일반기술

변형된 제 1 형 인간 면역결핍 바이러스

변형된 제 1 형 인간 면역결핍 바이러스(HIV-1)를 이용한 항 HIV-1 약제 스크리닝 기술이다. 마커 유전자로 EGFP를 보유하며, 수회에 걸친 계대배양에 의해서도 증식능력을 안정하게 유지하며 손쉽게 검출할 수 있는 변형된 HIV-1을 개발하여, 항 HIV-1 약제를 스크리닝하는 방법을 제공한다. 해파리의 녹색형광 단백질(GFP; Green Fluorescent Protein)이 유전자 전이된 적색-변이된 GFP 변이체(EGFP; red-shifted GFP varient)가 야생형보다 형광강도가 월등히 증가된다는 사실에 착안하여 EGFP를 HIV-1의 검출 마커로서 이용하기 위해, EGFP의 발현 및 증식능력이 있는 변형된 HIV-1을 제조한다. EGFP을 코딩하는 유전자를 포함하는 변형된 HIV-1을 이용함으로써 보다 손쉽고 간편하게 HIV-1에 의해 감염된 세포를 검출할 수 있으며, HIV-1의 감염경로를 효율적으로 추적할 수 있다HIV-1에 감염되면 T 세포의 감소가 진행되어 궁극적으로 후천성 면역결핍증(AIDS)을 일으킨다. 종래 HIV-1의 감염여부를 확인하기 위한 방법으로 클로람페니콜 아세틸트랜스퍼라제 및 개똥벌레 루시퍼라제 유전자같은 마커 유전자를 발현시킬 수 있는 HIV-1 클론이 개발된 바 있는데, 본 기술에서는 HIV-1의 감염 여부를 고감도로 검출할 수 있고, 나아가 감염 경로를 추적하는데 이용하고자 형광강도가 매우 증가된 EGFP를 HIV-1의 검출 마커로서 이용하여 HIV-1 변이주를 개발하였다. EGFP는 바이러스 감염을 검출하기 위한 마커로서 기존에 보도된 바 있는 CAT이나 루시퍼라제에 비해 첫째, 형광 현미경하에서 세포를 관찰하는 것에 의해 간단하게 바이러스에 감염된 세포를 확인할 수 있고, 둘째, EGFP가 조효소나 기질 없이 그 자체로서 형광을 발하기 때문에 세포를 죽이지 않고도 바이러스에 감염된 세포를 확인할 수 있으며, 셋째, 형광 활성화된 세포의 분류 분석법에 의해 바이러스에 감염된 세포를 쉽게 분리해낼 수 있는 장점이 있다. 이러한 특징은 본 기술의 EGFP의 발현능을 갖는 변형된 HIV-1이 HIV-1의 감염경로의 연구 목적에 유리하게 사용될 수 있음을 시사한다