일반기술

p53 항암 유전자를 선택적으로 발현하는 인체 암 세포주 및 그의 제조방법

동물세포에서 p53 항암 유전자를 선택적으로 발현할 수 있는 발현 벡터 및 이를 인체 암 세포주에 형질전환시켜 암억제관련 유전자, 항암제 등을 탐색하는 용도로 사용한다. 테트라사이클린에 의존하는 프로모터 pCMV*-1의 하류에 p53 항암 유전자를 포함하고, 엡스타인바 바이러스 복제기점을 포함하며, 선택 마커로 네오마이신에 대한 내성 유전자를 포함하는 발현 벡터 pDS1293과 엡스타인바 바이러스 복제기점에 작용하는 EBNA-1 단백질의 유전자를 포함하고, 선택마커로 하이그로마이신 B에 대한 내성 유전자를 포함하는 발현 벡터 pETH를 제조하고, 이 발현 벡터 pDS1293 및 pETH를 순차적으로 인체 방광암 세포주에 형질전환시켜 테트라사이클린을 함유하는 배양액에서 p53 항암 유전자를 선택적으로 발현하는 암 세포주 EJ-p53-4를 선별하였다. 인체 암 세포주는 테트라사이클린에 의존하여 p53 항암 유전자를 효과적으로 발현시키므로 p53 유전자에 의하여 조절되는 암억제 관련 유용 유전자 및 새로운 항암제의 탐색에 널리 사용될 수 있다p53 유전자는 항암 유전자로서, 50-60%의 암 환자의 경우 이 유전자에 돌연변이 또는 결손이 일어나 p53 단백질이 제대로 된 활성을 나타내지 못하여 암이 유발되는 것으로 보고되어 있다. 또, p53 항암 유전자의 기능을 상실하고 있는 암세포를 정상 p53 항암 유전자로 형질전환시키면 형질전환된 암세포는 사멸되거나 암증식이 중단된다, 이러한 p53 항암 유전자 및 그 단백질의 유용성이 널리 알려져 전세계적으로 p53 항암 단백질을 이용한 항암 유전자 요법 및 새로운 항암제 등의 개발이 시도되고 있다. 이에 p53 항암 유전자를 선택적으로 발현하여 새로운 항암 표적인자 및 항암제 등을 탐색하는데 유용하게 사용될 수 있는 인체 암 세포주를 제공한다.발현 벡터는 p53 항암 유전자가 고효율로 세포 내에 도입되게 하는 엡스테인바 바이러스의 복제기점 및 선택 마커로 네오마이신에 대한 내성 유전자를 가지고 있으며, p53 항암 유전자를 선택적으로 발현하는 암 세포주의 형태를 테트라사이클린이 포함된 배양액 등에 각각 2주일 동안 배양한 다음 김사 용액으로 세포를 염색하여 현미경으로 관찰하여 본 기술의 암세포주를 선별하였고, 웨스턴 블럿을 수행하여 p53 유전자의 선택적인 발현을 확인하였다