일반기술

포스포리파제 씨-감마2를 인지하는 단클론성 항체와 이를 분비하는 융합세포주

포스포리파제 C-감마2 동위효소를 특이적으로 인지하여 결합할 수 있는 단클론성 항체 단백질, 이를 분비하는 융합세포주에 관한 것으로, 세포내 신호전달체계에 있어서 중추적 역할을 하는 효소인 포스포리파제 C-감마2를 생체 또는 병리학적 시료로부터 간편하고 민감하게 검출 및 정량할 수 있는 수단으로서의 단클론성 항체와 이를 균질로 대량 생산할 수 있는 융합세포주 및 이들 융합세포주를 이용한 상기 단클론성 항체를 제조하는 방법이다.즉, 사람의 포스포리파제 C-감마2 동위효소를 순수 분리 정제하고, 이것으로 생쥐(Balb/c)를 면역시킨 후, 이들로부터 비장 세포를 분리하여 생쥐의 골수종 세포인 Sp2/0-Ag14 세포와 융합시킴으로써, 단클론성 항체를 분비하면서 계속적으로 세포배양이 가능한 새로운 잡종 세포주를 개발하고, 이 세포주를 배양하여 그 배양액으로부터 균질의 항체를 대량으로 생산하는 방법이다. 본 기술은 포유동물 세포의 생리 활성, 분화 및 성장 조절을 연구하는 기초 생물학 연구의 좋은 수단으로 이용될 수 있을 뿐만 아니라, 단클론성 항체는 포유동물의 포스포리파제 C-감마2 효소에만 특이적으로 반응하는 성질을 갖고 있으므로, 세포내 신호전달체계에 관한 연구에 응용하여, 암 등 관련질병의 기작을 밝히는데 사용될 수 있다포스포리파제 C는 외부의 신호를 받아 포스파티딜이노시톨 4,5-비스포스페이트로부터 디아실글리세롤 및 이노시톨 1,4,5-트리스포스페이트를 생성함으로써, protein kinase C를 활성화시키고 칼슘 이온을 세포질로 방출하게 하는 등 세포내 현상, 특히 신호전달계의 중심 효소이다.이중 포스포리파제 C-감마 동위효소는 세포의 성장과 분화, 호르몬이나 소화 효소의 분비 및 다른 신호전달체계의 조절에 중추적인 역할을 하고 있으며, 이에 따라 포스포리파제 C-감마 동위효소의 역할과 작용기전 등에 관한 연구가 암, 내분비 및 의약품 연구자들의 관심의 대상이 되고 있다. 항체는 다양한 서브타입 특이적인 2차 항체를 사용한 효소면역측정법에서, 사람의 포스포리파제 C-감마2 동위효소에 대해 생쥐에 생성된 면역 글로불린 M이며, 포스포리파제 C 효소중 분자량 145,000의 포스포리파제 C-감마1 동위효소와는 교차 반응성을 나타내지 않으나, 분자량 140,000의 포스포리파제 C-감마2 동위효소는 특이적으로 인지하였다. 즉, 본 항체는 뛰어난 친화력으로 세포내에 극미량으로 존재하는 포스포리파제 C-감마2 동위효소만을 특이적으로 인지할 수 있으며, 더욱이 소뿐만 아니라 모든 포유동물의 포스포리파제 C-감마2 동위효소에 특이적으로 반응하는 특징을 가지고 있