일반기술

한국산 재래용 산양의 베타카제인 프로모터를 이용한 유선조직 특이적 발현 시스템

한국산 재래종 산양의 베타카제인 프로모터 부위를 이용한 제조합 벡터 pGbc, pGbcL, pGbcS 및 이를 이용하여 생리활성 물질을 제조하는 방법이다. 베타카제인 프로모터를 한국산 재래종 산양으로부터 얻었으며(대량생산가능, 경제성), 프로모터와 구조유전자의 연결에 있어서 대개 프로모터와 구조유전자 사이에 인트론(intron)을 삽입하지만, 본 기술에서는 한국산 재래종 산양의 베타카제인 프로모터 다음에 위치한 엑손(exon)과 구조유전자의 맨 처음 엑손(exon)을 바로 연결하였고, 바람직한 전사종결을 이루기 위하여 구조유전자 뒤에 소 성장호르몬(bovine growth hormone)의 전사종결부위를 연결하였으며, 그 연결에 있어서 구조유전자의 폴리 에이 시그널(poly A signal) 존재 유무에 관계없이 하였다는 측면에서 특징을 갖는다. 유선조직유래 세포주나 형질전환동물의 유즙으로 부터 분비되도록 함으로써 생리활성물질의 활성유지를 모든 종류의 생리활성물질에 동일하게 적용시킬 수 있으며, 유선조직 특이적 발현시스템을 구축함으로써, 유선에서 분비되는 단백질의 종류의 단순함과 무해성에 기반을 둔 안정성을 얻을 수 있으며, 유선에서 발현되는 단백질들은 그 종류가 적기 때문에 분리정제가 용이한 특징을 갖는다.생리활성물질을 생산하기 위한 종래의 기술로, 대장균을 이용한 발현(한국공고 특허 제94-5585호) 동물세포를 이용한 발현방법은 대장균을 이용한 발현의 경우, 저렴한 비용으로 대량생산을 할 수 있으나, 대장균이 원핵생물이기 때문에 진핵생물에서 단백질 합성 이후에 이루어지는 post-translational modification 과정이 수행되지 않기 때문에 EPO 등의 인체생리활성물질에서는 그 활성이 유지되지 않는 경우가 발생하였다. 이의 해결책으로 동물세포에서 발현을 시키는 post-translational modification 과정이 수행되기 때문에 활성을 유지할 수 있는 시스템이 개발되었으나, 동물세포 배양에 있어 경제성과 활성의 유지 및 순수분리정제의 문제점을 갖고 있다. 따라서 동물의 유선조직으로부터 유래한 동물세포에서의 발현과 형질전환동물의 유즙을 통한 생산을 가능하게 함으로써, 활성의 유지, 비용의 문제점 및 순수분리정제 등을 해결하였다.