일반기술

암태아성 항원에 대한 단클론성 항체가 특이적으로 인지하는 펩타이드

소화기암 특이 항원인 암태아성 항원(CEA; carcinoembryonic antigen)을 인식하는 단클론성 항체 및 그를 코드하는 DNA의 염기 서열에 관한 기술로서, CEA만을 특이적으로 인지하여 결합할 수 있는 항체를 개발하고, 이를 이용하여 CEA의 에피토프를 확인하고 CEA의 에피토프 및 그의 아미노산 서열이다.본 기술은 인체 대장암 세포주 LS 174T로부터 사람 CEA를 순수 분리 정제하고, 이를 생쥐에 주사하여 생쥐를 면역시킨 후, 면역된 생쥐로부터 비장 세포를 분리한 다음 생쥐의 골수종 세포, 예를 들어, Sp2/O-ag14 세포와 융합시켜 배양이 가능한 새로운 융합세포주를 제조한 다음 배양함으로써 소화기암 특이항원인 CEA를 특이적으로 인지하는 단클론성 항체를 제조하고, 이어서 상기 항체에 특이적으로 결합하는 펩티드를 이용하여 CEA의 에피토프 부분을 선별하고 이들의 아미노산 서열을 확인하는 방법이다CEA는 대장암 조직에서 처음으로 분리된 암 관련 항원으로서 여섯 개의 이황화 결합을 가진 단일 폴리펩티드이고, 40-60% 정도의 당질 잔기로 이루어진 분자량 180-200kDa 정도의 당단백질이다. 또한, CEA는 태아의 대장 점막 이외에도 여러 종류의 소화기 암에서 높게 발현되어 범암종성 항원으로 널리 알려져 있고, 한국인에게 높은 빈도로 발생하는 위암에서도 CEA의 발현이 증대되어 있음이 보고된 바 있다.CEA는 초기에 대장 및 직장암의 특이 표지로 추정되었다. 그러나 정상조직에서도 극소량이 발견되었고, 양성암종이나 다른 종류의 악성종양을 지닌 환자의 혈청에도 존재하는 것이 증명되었다. 따라서, 현재 CEA의 정량법은 대장 및 직장암의 검색, 수술전후 CEA 혈청치의 비교에 의한 암의 재발의 발견 등에 널리 쓰이고 있다.본 기술에서는, 특히 항CEA 79 항체가 특이적으로 인지하는 CEA의 에피토프 부분을 확인하기 위해, Fmoc/고체 상 합성법에 의해 수지비드에 5개씩의 아미노산 잔기를 결합시켜 제조된 1-비드-1-펩타이드 라이브러리를 제조한 후 이를 상기 단클론성 항체와 반응시킨 후, 2차 항체와 결합된 염소 항-마우스 항체를 가하여 결합시킨 후 발색용액으로 발색시켜 상기 항체에 특이적으로 결합하는 펩티드가 결합되어 있는 비드를 선별하고, 상기 비드로부터 펩티드를 분리해낸 후, 아미노산 서열 분석기에 의해 이들의 아미노산 서열을 분석하였다.본 펩타이드들은 소화기암의 특이 항원인 CEA의 에피토프 부분으로서 이들은 소화기 암의 진단 및 치료제의 개발에 이용될 수 있다