일반기술

포스포리불로키나제를 융합파트너로 하는 재조합 인간 부갑상선호르몬의 대량생산을 위한 DO­STAT유가식 배양방법

살모넬라 균주의 L-아라비노즈(arabinose) 오페론을 이용한 유도성 프로모터하에서 발현되는 융합파트너 PRK(phosphoribulokinase) 및 목적 단백질인 인간 부갑상선 호르몬(human parathyroid hormone: hPTH)의 융합유전자가 포함된 발현벡터로 형질 전환된 재조합 대장균을 초기 배양배지에 접종하여 회분식으로 배양하다가, 용존산소의 양이 급격히 증가할 때부터 유가배지에서 배양하면서 동시에 L-아라비노즈를 첨가하여 단백질의 발현을 유도하는 공정을 포함하는, PRK를 융합파트너로 하는 재조합 hPTH의 대량생산을 위한 DO-stat 유가식 배양방법에 관한 것이다.DO-stat 유가법이란 용존산소량을 발효조내 영양 성분의 고갈 정도의 지표로 삼아 용존산소량이 일정 수준 이상 증가하면 영양 성분을 유가법으로 보충하여 주고, 이후 보충된 영양 성분의 소비와 함께 감소된 용존산소량이 영양 성분의 고갈로 인해 다시 증가하면 영양 성분을 또 다시 보충하여 주는 유가법을 의미한다. 배양액 중 용존 산소량을 측정하여 용존산소가 50% 포화 이상일 때 배지를 주입하고, 50% 이하로 떨어질 때 배지 주입을 중단하는 DO-stat 유가법을 자동으로 조절하여 배양이 끝날 때까지 반복한다. 이러한 DO-stat 유가식 발효방법에 의하면, 세포 성장, 플라즈미드 안정성및 PRK를 융합파트너로 하는 재조합 hPTH의 발현량 모두를 높은 수준으로 안정적으로 유지시키므로, 저렴한 비용으로 재조합 hPTH를 대량 생산하게 된다