일반기술

HCV 단백질 분해효소에 의하여 활성화되는 리포터 단백질을 이용한 C형 간염 치료제의 탐색방법

C형 간염바이러스(HCV) 단백질 분해효소의 활성에 의하여 리포터 단백질이 절단되어 활성을 갖도록 만들어진 벡터를 이용한 C형 간염 치료제의 탐색방법 기술이다. 단백질 분해효소의 활성을 저해함으로써, 바이러스에 기인하는 질병중의 하나인 C형 간염을 치료하고, 바이러스의 복제 시스템이나 정제된 단백질 분해효소의 분석시스템을 이용하여 C형 간염 치료제로서 응용될 수 있는 바이러스의 단백질 분해효소 저해제를 탐색하는 방법이다.HCV 단백질 분해효소의 유전자와 리포터 유전자인 분비성의 알칼리성 인산가수분해효소(SEAP) 유전자가 동일한 벡터에 위치하며, HCV 단백질 분해효소의 활성에 의존하여 리포터 단백질이 절단되어 그의 활성을 나타내도록 발현벡터를 제조하고, 이를 포유동물 세포에 전이시켜 배양함으로써 HCV 단백질 분해효소의 저해제를 탐색한다HCV는 비A형, 비B형 간염의 주요 원인으로 , 약 60% 정도의 높은 빈도로 만성간염으로 전이되며, 이 중 20%의 환자에서 간경변증과 간암으로 진전되는 것으로 알려져 있다. HCV에는 두 가지 단백질 분해효소가 존재하는 것으로 알려졌으며, 이 바이러스의 단백질 분해효소는 다단백질의 프로세싱, 바이러스 입자의 성숙 및 바이러스의 숙주 감염에 중요한 역할을 한다.현재 HCV 단백질 분해효소의 저해제 탐색을 위한 효과적인 HCV 복제 시스템이나 정제된 단백질 분해효소의 분석시스템은 아직까지 개발되어 있지 않은 상태이다. 본 기술은 HCV 단백질 분해효소를 코딩하고있는 NS3/NS4A 유전자 부위와 SEAP 유전자를 포함한 발현벡터를 제공하고 있다. 이 발현벡터에서 SEAP 유전자는 HCV의 NS4A/NS4B 절단부위에서 HCV 단백질 분해효소 유전자와 연결되어 있어, 단백질분해효소의 활성이 있을 때만 SEAP의 N-말단 신호서열이 노출되어 SEAP가 분비된다. 따라서, 이 발현벡터로 전이된 포유 동물세포의 배양액에 포함된 SEAP의 활성을 측정함으로써, HCV 단백질 분해효소의 활성을 평가할 수 있다. 본 HCV 단백질 분해효소의 저해제 탐색방법은 민감하고 정량적이며, 간단하고 신속하기 때문에, 이러한 방법으로 선별된 저해제는 HCV의 복제에 필수적인 HCV 단백질 분해효소의 활성을 저해하므로 C형 간염의 치료제로 이용될 수 있