일반기술

B형 간염바이러스의 다른 두 항원을 동시에 인식하는 이중특이항체 및 그의 제조방법

B형 간염바이러스(HBV) 표면항원인 S 항원과 프리-S2 항원을 동시에 인식하는 이중특이항체와 그의 유전자, 이 항체를 생산하는 세포주 및 이를 이용하여 간염 항체를 얻는 방법이다. 본 기술은 두 개의 HBV 표면항원에 대한 항체를 이용하여 이들의 항원을 인식하는 영역을 동시에 2개씩 포함하도록 구성된 이중특이 항체를 개발하고, 이들의 HBV 입자에 대한 결합력 등이 기존의 단일클론 항체에 비하여 탁월하게 높아 HBV 입자를 효율적으로 중화시키도록 함으로써 효과적인 간염 예방제 및 치료제를 제공한다. 본 기술은 HBV의 S 항원을 인식하는 부위, 연결 펩타이드, 프리-S2 항원을 인식하는 부위 및 사람 유래의 항체 Fc 부위로 구성되어, 이를 동시에 인식할 수 있는 간염 항체의 유전자를 포함하는 발현 벡터를 제조하고, 이를 중국 햄스터 난소유래(CHO) 세포에 형질전환시킨 다음 메토트렉세이트를 포함하는 배지를 이용하여 간염 항체를 대량 생산하는 세포주를 선별하는 과정으로 이중특이성을 가지는 간염 항체를 제조하여 정제하는 새로운 간염 항체의 제조방법이다. 본 기술에 의하면 상기 이중특이항체는 4가 항체로서 HBV 입자의 프리-S2 항원 또는 S 항원 중의 어느 하나와도 반응하며, 그 결합능이 탁월하여 기존의 단일클론 항체보다도 더 효과적으로 HBV 입자를 면역침강시키므로 더욱 우수한 간염의 예방 및 치료제로서 유용하게 사용될 수 있다HBV는 간염의 주된 병원체인 DNA 바이러스로서, 사람에 침입하여 급성 또는 만성 간염을 일으키는데, 이러한 간염이 악화될 경우 간경화 또는 간암으로 이행된다. HBV 입자는 S 항원, 프리-S1 항원, 프리-S2 항원의 3가지 표면항원을 가지는데, 이들 항원은 바이러스를 중화하는 항체 또는 그 외 보호 항체의 생산을 유도한다. 따라서 상기 표면항원을 이용하여 HBV 감염을 예방하거나 치료하려는 많은 연구들이 시도되어 표면항원에 대한 단일클론 항체 등이 다양하게 생산되었다. 그러나, 아직까지 HBV 감염시에 S 항원 또는 프리-S 항원에 대한 두 가지 이상의 항체를 혼합하여 사용한 연구 또는 상기 두 항원을 함께 인지하는 항체를 이용한 연구는 보고된 바 없었다. 이에 본 기술에서는 B형 간염 바이러스의 다른 두 항원을 동시에 인식하여 효과적으로 바이러스를 중화시킴으로써 간염의 예방 및 치료에 사용될 수 있는 이중특이항체를 개발하였다. 본 기술에의 이중특이항체를 전기영동으로 분석한 결과, 환원된 항체의 분자량은 75kDa이고 환원시키지 않은 항체는 보통의 항체와 분자량이 동일하여 다이머 형태였다. 본 기술의 이중특이항체 TBSIg는 4가(tetravalent)의 항체로서 S 항원과 프리-S2 항원에 모두 결합하는 탁월한 이중특이성을 나타내었다. 또 본 이중특이항체 TBSIg는 HBV 입자와 친화도가 높아 HBV 입자를 면역침강시켰으며, 그 결합능은 대조군에 비해 약 4배정도 더 높게 나타나 매우 효율적인 항체임을 알 수 있었다