일반기술

미성숙 난포란의 동결조성물과 이를 이용한 미성숙 난포란의 동결방법과 해동방법

미성숙 난포란의 동결조성물은 기본액으로서 Tissue Culture Medium 199이나 Phosphate Buffer Slaine 또는 수정란의 배양에 사용되는 배양액에 5% 혈청(serum)을 혼합하여 동결조성물을 구비하고 10%(1.8Mol) Ethylene glycol, 5% Ficoll 및 1.7%(0.05M) Trehalose를 추가혼합하여 이루어진다.또한 본 기술에 따른 미성숙 난포란의 동결방법은 미성숙 난포란의 동결조성물에 난소에서 채취한 직후의 미성숙 난포란을 넣어 10분동안 평형을 시킨후, 미성숙난포란을 통상적으로 사용되는 0.25ml의 스트로우에 넣고 액체질소동결기에서 0。C에서 2분여 정치한 후 -7。까지 1。C/분의 속도로 하강한 다음, -7。C에서 2분후 식빙을 취한 후 8분동안 더 정치하고 나서 -30。C까지 0.3-0.5。C/분의 속도로 하강 냉각하여 액체질소에 침지시켜 보존하는 것이다.본 기술에 따른 미성숙 난포란의 융해방법은 동결보존상태에 있는 미성숙난포란을 스트로우로 액체질소에서 꺼내어 공기중에 5-10초간 노출시키고, 노출후 30。C의 온수에 10초 정도 흔들어 융해한 다음, 스트로우를 절단하여 미성숙난포란을 Tissue Culture Medium 199과 5% 혈청(serum)으로 조성된 조성용액에 넣어 10분동안 수분재흡수를 유도하면서 융해한다.현재 세계적으로 생물의 다양성 협약등 자국의 유용 유전자보존에 대한 연구가 필요한 현대의 시점에서 볼 때 한 개체로 태어날 수 있는 암 가축의 생식세포를 보존하는 것은 재래가축이나 희귀동물 그리고 고능력 소의 난자를 보존하여 필요시에 이를 이용할 수 있으므로 이의 필요성은 매우 가치가 있는 것으로 알려져 오고 있다.이에 본 기술은 이러한 문제점을 극복하여 효과적으로 난포란을 동결 보존할 수 있는 조성물을 제공하고, 이러한 조성물을 이용하여 난포란을 효과적으로 동결 보존하고, 이렇게 동결 보존된 난포란을 효과적으로 융해하는데 있다.따라서 본 기술은 고 능력 유전인자를 보유한 가축, 재래가축, 희귀가축등의 자성생식세포를 동결 보존하여 필요시에 이용함으로서 유전자의 보존과 활용을 도모하기 위한 것이다.