산업기술 통합검색
ㅇ 개발기술(제품) 내용 철분결핍으로 인한 빈혈의 예방 및 치료의 목적으로 철분이 강한 chelating을 형성하는 단백질 서이분들(주로 ransferin과 IgG)을 동물의 혈장으로부터 분리하여 철분과 결합시켜 식품첨가제 또는 의약품 용도록 사용될 수 있는 철분제제 제조기술 - 가공(제조)공정 혈액수거 -> 혈장분리 및 트랜스페린 추출물 분획 -> 농축 및 건조 -> 철분+트랜스페린 추출물 -> 멸균 -> 농축 및 건조ㅇ 실용화에 대한 의견 동물혈액을 이용하여 비교적 간단한 공정을 거쳐 제조되었으므로 경제적이고 대량생산이 가능하며 위생적인 안전성이 부여되었기 때문에 폐자원을 이용한 고부가 가치 제품의 생산이 가능 철분의 체내흡수를 증진시키고 위생적으로 안전한 단백질성 철분제제임
ㅇ 개발기술(제품) 내용 닭에다 충치균인 Streptoccocus mutans를 접종하여서 난황에서 항-충치균 IgY를 생산하는 기술임 - 가공(제조)공정 항원제조 -> 닭에 접종 -> 계란 수거 ->특수란 ->식품에 첨가 ->IgY 분리 ㅇ 실용화에 대한 의견 -특수란으로 시판 -소재 추출 후 아이스크림, 요쿠르트, 껌, 초코렛 등에 첨가 5세 미만의 유아에게 안전한 충치 예방 소재임, 계란 단백질이므로 매우 안전함
ㅇ 개발기술(제품) 내용 계란으로부터 동물성 레시친의 중요한 원료인 난황레시친을 상업적으로 생산하기 위하여 phosphatidyl choline 함량 50% 이상 및 80% 이상의 난황레시친의 경제적인 생산기술. - 가공(제조)공정 계란-> 할란-> 난황->전처리->추출->농축->1차정제(PC 50% 난황레시친) -> 2차정제(PC 80% 난황레시친)ㅇ 실용화에 대한 의견 : 기능성 식품소재, 의약품, 화장품 및 식품의 원부재료로 광범위하게 이용 가능한 소재의 생산기술로 1일 700㎏ 생산시 건축소요면적 500평, 기기설비비 16억원 등으로 추산됨.유해성 용매잔류 위험 배제, 저온처리하여 고품질의 레시친 생산, 건강보조식품 및 의약품 원료로 이용, 알츠하이머형 노인성 치매 예방 및 치료용 원료, 동맥경화 및 지방간 예방 치료용 소재
본 연구는 새로운 성장관련 유전자들이 도입된 형질전환 돼지를 생산기술을 개발하고 동시에 과다한 성장관련인자의 유전자 발현을 적절한 수준으로 조절하기 위하여 새로운 promotor를 개발하고 자돈의 성장초기나 중기에서부터 이들 유전자의 발현이 시작되도록 외래유전자를 조작하여 신체적 결함이 없는 고급육 생산 형질전환돼지를 개발하기 위하여 실시하였다. 도살된 돼지의 난소에서 회수된 미성숙 난포난의 성숙과 체외 수정을 유도하고 체외 발달을 위한 배양액과 새로운 첨가제를 개발하였다. 산양의 성장호르몬, IGF 및 돼지의 GHBP유전자를 RT-PCR방법으로 cloning하고 특이한 promotor와 재조합하였으며 산양 성장호르몬 재조합유전자를 171개 생쥐 수정란에 미세주입하여 외래유전자가 삽입된 4마리의 산자를 생산 하였다. 43마리의 공란돼지에서 채취한 625개의 수정란 중 453개를 23마리의 수란돼지에게 비외과적으로 이식한 결과, 18마리는 임신이 확인되었다
