일반기술

사람 혈구에 대한 생쥐 응집 단일클론항체의 FAB 부위 유전자 및 그의 염기서열

사람 혈구에 대한 생쥐 응집 단일클론 항체의 Fab 부위와 이를 암호하는 중쇄와 경쇄 cDNA 유전자, 그들의 염기 서열 및 이를 포함하는 플라스미드 벡터에 관한 기술이다.본 기술은 인간화 항체 등을 개발하는데 유용한 사람 혈구에 대한 생쥐 응집 항체 Fab 부위의 유전자를 생쥐세포 클론 HAG 12에서 클로닝하여 그의 염기서열을 결정하고 그의 특성을 확인함으로써 바이러스 감염을 효과적으로 예방하고 진단하는 방법이다.본 기술은 생쥐세포 클론 HAG 12로부터 RNA를 추출하여 사람 혈구에 대한 생쥐 응집 단일클론 항체의 Fab 부위를 암호하는 경쇄 및 중쇄 유전자의 cDNA를 합성하고, 그 아미노산 서열 및 염기서열을 분석하여 제공하고 있으며, 상기 cDNA 유전자들을 플라스미드 벡터에 각각 클로닝하여 제조된 플라스미드 벡터 pYBM-AL 및 pYBM-AH를 제공한다. 본 기술에 의하면 상기 cDNA 유전자는 기능적이므로 이를 인간 항체 유전자와 결합시켜 발현시키면 HIV, HBV, CMV 및 기타 바이러스 등 혈액내 항원을 진단하는데 유용하게 사용할 수 있다인간의 질병에 대한 진단이나 치료에 있어서 항원-항체 반응을 이용한 면역학적 방법이 많이 이용되고 있다. 근래에는 단일클론 항체를 이종의 항원을 화학적으로 항체에 결합시킨 복합 항체의 형태나 항원과 결합하는 부위의 유전자를 조절한 형태 등의 키메라 항체로 개량하려는 시도들이 있어, 질환의 진단이나 치료에 있어 그 비중이 증가되고 있다. 한편 인간화 항체는 생쥐단일클론 항체의 가변영역 중에서 항원과 직접 결합하는 CDRs 영역을 사람 항체에 이식시켜 제조할 수 있다. 이를 위해서는 생쥐 항체 가변영역을 얻고 이를 유전자 재조합 방법으로 사람 항체의 유전자와 융합시켜 동물세포에서 발현시킨다. 본 기술의 사람 혈구에 대한 생쥐 응집 단일클론 항체 유전자의 항원-결합 절편 부위의 중쇄와 경쇄를 암호하는 cDNA는 모두 항체의 일반적인 특성 및 그 이소타입에 상응하는 염기서열들을 소유하고 있어 이들 항체 cDNA가 기능적인 것임을 시사해준다. 본 기술에서 개발된 cDNA를 이용하여 공지의 방법에 따라 생쥐 단일클론 항체의 Fab 부위 중에서 항원과 직접 결합하는 CDRs 영역을 사람항체에 이식시켜 인간화 항체를 제조하면, 인체에 주사하였을 때 면역반응을 최소화할 수 있고 인간의 적혈구에 결합하여 응집반응을 일으키는 재조합 단일클론 항체를 대량 생산할 수 있으며, 이것을 이용하여 사람 적혈구와 관련된 HIV 등의 혈액내 항원을 진단하는 인간화 항체를 개발하는데 사용할 수 있다