일반기술

재조합 활성형 프로 인슐린의 분리, 정제 방법

극성 메타크릴레이트계 수지(HP-2MG)와 활성형 프로 인슐린과의 흡착 및 탈착을 이용하여 재조합 대장균으로부터 발현되는 비 활성형 프로 인슐린을 활성형 프로 인슐린으로 전환하는 단백질 재 접힘(protein refolding) 반응 후, 반응 혼합물로부터 활성형 프로 인슐린을 분비, 정제하는 방법이다. 이 방법을 이용하면 경제적으로 신속, 용이하게 활성형 프로 인슐린을 제조할 수 있다. 재 조합 활성형 프로 인슐린은 재조합 DNA로부터 발현된 산물로써 일반적인 재조합 인슐린 제조 과정인 CNBr 분해 설포네이션(sulfonation) 및 재 접합 반응을 거쳐 수득된다.일반적으로 재조합 비 활성형 프로 인슐린을 활성형으로 전환시키는 재 접힘 반응 후 활성형 프로 인슐린을 분리, 정제하기 위해서는 겔 여과(Gel filteration) 크로마토그래피 또는 이온 교환(ion exchange) 크로마토그래피 등이 수행되며 이를 위해 탈염화 반응이 수반된다. 이 탈염화를 위해서는 겔여과법과 투석법 또는 한외 여과법 (ultra filteration)이 있다. 하지만 겔여과법은 시료 농도가 희석되면 칼럼의 크기가 증가되고, 투석법은 시료 손실과 처리 용량 제한 등이 문제가 되고 한외 여과법 역시 시설 및 시료 손실, 유속 감소 발생 등의 문제점이 있다. 이런 기존의 방법과는 달리 활성형 프로 인슐린과 공업용 수지와의 흡착을 이용하여 탈염화함으로써 기존의 문제점, 즉 처리 용량의 제한, 용출 시료의 희석, 비 선택적 결합 및 경제적 부담 등을 해결했다. 이 방법은 프로 인슐린을 공업용 수지에 흡착시킨 후 탈착하여 분리, 정제함으로써 선택성이 좋으며 별도의 탈염 과정을 필요로 하지 않아 공정이 간단하고 다량을 처리할 수 있고, 용출 시료가 희석되지 않기 때문에 이로 인한 농축 과정이 생략될 수 있는 우수한 효과가 있다