일반기술

인간 면역결핍 바이러스의 덮개 단백질인 P24 에 대한 단일클론항체, 이를 생산하는 융합세포주 및 그의 제조방법

인간 면역결핍 바이러스-1(HIV-1)의 주요한 덮개(major capsid) 단백질 p24 에 대한 단일클론 항체, 이를 생산하는 융합세포주와 p24의 일부 아미노산 서열을 포함하는 다가지 항원 펩타이드에 관한 것으로, 항-폴리클론 HIV-1 p24 염소 항체에 대하여 매우 반응성이 높은 HIV-1 p24 단백질의 합성 펩타이드를 이용하여, p24 단백질에 높은 특이성을 나타내는 마우스 단일클론 항체를 분리하여 그의 항원 특이성 등을 확인함으로써 HIV-1 감염을 진단하는 항체를 얻는다. HIV-1 p24 단백질중 가장 항원성이 높은 부분인 아미노산 번호 202-221의 서열을 포함하는 직쇄상 펩타이드를 4개의 가지로 된 항원 펩타이드 MAP-7을 마우스에 면역화시키고 이로부터 추출한 비장세포와 마이엘로마 세포를 기존의 방법으로 융합시킨 후 마우스 단일클론 항체를 효소특정법으로 선별함으로써, HIV-1 p24 단백질을 특이적으로 인식하는 단일클론 항체를 제조한다. 마우스 융합세포주가 생산하는 단일클론 항체는 HIV-1 p24 단백질을 인식하는 높은 특이성을 가지므로, 상기 단일클론 항체 및 HIV-1 항원을 이용한 진단키트의 개발로 면역결핍 질환 및 HIV 감염 초기의 환자를 효과적으로 진단하는데 유용하게 이용할 수 있을 것이다후천성 면역결핍증(AIDS)을 유발하는 주요한 병원체로 알려진 HIV-1의 감염여부 진단에는 HIV의 항체항원을 검색하는 효소면역측정법이 많이 활용되는데, 종래의 재조합 단백질 항원들은 정제 과정이 복잡하여 가격이 비싸고, 또 펩타이드 항원은 비용은 저렴하나 코팅 효율과 항원성이 낮은 단점이 있었다.한편 HIV-1 p24는 HIV 유래의 RNA와 복제 효소 등을 보호하는 덮개 역할을 하며, 바이러스 입자의 형성에 중요한 역할을 담당하며, HIV의 감염 초기에 HIV-1 p24 단백질 항원의 농도가 매우 높아지는 것으로 알려져 있다. 따라서 HIV-1 양성 혈청내 p24 단백질의 존재는 HIV 감염을 알려주는 지표가 된다. 본 기술에서는 단일클론 항체가 HIV-1 p24(202-221) 합성 펩타이드 및 p24 단백질에 대하여 선별적으로 높은 항원 인식능력을 나타냄을 확인하였고, MAP-7 합성 펩타이드 및 p24 단백질과 특이적인 효소면역반응을 수행함을 확인하였다. 또한 마우스 융합세포주가 생산하는 단일클론 항체는 사람의 혈액내에 존재하는 HIV-1 의 p24 단백질 항원과 플레이트에 코팅한 p24 펩타이드를 경쟁적으로 반응시키면 HIV 환자 혈청내의 p24 항원의 농도를 결정할 수 있을 뿐만 아니라 HIV 진단에 이용될 수 있다. 따라서 본 단일클론 항체는 HIV-1 p24 단백질 항원 진단키트를 개발하는데 이용될 수 있다