 크게 대두되고 있어서 재조합 알부민의 대량생산이 절실히 필요하게 되었다. 본 기술은 효모 사카로마이세스 세레비시에 유래의 프로모터와 알부민 자체 또는 효모 유래의 분비 시그날을 포함한 알부민 cDNA를 포함한 알부민 발현벡터의 조립, 이를 함유한 형질 전환 효모의 선별, 완충액 또는 질소원의 첨가로 인해 배지 pH를 5-6으로 유지함으로써 형질전환체에서 발현분비된 알부민의 분해를 최소화시켜 인간 혈장알부민을 고효율로 배양 생산하는 방법으로써, 본 기술에 의해 재조합 알부민의 대량생산이 가능해 진