일반기술

활성형 인간 과립구 콜로니 자극인자의 정제방법

숙주로부터 생성된 봉입체(inclusion body)형태의 인간 과립구 콜로니 자극인자(hG-GSF)를 산 침전법 및 반복적인 칼럼 크로마토그래피를 행하여 정제하는 방법이다. 종래 hG-GSF의 정제방법들은 소규모 실험실 수준에 적합한 것일 뿐으로 공정규모, 공정효율 및 비용 등이 전혀 고려되지 않아, 큰 규모로의 산업적 목적으로 이용하기에는 매우 복잡하고 비용 또한 많이 요구되며, 또한 오염물질의 존재 여부의 확인도 이루어지지 않았다는 문제점을 지니고 있다. 이에 본 기술은 대장균으로부터 추출한 봉입체를 카오트로픽제 등으로 용해시킨 후, 활성화 공정을 통하여 활성형으로 전환시켜 얻은 hG-GSF 봉입체 용액을 출발물질로 하여, 용해액으로부터 대부분의 대장균 유래 단백질과 불활성형의 hG-GSF를 산 침전법을 이용하여 1차 제거하였고, 이에 따라 이후의 칼럼 크로마토그래피 공정을 단순화시킬 수 있었으며 소규모의 칼럼을 통해서도 다량의 순도 높은 활성형 hG-GSF를 회수할 수 있었다. 즉, 산 침전법을 도입함으로써 전체 공정을 단순화시키고 이에 따라 공정효율을 높이고 공정 비용이 크게 절감되는 효과를 얻을 수 있었고, 임상용으로 적합한 고수율, 고순도의 활성형 hG-GSF를 정제할 수 있었다hG-GSF는 조혈계에 작용하는 사이토카인으로 골수의 다기능 조혈간세포(pluripotent hemopoietic stem cell)로부터 과립구 세포와 거식 세포 등으로의 분화 및 성숙을 유도 조절하며, 특히 과립구 세포중 호중구 세포의 증식과 활성을 촉진함으로써 암 화학요법에 의한 호중구 감소증, 골수이식시 호중구 증가촉진 등에 임상적으로 유용하다. 대장균으로부터 추출한 hG-GSF의 봉입체는 불활성형이므로 임상적으로 사용하기 위해서는 활성화 공정을 필수적으로 거쳐야만 하는데, 활성화 공정중 중합체 또는 변이체 등의 불활성형 hG-GSF가 계속 잔존할 우려와 숙주 세포인 대장균으로부터 유래된 단백질 및 DNA도 다량 포함되어 있을 우려가 있으므로, 이들 불순물을 완전히 제거하여 최종 활성형 hG-GSF만을 얻기 위하여서는 여러 단계의 정제방법을 이용해야만 한다. 그러나 공정의 규모가 확대되는 산업적 이용의 경우, 칼럼 크로마토그래피의 규모가 커지고 그 사용 횟수가 증가되어 공정 비용에 커다란 영향을 미치게 되는 문제점이 나타난다. 이에 본 기술은 활성형 hG-GSF의 정제 공정을 단순화하여 공정 비용을 감소시키면서도 높은 순도의 hG-GSF를 얻을 수 있는 정제 방법을 제공한다. 본 기술로 얻은 최종 정제액은 내독소, 대장균 유래 단백질 및 DNA, 불활성형의 hG-GSF가 완전히 제거되어 임상용으로 사용하기에 적합한 고순도의 활성형 hG-GSF 가 된다