일반기술

인간 면역세포에서 포스포리파제 C 활성을 증가시키는 펩티드 및 이를 이용한 면역활성 펩티드 수용체탐색용 프로브

기초 펩티드보다 낮은 농도에서 포스포리파제 C(PLC)의 활성을 특이적으로 증가시킬 수 있는 펩티드 및 여기에 표지물질을 결합시킴으로써 면역 활성화를 일으키는 펩티드 수용체를 탐색할 수 있도록 제조된 면역활성 펩티드 수용체 탐색용 프로브에 관한 것으로서, 펩티드들을 체계적으로 탐색하는 펩티드 혼합물(peptide library) 시스템을 이용, 면역세포 활성화의 초기 신호를 간편하게 측정하여 면역 조절 물질을 탐색함으로써 새로운 면역세포 활성화 펩티드를 탐색하고, 이 탐색된 펩티드를 기초로 D-형 아미노산 치환을 통하여 면역세포 활성화 작용이 있는 여러 종류의 변이체 프로브를 제공하는 것이다. 본 기술은 사람 면역세포인 U266 세포와 사람 림프세포인 U937 세포에서 PLC의 활성을 증가시키는 것으로 알려진 펩티드를 변형시켜 개발된 것으로, 면역세포 PLC의 활성을 증가시키는 펩티드 MKYMPM 또는 WKYMVM 중 6번째 아미노산을 D-형으로 치환시킨 펩티드들과, 상기 펩티드에 동위원소, 바이오틴 또는 형광물질을 결합시켜 펩티드 수용체를 탐색할 수 있는 프로브로 구성되어 있다.면역세포인 T 및 B 임파구들의 활성화 및 분화과정은 생명체의 중요 방어 기능인 면역 체계의 초기 조절에 핵심적인 단계이다. 이들의 초기 활성화는 면역원이나 세포표면의 단백질들이 임파구 세포막의 수용체들과 일련의 적절한 결합을 통하여 세포내로 신호를 전달함으로써 개시되며, 이러한 면역세포들의 초기 활성화에 영향을 미치는 물질들을 찾음으로써 면역 조절제의 개발이 가능할 것으로 생각되고 있다.그러나 면역세포 활성화 신호 전달의 초기 현상에 대한 규명은 극히 최근에야 이루어진 연구들로서, 이를 대상으로 한 체계적인 면역 조절 물질의 탐색이나 개발은 아직 이루어지지 않고 있다.이에 본 기술에서는 수억 종류의 펩티드 서열을 포함하는 펩티드 혼합물을 합성하고, B 임파구의 초기 활성화에 수반되는 포스포이노시티드의 분해에 따른 이노시톨 포스페이트의 생성량을 측정하는 방법에 의해 면역세포 활성화 펩티드를 탐색할 수 있었다. 본 기술의 펩티드 프로브들은 기존의 펩티드와 같이 U266 세포 및 U937 세포에서 PLC를 특이적으로 활성화시키는 면역증강제의 역할을 하며, 세포의 생리활성 및 조절을 연구하는 수단으로 이용될 수 있을 뿐만 아니라, 펩티드에 대해 특이적인 수용체가 여러 세포주내에 존재하는지의 여부를 확인할 수 있고, 더 나아가서는 세포주가 아닌 여러 종류의 1차 세포나 조직에서 펩티드에 특이적인 수용체의 존재를 확인할 수 있어 펩티드가 실제 생체내에서 어떠한 의미를 가지며 어떠한 기능을 하는지에 관한 연구에 지대한 영향을 끼칠 것으로 사료된다.본 기술은 치환에 의해 PLC 활성을, 기본이 되는 펩티드에 비해 월등하게 증가시켜 면역증강제로 사용할 수 있으며, 또 탐색용 펩티드 프로브는 U266 세포와 U937세포의 세포표면 수용체에 결합함으로써 PLC를 활성화시킬 수 있을 뿐만 아니라, 펩티드에 대해 특이적인 수용체가 세포표면내에 존재하는지 여부를 확인할 수 있다.