포유동물의 수정란에 조직특이적 발현벡터를 도입시키기 위하여 염소의 β-lactoglobulin (BLG)의 5' -조절 부위와 polyadenylation 신호 서열을 갖는 벡터로 삽입하여 제조하였다. 사람 α1-antitrypsin (α1-AT)과 erythropoietin (EPO) 유전자의 genomic 염기서열을 BLG의 5' -조절 부위 서열을 갖는 pBluescript에 각각 삽입하여 p1692g-AT와 p1692epo 벡터를 만들었다. 형질 전환된 유선 세포 HC11에서의 α1-AT 및 EPO mRNA 발현을 확인하였으며, 형질 전환된 유선 세포에서의 α1-AT 및 EPO 단백질 발현 및 분비를 면역블랏 방법으로 확인하였다. 또한 조직특이적 유용단백질 발현 효율증진을 위하여 유선 특이적 actiavtion element를 포함하는 것으로 추정되는 -470∼-740 지역을 Gel-shift 및 Foot-printing 방법으로 분석하여 actiavtion element로 추정되는 -697∼-744 부위를 올리고뉴클레오타이드로 합성하였다. 이 올리고뉴클레오타이드는 BLG의 205 프로모터의 상류에 세벌로 결합되었을 때 205 프로모터를 크게 활성화 시켰을뿐만 아니라, 이 oligonucleotide는 젖 생산 호르몬들을 처리 했을 때 프로모터 활성을 약 6배 정도 증가 시켰다. 이상과 같은 유선 특이적 actiavtion element는 유선 조직-특이적 고활성 프로모터의 제작에 이용될 수 있을 것이다. 이상과 같이 제조된 사람 α1-antitrypsin 과 EPO 유전자 발현용 재조합 DNA를 생쥐 수정란에 미세주사하여 유전자이식 생쥐를 만든 결과 여러 마리의 founder mice를 만드는데 성공하였고, 이 founder mice를 다시 교배시켜 외부 유전자의 삽입이 확인된 유전자이식생쥐 Line을 얻었다. 특별히 EPO 발현 유전자이식생쥐의 line들을 분석한 결과 유전자이식생쥐에서 EPO가 혈액으로 다량을 분비되는 polycythemia와 유사한 phenotype이 발견되었다. 지금까지 얻은 결과들로 미루어 보아 염소의 BLG promoter가 생쥐의 생체내에서 확실히 발현된다는 것을 알 수 있었고, 유전자이식생쥐의 polycythemic phenotype에 의한 교배의 어려움으로 인해 유즙생산을 위해 비교적 오랜 시간이 필요할 것으로 예상되나, 궁극적으로 조직특이적 발현의 개선과 함께 성공적인 유전자이식생쥐의 개발과 유즙 내에서의 EPO 대량생산이 가능하라리 기대된다. 현재 얻은 EPO 유전자이식생쥐는 세계에서 처음으로 개발된 것으로서 유용단백질 생산의 차원을 떠나 polycythemia의 질병모델로도 그 가치가 높이 평가되고 있다.적혈구수, hematocrit, 혈액중 EPO 농도, 거대비장증(splenomegaly) 등 여러 가지가 인간의 polycythemia와 극히 유사하여, 이 질병의 기전연구와 치료를 위한 중요한 실험동물로 쓰일 수 있다
