일반기술

검은줄 오갈병 바이러스 조기진단을 위한 핵산 프로브, 그의 제작방법 및 그를 이용한 보독충 조기진단 방법

검은줄 오갈병 바이러스의 cDNA 프로브를 제작하기 위해서는, 검은줄 오갈병 바이러스가 감염된 이병주의 뿌리를 마쇄한 후, 수회에 걸쳐 원심분리하고, 마지막으로 10-40% 수크로스 밀도구배 원심분리를 3회 행하여 순수 바이러스를 수득한다. 얻어진 바이러스로부터 통상의 추출법에 의해 단백질을 제거하여 RNA를 수득하고, 이를 cDNA 라이브러리 제작에 사용한다. cDNA가 시험관내 패키징된 람다 gtII 파지를 이. 콜리(E. coli Y 1088)에 형질전환시키고, 혼성화 방법에 의해 재조합 클론을 선발한다. 한편, 재조합 람다 gtII 파지 cDNA로부터 삽입 DNA를 분리하여 pUC19플라스미드에 연결시키고, 이를 이. 콜리 JM101에 삽입시킨후, 이 cDNA 단편들과 검은줄 오갈병 바이러스의 RNA 단편들을 혼성화함으로써 검은줄 오갈병 간이진단용 핵산 프로브를 선별할 수 있다.본 기술의 검정방법은 검은줄 오갈병 바이러스에 의한 감염여부를 판정하고자 하는 애멸구에서 바이러스 RNA추출하여 니트로셀룰로스 페이퍼에 옮기고, pUC19 플라스미드에 삽입된 검은줄 오갈병 바이러스 DNA를 프로브로 이용하여 반응시킨 다음, X-선 필름으로 현상한다.본 기술은 검은줄 오갈병 바이러스를 조기진단할 수 있는 핵산 프로브 및 이 핵산 프로브를 이용한 바이러스 이병주 및 감염 매개충에 대한 보독여부를 조기에 진단할 수 있는 방법이다. 바이러스에 의한 감염 여부를 진단하는 데는 여러가지 방법이 있는데, 최근에 급속히 발달하기 시작한 분자 생물학 기술은 바이러스의 최저분자인 DNA핵산이 갖는 독특한 성질, 즉 핵산염기의 상보성 및 특정 염기서열에 대한 특이적 결합반응을 이용하여 특정 DNA 단편을 피코 그램 단위로 검정하는 것을 가능하게 만들고 있다.본 기술은 이러한 핵산의 특성을 이용하여 종래의 바이러스 감염 진단방법의 단점을 제거하기 위해, 검은줄 오갈병 바이러스를 특징적으로 검색해 낼 수 있는 핵산 프로브를 제작함으로써 검은줄 오갈병 바이러스 감염여부를 쉽게 확인할 수 있다.