일반기술

C형 간염 바이러스 진단키트의 개발

재조합 혼합항원을 이용한 C형 간염 바이러스 (hepatitis C virus, HCV)의 검출방법과 진단키트에 관한 것이다. 본 기술은 C형 간염 바이러스의 유전자 구조 중 핵 (Core), 비구조3 (NS 3), 비구조5A (NS 5A) 단백질 부위를 주요성분으로 포함하는 재조합 혼합항원을 이용하여 면역 크로마토그래피 방법 (immuno chromatography)으로 C형 간염 바이러스에 대한 항체를 검출하는 것으로서, 바이러스 항원의 아미노산 구조에 의한 차이를 제거함으로써 항체에 대한 민감도를 향상시켰으며, HCV 유래 비구조5A 단백질을 항원으로 이용하여 HCV에 대한 항체의 조기 검출을 가능케 하였다. 또한, 면역 크로마토그래피 방법을 이용하여 HCV 항체를 간단하게 검출할 수 있어 특별한 기계조작 없이도 HCV의 감염여부를 육안으로 확인할 수 있는 장점을 갖는다. HCV는 혈중 바이러스 양이 적고 바이러스에 대한 면역반응이 약하기 때문에 혈청학적 진단에 많은 어려움이 있다. 종래의 1세대 진단방법은 감염 후 4 내지 l6개월이 경과된 후에 항체가 생성되기 때문에 감염 초기에는 위음성 (false negative)으로 나타나 감염초기의 급성 간염 환자에 대한 정확한 진단에는 부적절 하며 또한, 자가면역성 질환 등에 기인한 간염 환자에 대해서도 상당한 비율로 위양성 (false positive)을 나타내는 단점을 가지고 있다. 또한 제2세대 및 3세대 진단 시약도 동일한 검체에 대해서 서로 다른 결과를 나타내므로 위양성율을 배제할 수 없는 문제점을 지니고 있다. 따라서, 종래의 진단시약은 일차 양성으로 판정된 경우에도 이차로 면역블럿팅 방법 (Immuno-blotting test)으로 확인 실험을 거쳐야 하며, ELISA 판독기와 같은 고가의 측정 장비가 필수적으로 요구되며, 정확한 판정에 많은 시간이 필요로 하는 단점이 있다. 본 기술은 종래의 효소면역검사법의 위양성 판명 문제,면역블롯검사나 PCR법을 통한 추가 확인시험의 번거로움을 극복하여 빠르고 간편한 검사방법을 제공한다.C형 간염 바이러스(HCV)는 간경화증 및 간암 등과 관련된 바이러스성 간염의 주된 원인이 되는 바이러스로서, 수혈 후 발병하는 간염의 70 내지 80% 정도가 HCV에 의한 것으로 알려져 있다. HCV 유래 폴리펩타이드는 아미노 말단부터 핵 (Core)-외피1 (E1)-외피2/비구조1 (E2/NS1)-비구조2 (NS2)-비구조3 (NS3)-비구조4 (NS4)-비구조5 (NS5) 단백질의 순으로 구성되어 있다. 본 진단키트는 민감성을 높이기 위하여 기존에 개발된 3세대 진단에 사용된 Core와 NS3 항원의 특정 일부분이 아닌 항원 전체단백질을 이용함으로써 민감도를 높였으며, 또한 기존의 진단시약에서는 전혀 도입된 적인 없는 C형 바이러스의 NS5A 부위을 최초로 도입하여 각 항원의 교차 검색에 의해 민감도를 더욱 향상 시켰다. 본 기술은 HCV 유래 항원 단백질을 암호화하는 유전자를 포함하는 베큘로바이러스 전이벡터 , 재조합 발현벡터 및 대장균 형질전환체로부터 발현된 HCV 유래의 핵 (Core) 단백질, 비구조3 (NS3) 전체 단백질 및 비구조5A (NS5A) 단백질을 제공한다. 아울러, 본기술은 HCV 유래의 핵 (Core) 단백질, 비구조3 (NS3) 전체 단백질 및 비구조5A (NS5A) 단백질의 재조합 혼합항원을 이용하여 C형 간염 바이러스의 항체를 측정하는 진단키트 및 마이크로칩을 제공한다. 본 진단키트는 일반인도 손쉽게 진단 할 수 있도록 시약을 단순화하고, 진단을 확인하는데 소요되는 시간을 현저히 줄였고, 육안으로 바로 관찰 할 수 있기 때문에 별도의 장비를 필요로 하지 않고 간단하게 검사 할 수 있으며, positive control을 가지고 있어 실험의 재현성을 확인 할 수 있는 장점을 가지고 있다. 따라서 일반 병원이나 개인이 손쉽게 HCV의 감염여부에 대한 검사가 가능하다