일반기술

알츠하이머씨병의 기초적이고 약학적인 조사를 위한 세포계

α-secretase는 아밀로이드 전구 단백질을 자르고 APPsa-fragments의 방출을 일으킨다. 이것은 아밀로이드 플라그의 성장에 포함되지 않는다. 그것은 ADAM 10(disintegrin과 metalloprotease)이 구조적이고 조절된 α-secretase 활성도를 가지고 있다는 것을 말한다. 세포계는 높은 농도에서 안정된 ADAM 10과 방출된 알카리인 포스파테이즈의 융합 단백질과 APP의 안정된 발현에 이용될 수 있다. 결과적으로 효소 실험에 의해 단백질 가수분해 산물을 탐지할 수 있다.알츠하이머씨병 환자의 뇌에서 아밀로이드 플라그의 주된 단백성의 요소인 아밀로이드 β 펩타이드의 존재는 A-beta peptide 순서 안에서 아밀로이드 전구 단백질(APP)의 α-secretase의 쪼개짐에 의해 억제된다. α-secretase의 쪼개짐은 가용성의 APPs-alpha 조각을 방출하는데 이것은 아밀로이드 플라그 성장에 포함되지 않는다 . 단백질 분해 효소- disintegrin 과metalloprotease ADAM 10-는 구조적이고 조절된 α-secretase 활동임이 밝혀졌다. 우성의 negative ADAM 10 돌연변이의 ADAM 10-cDNA나 cDNA 각각 (내인성의 α-secretase 활동을 억제하는)과 분출된 알칼라인 포스파테이즈의 융합 단백질을 위한 cDNA과 APP는 세포 내로 전달된다. 이것은 재현성있고 쉬운 효소 실험에서 단백질 가수분해 산물을 검출할 수 있을 정도로 충분히 높은 농도에서 두 단백질의 안정된 발현을 가져온다. ADAM 10의 DNA 배열의 지식은 환자의 DNA 표본과 유전자형을 비교할 수 있게 해준다.적용 분야:- ADAM 10과 APP를 발현하는 세포계로서 α-secretase를 활성화시키거나 알츠하이머씨 병에 대항하여 가능한 치료법으로서 그것들의 발현을 유도하는 물질들을 위한 스크리닝 시스템- 우성의 negative ADAM 10 돌연변이와 APP를 발현하는 세포계로서 α-secretase나 β-secretase 활성과 함께 그 이상의 효소들을 위한 스크리닝 시스템- 유전자형을 결정하여 환자의 알츠하이머씨병에 대한 이환성을 결정하는 것을 도와주고 진단과 특정 치료의 선택을 보조해줄 수 있음-유전 치료에 유용한 벡터의 생산-개발단계:- 정제된 ADAM 10의 특이성 결정- HEK 세포에서 ADAM10과 유효한 부분의 한정- HEK 세포에서 α-secretase 쪼개짐에 대한 ADAM 10의 영향 결정- ADAM10의 억제 스펙트럼은 α-secretase 활성의 억제 스펙트럼의 것과 일치한다고 증명- -α-secretase 쪼개짐을 활성화시키는 영향을 위한 다른 물질들의 실험- HEK 세포에서 α-secretase 쪼개짐에 대한 우성의 negative ADAM 10 돌연변이의 영향 결정-ADAM 10 다형성과 유전적 치료에 관한 연구는 행해지지 않음혁신적인 사항:구조적이고 조절된 a-secretase의 쪼개짐의 단백질 가수분해 산물을 탐지하기 위한 재현성있고 쉬운 효소 실험주요 장점:- 세포계는 각각 ADAM 10이나 ADAM 10 mutant와 APP 융합 단백질의 높은 발현 정도를 보인다.- 쉬운 효소 실험으로 a- secretase 활성의 탐지-ADAM 10은 구조적이고 조절된 a-secretase의 쪼개짐에 포함된다.