일반기술

인간 알파 S1 카제인 유전자로 형질전환된 대장균

인간 알파s1 카제인을 발현시키는 플라스미드를 제조하고, 이 플라스미드를 대장균에 형질전환시킨 후 형질전환체로부터 모유의 주단백질인 카제인 중의 하나인 인간 알파s1 카제인의 재조합 단백질을 수득한다. 사람 유선 cDNA 라이브러리로부터 알파s1 카제인 유전자를 분리하여 PCR로 증폭한 후 플라스미드 pET-22b(+)에 클로닝하여 플라스미드 pHαs1C1 및 pHαs1C2를 제작한 다음, 플라스미드로 대장균 BL21(DE3)을 형질전환시키고 이를 배양하여 발현된 재조합 인간 알파s1 카제인 중 pHαs1C2에 의해 발현된 재조합 인간 알파s1 카제인을 고정화 금속친화성 크로마토크래피로 정제한다.카제인은 모유에 함유되어 있는 단백질중 40%를 차지하고, 분해물은 오피오이드, 항혈액응고성, 항고혈압성 및 면역조절기능을 제공한다. 포유류의 젖에 함유되어 있는 카제인은 α, β, κ 형태로 구분되는데, 우유에는 알파형이 50%이상 함유되어 있는 반면, 사람의 경우에는 그 양이 적어 종래에는 알파형이 결여된 것으로 알려져 있었다. 1994년에 사람 모유에 알파s1 카제인이 0.06% 함유되어 있음이 보고된 후, 유전자도 클로닝되었으나 그 기능은 아직까지 보고된 바 없었다. 본 기술의 가장 큰 특징은 인간 알파s1 카제인을 발현시키는 두 가지 플라스미드중 pHα s1C2는, 카르복시 말단에 6개의 히스티딘이 붙은 재조합 인간 알파s1 카제인을 발현시키도록 제작하여, 고정화 금속친화성 칼럼크로마토그래피인 Ni-NTA 칼럼크로마토그래피로 용이하게, 그리고 순수하게 정제된 인간 알파s1 카제인을 얻을 수 있는 뛰어난 효과가 있다는 것이다. 본 기술에 의하면 재조합된 인간 알파s1 카제인을 효율적으로 발현시킬 수 있으므로, 사람 모유의 알파s1 카제인 기능 연구 및 생물의약산업상 매우 유용한 것으로 판단된다