일반기술

자궁경부암 항암제의 기능검색 및 스크리닝 방법

사람 파필로마바이러스(HPV) 16형 E6 단백질의 전사활성능에 의한 암화능을 억제하는 항암제의 효능 검색방법 및 스크리닝 방법에 관한 것으로, 특히 자궁경부암을 유발하는 HPV 16형 E6 단백질의 전사활성능을 검색하는 프로모터 활성 검색용 pRSV-luc 플라스미드가 도입된 SiHa/pRSV-luc 세포주에 항암제를 처리한 후 HPV 16형 E6단백질의 전사활성능을 검색함으로써 항암제의 기능 검색방법 및 스크리닝 방법이다. 즉, HPV 16형 E6 단백질에 의해 활성화되는 프로모터 유전자를 4종의 바이러스인 RSV, SV40, HIV, CMV으로부터 얻고, 이 프로모터 유전자와 리포터 유전자로 루시퍼라제 단백질을 암호화하는 유전자를 연결하여 4종의 플라스미드를 제조한 후, 자궁경부암 세포주 SiHa세포에 도입하여 안정한 세포주 SiHa/pRSV-luc 세포주를 제조하고 이 세포주에 여러 종의 항암제를 처리하여 HPV 16형 E6의 발현을 검색함으로써 자궁경부암에 대한 항암제의 효능을 검색하는 방법이다.이 세포주를 항암제로 처리한 후 HPV 16형 E6 단백질의 발현여부만을 검색하는 간단한 공정으로 자궁경부암에 대한 항암제의 치료 효능을 검색하고 나아가 이 세포주를 이용하여 자궁경부암 등의 항암제 스크리닝 방법을 제공할 수 있다자궁경부암은 자궁암의 90%이상을 차지하고 한국 여성에서 발생 및 사망빈도가 가장 높은 악성종양이다. 한편, HPV 16형과 18형은 남녀 생식기, 구강, 피부 등에서 악성종양과 관련되고 특히 여성자궁암의 90% 이상을 차지하는 자궁경부암을 일으키는 주요인자로 작용하는 것으로 밝혀졌으며, HPV 16형과 18형 관련 암 발생에 중추적인 역할을 할 것으로 예상되는 유전자는 E6과 E7로서, 최근 E6 단백질은 암억제 단백질 등과의 결합하는 기능 이외에 여러 유전자의 프로모터 전사활성능을 증가 또는 억제하는 기능이 알려지고 있다. 따라서 이 E6 단백질의 전사활성능과 암화 기전은 HPV에 의한 발암기작 연구 및 효과적인 자궁경부암 항암치료제를 개발하는데 있어 매우 중요하다고 할 수 있다. 이에 HPV 16형E6 단백질의 암화능과 관련된 전사활성능을 분석할 수 있는 pRSV-luc 플라스미드를 선별하고 자궁경부암 세포주인 SiHa에 이입시켜 전사활성이 증가되는 안정한 세포주 SiHa/pRSV-luc를 얻었다. 항암제인 카보플라틴, 마이토마이신 C, 시스플라틴을 처리한 후 전사활성능의 변화를 검색한 결과, 세 항암제 모두가 pRSV-luc 전사만을 일관성있게 억제하였으며, 또 E6의 발현에 미치는 항암제의 영향을 검색한 결과 상기 세 항암제 모두 E6의 발현을 억제하는 것으로 나타나, 본 기술이 매우 뛰어난 자궁경부암 항암제 효능검색 및 스크리닝 방법임을 알 수 있다