인체 유용 생리활성 물질 2종 (G-CSF, GM-CSF)의 유전자를 PCR 방법으로 cloning 하였음, 산양(goat) 유선조직에서 특이적으로 발현되는 유전자인 β-casein 유전자의 promoter 부위 (약 2kb)를 cloning하였음, 유선조직특이적 발현 vector 2종을 construction 하였음. G-CSF 및 GM-CSF의 유전자를 산양 유선조직특이적 발현벡터 2종에 각각 subcloning하였음. 한국재래산양에서의 수정란 다배란 유기방법 확립. 외래 유전자 주입을 위한 1세포기 산양 수정란의 채취시기 및 방법을 확립하였음. 체외수정용 난포란의 채취를 위한 호르몬의 적정투여량과 투여방법 확립. 체외수정 및 인공수정에 사용될 정액의 채취방법 확립. 산양 수정란의 체외배양조건 확립. 외래유전자가 주입된 산양 수정란의 체외발달을 시도하여 배양조건을 확립하였음
인간의 난치병을 정복하기 위해서는 그에 따른 특정질환의 모델이 될 수 있는 실험동물이 요구되며, 이러한 모델동물은 신약개발 과정 중 약효검정 연구를 수행하는데 절실히 필요하게 된다. 본 연구는 질환모델동물에 대한 연구 중 그 1차년도 연구로서 심장순환계 치료제제 개발, 특히 고혈압 제제 개발 연구를 위하여 절대적으로 필요한 자연발생 고혈압 (SHR) 랫트와 인위적으로 고혈압을 유발시킨 신성 고혈압 랫트 (RHR) 에 대한 육종기술 확립, 기초 data 연구, 유발기술 확립 연구 등을 수행하였다. 그 결과 SHR 랫트의 육종을 위한 가계(혈통)도를 확립하였으며, 종축선발 기준을 정착하였고, 번식성적이 최초 개발 당시의 성적과 동일함을 확인하였다. 또한 SHR 랫트의 체중변화, 장기중량변화, 주령에 따른 혈액학적, 혈액생화학적, 뇨생화학적 성상 등에 대한 성적을 확립하였으며, 혈압, 맥박수, 체온, 심전도 등의 data를 확립하였다. 신장 동맥 결찰 수술법을 이용한 RHR 랫트의 착술 기술을 확립하였으며, Renin의 활성도를 측정하여 RHR 랫트 작출법의 성공을 확인하였다. 본 연구를 통하여 SHR 랫트의 육종기술과 대량생산 할 수 있는 기반기술을 갖출 수 있었으며, 기초 data와 RHR 랫트 작출기술을 확립함으로써 향후 약효검정 및 고혈압 연구에 적극 활용될 것으로 사료된다.
본 발명은 SINE 서열을 포함하는 형질전환율이 높은 포유동물세포용 발현 벡터 및 이를 이용한 형질전환 방법에 관한 것이다..
흑염소 베타-카제인 유전자의 프로모터를 이용하여 인체성장호르몬을 포유동물의 유즙을 통하여 안정적으로 대량 분비하는 유선 특이적 발현 벡타.
잘 알려진 감염성의 소의 비기관염(鼻氣管炎)바이러스와 마찬가지로, Bovine herpesvirus type 1은 가축에 자주 감염되는 바이러스이다. 비방사성의 biotin-labeled DNA-probe를 포함하는 잡종교배 테스트 시스템을 통해서, bovine herpesvirus type 1을 검출할 수 있다. 통상적인 방법들과 비교해 볼 때, 우리의 검출방법은 더 민감하고 특수화된 방법이다. 특히 잠복성의 감염을 잘 검출한다. 우리의 잡종교배 시스템의 장점은, 잠복성의 BHV-1을 탐지할 수 있으며, 또한 zeronegative carrier의 전염병학적인 특징을 연구할 수 있다는데 있다. 이 시스템의 많은 실험이 시베리아 지역에서 수행되었다. 그 연구결과, 이 방법의 단순 신속함과 수의학적인 적용 가능성이 입증되었다.통상적인 바이러스학적 방법들과 비교해 볼 때, 우리의 시스템은 좀 더 예민하고 특수화된 방법이다. 특히 소에 발병하는 잠복성의 감염을 잘 탐지한다. 우리의 시스템은 단순하고 빠르며, 수의학적인 적용이 가능하다.
