일반기술

비A 비B 형 간염진단방법 및 백신

비(非)A 비(非)B형 간염바이러스 항원을 코드하는 신규 상보유전자(cDNA)를 제작하여 클로닝하고 이 유전자를 이용하여 생산된 신규 단백질 항원을 이용한 비A 비B형 간염 백신 및 비A 비B형 간염 관련 항체의 면역학적 검출법에 관한 기술이다. 비A 비B형 간염 백신이나 진단은 그 원리가 항원-항체간의 반응을 이용하는 것이기 때문에 환자가 현재 감염된 바이러스와 이질성을 나타내는 바이러스 유전자로부터 얻어지는 항원단백질을 그 항체의 진단시약이나 백신의 원료로 사용할 경우에는 진단의 정확도가 낮아지거나 그 백신의 효능성이 떨어지는 문제점이 발생한다. 즉, 진단 및 백신에 이용되는 비A 비B형 간염 항원단백질을 그 지역이나 국가의 특성에 맞게 상동성을 나타내는 비A 비B형 간염바이러스 유전자에 의해 코드된 항원단백질을 이용하여야 한다. 따라서 본 기술에서는 지역적 특성을 고려하여 한국인에게 감염된 비A 비B형 간염 바이러스의 유전자 정보를 이용하여 유전 공학적으로 생산한 항원 단백질을 진단시약 및 백신의 원료로 사용하고자 하였으며, 이를 위하여 한국인 보균자들의 혈액으로부터 비A 비B형 간염 바이러스 유전자를 클로닝하여 비A 비B형 간염 바이러스의 캡시드(capsid)영역과 엔벨롭(envelope)영역을 코드하는 신규 유전자를 제작하였다. 본 기술에 의해 비A 비B형 간염환자의 혈액에서 분리한 바이러스로부터 제작된 신규 유전자를 토대로 유전공학적 방법으로 생산한 신규 캡시드 및 엔벨롭 항원 단백질을 비A 비B형 간염 바이러스 항체의 진단시약 및 백신으로 이용하면, 염기서열 및 아미노산 구성의 차이에서 기인한 종래 면역진단법에서의 낮은 정확도를 개선하고 보다 정밀한 진단결과를 얻을 수 있게된다.비A 비B 형 간염이란 주로 수혈에 의해 감염되며, 만성간염, 간경화 및 간암으로의 이행율이 A형이나 B형 간염에 비해 6-10배나 높은 질병이다. 1988년 발견된 비A 비B형 간염바이러스는 약 9400개의 뉴클레오티드로 구성된 RNA 바이러스로서, 구조단백질 및 비구조 단백질에 대한 유전자가 클로닝되었고 이 유전자가 유래된 비A 비B형 간염 바이러스를 HCV(hepatitis C virus)로 명명하였으며, 클로닝한 이 바이러스의 cDNA를 적절한 플라스미드 벡터에 도입시킨 후 효모에서 발현시켜 얻은 HCV항원 단백질을 혈액중의 비A 비B형 간염 바이러스에 대한 항체의 검출이나 백신으로 사용하는 것이 제안되었다. 그러나 염기서열이 20-30% 정도 상당히 다른 비A 비B형 간염바이러스의 유전자가 클로닝됨으로써, 일정지역이나 국가 단위내에서의 보균자에 감염되어 있는 비A 비B형 간염 바이러스의 유전 정보 또는 이에 코드되는 항원 단백질들은 서로 상동성을 나타내지만 다른 지역이나 국가 단위에서 감염된 비A 비B형 간염 바이러스와는 상당부분 이질성을 나타내는 것으로 발견되었다. 이에 본 기술은 비A 비B형 간염 항원 단백질을 코드하는 유전자 단편과 이 유전자 단편을 지니는 재조합 플라스미드 및 이 재조합 플라스미드로 형질전환된 숙주 세포를 제공하며, 또한 형질전환체로부터 얻은 캡시드, 엔벨롭 및 비구조 단백 영역 항원 폴리펩티드와 궁극적으로 정확도가 보다 높은 비A 비B형 간염 바이러스의 검출방법 및 백신을 제공한다