일반기술

인간 면역결핍 바이러스-1의 표면 단백질 지피41에 대한 단일클론 항체, 이를 생산하는 융합세포주 및 그의 제조방법

인간 면역결핍 바이러스(HIV-1)에서 항원성이 높은 부위인 표면 단백질 gp41에 대한 단일클론 항체, 이를 생산하는 융합세포주로서, HIV-1 표면 단백질 gp41중의 MAP-1의 합성 펩타이드를 마우스에 면역화시켜 융합세포주를 제조하고 이로부터 펩타이드의 아미노산 서열에 높은 특이성을 보이는 마우스 단일클론 항체를 분리하여 그의 항원 특이성 등을 확인함으로써 HIV-1 감염을 효과적으로 진단하는 항체를 얻는다. 우선 HIV-1이 표면 단백질 gp41중 아미노산 번호 584-618 서열의 35개 아미노산으로 이루어진 직쇄상 펩타이드 2개를 포함하는 MAP-1 합성 펩타이드를 설계하여 제조한 다음, MAP-1 합성 펩타이드를 이용하여 마우스를 면역화시키고 이로부터 추출한 비장세포와 마이엘로마 세포를 융합시킨 후 MAP-1 합성 펩타이드 및 HIV-1 표면 단백질 등에 특이성을 보이는 세포 클론을 효소면역측정법으로 선별함으로써, HIV-1의 표면 단백질 gp41을 특이적으로 인식하는 단일클론 항체를 제조하는 방법이다.단일클론 항체는 다양한 반응 시약을 포함하는 HIV-1 항원 또는 항체 진단키트 등을 개발하는데 이용될 수 있으므로, 면역결핍 질환 등을 효과적으로 진단할 수 있다후천성 면역결핍증(AIDS)을 유발하는 주요한 병원체로 알려진 HIV-1은 생체에 감염되는 경우, 바이러스의 표면 단백질인 gp120 단백질이 생체 면역계에 존재하는 T세포에 있는 CD4에 부착하고 이는 다시 표면 단백질 gp41과 융합하는 과정 등을 거쳐 바이러스 입자가 세포내로 들어간다고 알려져 있다. AIDS를 진단하기 위하여 HIV 항체 또는 항원을 검색하는 효소면역측정법이 많이 활용되는데, 실제로 HIV-1의 gp41 단백질, gp36 단백질 및 이들로부터 유래한 펩타이드들이 항원으로 이용되었다. 그러나, 재조합 단백질 항원들은 정제 과정이 복잡하여 가격이 비싸고, 펩타이드 항원은 비용은 저렴하나 코팅 효율과 항원성이 낮은 단점이 있었다.본 기술은 면역화에 사용되는 펩타이드를 다가지 항원 펩타이드(multiple antigenic peptide, MAP) 형태로 합성하여 바이러스 항체를 검색하는 강력한 코팅 항원뿐만 아니라, 백신 등을 개발하는데 사용되는 효과적인 항원이 될 수 있도록 제조하였다.제조된 단일클론 항체는 알코올 분해효소와는 전혀 반응하지 않는 반면, HIV-1 gp41 펩타이드를 포함하는 HIV-1 gp160 단백질과는 특이적으로 반응하므로 마우스 융합세포주가 생산하는 단일클론 항체는 사람의 혈액 내에 존재하는 HIV-1의 표면 단백질 항원을 검색하는데 사용될 수 있다. 또한, 이를 AIDS 환자의 혈청에 존재하는 HIV-1 표면 단백질 gp41에 대한 항체와 경쟁적으로 반응시키면 환자 혈청 내의 상기 항체의 농도를 결정할 수 있는 장점이 있다. 따라서 후천성면역결핍증, 면역결핍질환등을 진단하는 데 유용하게 이용될 수 있다