일반기술

녹색 형광 단백질 유전자가 삽입된 재조합 베큘로바이러스를 이용한 형광누에 제조방법.

곤충 베큘로바이러스(Autographa californica nuclear polyhedrosis virus : AcNPV 이하 AcNPV이라 함)의 다각체 단백질 유전자 프로모터 조절하에 초록색 형광 단백질 유전자를 도입한 재조합 AcNPV(한국과학기술원 생명공학연구소균주탁번호 KCTC 0418BP)를 누에(Bombyx mori)에 주사하여 만든 초록색 형광누에 및 그 제조방법에 관한 것으로서, 베큘로바이러스 전이벡터 pBacPAK8의 제한효소 BamHl와 Pstl 위치에 pGFP로부터 절단된 약 720bp의 초록색형광 단백질 유전자를 삽입하고 재조합 전이벡터(pAc-GFP) 500ng과 Bsu361)으로 절단한 BacPAK6 바이러스 DNA를 혼합하고 리포펙틴을 첨가하여 반응시켜 곤충세포주(Sf9)를 접종하여 트렌스펙션하고, 배양하여 선발한 재조합 바이러스를 Sf9 곤충세포주에서 증식시키며, 재조합 베큘로바이러스의 유전자는 AcNPV의 다각체 단백질 유전자 프로모터의 조절하에 삽입시킨 녹색 형광 단백질유전자를 삽입시켜서 재조합 베큘로바이러스(KCTC 0418BP)를 이용한 초록색 형광누에를 제조한다 곤충 베큘로바이러스 발현계를 이용하여 초록색 형광 단백질 유전자가 다각체 단백질 유전자 프로모터의 조절하에 포함된 재조합 AcNPV (균주기탁번호 KCTC 0418BP, 이하 유전자재조합 바이러스라함)를 제조하고, 이를 숙주범위가 다른 누에에 주사함으로서 누에는 죽지 않으면서도 그 재조합 바이러스가 소량 증식되어 다각체 단백질 유전자 프로모터의 조절에 의해 초록색 형광 단백질을 발현하는 것을 자외선 조사에 의해 쉽게 확인할 수 있으며 그 유전자는 차세대로 전이되어 세계 최초로 살아있는 상태에서 외래유전자 도입과 발현을 확인할 수 있는 종래의 문제점을 해결하는 기술이다.