일반기술

B형 간염바이러스의 표면항원 프리-S1에 대한 인간화항체 및 이의 제조방법

B형 간염바이러스 (HBV)의 표면항원 프리-S1에 대한 인간화 항체(humanized antibody)에 관한 기술이다. HBV의 표면항원 프리-S1에 대한 생쥐 단일클론항체 KR127의 가변영역과 가장 유사한 사람 항체유전자를 선별하고 이들을 대상으로 인간화 항체의 중쇄 (heavy chain) 유전자 및 경쇄 (lightchain) 유전자, 이를 포함하는 발현 벡터, 상기 발현 벡터로 형질전환된 형질전환체, 그리고 상기 형질전환체를 배양하여HBV의 표면항원 프리-S1에 대한 인간화 항체를 제조하였다. 인간화 항체는 생쥐 단일클론항체 KR127와 유사한 항원결합능을 유지하면서도 KR127보다 생쥐 유래의 아미노산 잔기가 많이 감소되어 인체에서 면역유발능의 감소가 기대되고 HBV 감염의 예방과 B형 만성간염의 치료에 효과적으로 이용할 수 있다. HBV 표면항원 프리-S1에 대한 생쥐 단일클론항체 KR127로부터 항원결합능을 유지한 상태에서 생쥐 유래의 아미노산 잔기를 대부분 인간화시켜 인체내에서의 면역반응 유발능을 감소시킨 HBV 표면항원 프리-S1에 대한 인간화항체를 제공한다HBV는 인체에 침입하여 만성 및 급성 간염을 일으키며, 악화될 경우 간경화와 간암의 원인이 되는 병원체로, HBV의 피막은 3개의 단백질로 구성되는데, 구체적으로 S 항원을 포함하는 주 (major) 단백질, S 항원과 프리-S2 항원을 포함하는 중(middle) 단백질 및 S 항원, 프리-S2 항원과 프리-S1 항원을 포함하는 대 (large) 단백질로 구성된다. 그 중 프리-S1 항원은 프리-S2 항원이나 S 항원과는 달리 감염성 바이러스 입자들 (infectious virus particles)에 주로 존재하고, 사람 간세포의 감염에 관여하기 때문에, 프리-S1에 특이한 단일클론항체는 바이러스 중화에 매우 효과적으로 작용하여 HBV감염의 예방과 B형 만성간염의 치료에 유용할 것으로 생각된다. 생쥐유래 단일클론항체의 높은 친화도와 특이성을 유지한 채 인체 내에서의 면역유발능을 최대한 줄일 수 있는 방법으로 "인간화 항체"가 개발되었는데, 인간화 항체는 생쥐항체의 항원결합부위(CDRs)를 인간항체에 이식시킨 것으로, 유전공학적으로 대량생산이 가능하고, 유전자의 대부분을 인간화하였으므로 인체 내에서의 면역반응을 대폭 줄일수 있는 장점이 있다. 본 기술은 생쥐 단일클론항체 KR127로부터 인간화 항체를 제조하여 HBV 감염과 B형 만성간염의 치료에 이용하고자, KR127 항체의 경쇄 및 중쇄의 가변영역 서열과 가장 유사한 사람 유전자를 검색하고 이를 대상으로 인간화 항체의 경쇄 및 중쇄 유전자를 제조한 후 이들을 발현벡터에 클로닝하여 숙주세포를 형질전환한 다음 이를 배양하여 인간화 항체를얻어 생쥐 단일클론항체 KR127과 유사한 항원결합능을 유지하는 것을 확인하였다.