동아시아와 서아시아에서 사로잡은 시베리안 학의 유전적 다양성을 연구하는데 DNA fingerprinting 방법이 사용되었다. DNA fingerprinting 방법을 이용하여 이 시베리안 학들 사이의 관계를 연구하는 과정을 통해서, 우리는 이 사로잡은 학들의 유전자 풀을 다루는 효과적인 지침을 마련할 수 있었다. 그런데 동아시아 계열 학 유전자에 있는 특정위치에서 높은 유전적 다양성을 발견할 수 있었다. 이 정보는 전혀 새로운 것이었으며, 이는 생물학적 연구와 계열 구조의 연구에 공헌할 것이다. 또한 이는 시베리안 계열 학을 변종하는데도 기여할 것이다.시베리안 학의 야생종과 변종에 있어서의 유전적 다양성의 연구, 포획 사육에서의 유전적 변화의 관찰
가축에 생기는 감염성 질환에 대한 백신 개발에 있어서 중요한 점은, 어떻게 하면 다수의 동물에게 간편하게 백신을 주입하는냐 하는 것이다. 이 문제는 경구용 백신을 만들때 미세입자 시스템을 추가함으로써 해결될 수 있다. 즉, 생체에 적합하고 또 분해될 수 있는 중합체를 함유한 미세입자가 위장관을 따라 이동하는 백신을 효율적으로 운반하는 것이다. 비경구 투여 방법은 여러 가지 단점이 있다. 주사기, 바늘, 살균제등이 필요하며 숙련된 인력을 필요로 한다. 따라서 경구 투여 방법에 비해 더 비싸다.미세입자에 의해 경구용 백신을 목적지까지 운반하는 실험적인 연구가 수행되었다. 이 실험을 통해서 미생물의 보호 능력과 면역반응의 정도가 측정되었다. 이 실험에는 다양한 구성과 크기를 갖는 미세입자가 사용되었다. 가축에 투여되는 경구용 백신은 주사용 백신과 크게 다르다.가축에 발생하는 감염성 질환의 예방에 있어서, 미세하게 캡슐화된 경구용의 바이러스 백신과 세균 백신의 개발과 그 이용
우리는 다양한 종류의 뱀들이 내는 무독성 침샘 분비물과 독성 분비물의 영향에 대해 연구하려고 한다. 그 중에서도 이전에 많은 연구가 이루어지지 않았던, 토착종인 Vipera raddei가 내는 독성 분비물과, 그 분비물이 chicken embryos의 산전 성장에 끼치는 영향에 연구하고자 한다. 이 연구의 전반적인 중요성은 별도로 하더라도, 토착종 뱀을 이용하는 것은 흥미있는 일이 될 것이다.다양한 종류의 뱀들이 내는 독물에 대한 항 독물 혈청의 개발 가능성
구제역(Food-and-Mouth Disease)은 전염성이 강한 질환이다. 이는 발굽이 갈라진 가축에게서 발생하는 중요한 풍토병이다. 따라서 가축 사육 산업이 발달한 지역에서 자주 발병하는 질환이다. 구제역을 예방하는 방법에는, 격리 수용의 방법과 죽은 바이러스로부터 만든 백신으로 면역화하는 방법이 있다. 전통적인 구제역 백신은 질환을 잘 치료하기는 하지만, 전염성이 강한 바이러스를 대량으로 생산해야만 하는 기술에 그 근거를 두고 있다. 따라서, 구제역이 발병하는 대부분의 이유는 백신이 충분히 비활성화되지 않는 데 있다. 1981년 이후, 전통적인 구제역 백신의 사용 금지가 내려졌다. 이에 따라 구제역에 대항할 수 있는 합성 백신의 필요성이 대두했다.본 프로젝트의 목적은 다음과 같다. 구제역 바이러스의 epitope를 Yersinia Pestis의 재조합 단백질인 Caf1에 이식시켜 합성의 구제역 백신을 만들고자 하는데 있다.재조합 백신은 구제역 바이러스에 의해 유발되는 위험한 질환의 예방과 치료에 효율적인 수단을 제공해줄 것이다.
현재 다수의 동물들의 백신투여에 가장 많이 쓰이는 방법은 피하 주사법과 근육내 주사법이다. 이 방법은 그 시행에 있어서 숙련된 인력을 요구하며, 시간이 많이 드는 단점이 있다.만약, 감염경로가 폐문(肺門)을 통한 것이라면, 연무질 백신화법이 가장 효과적일 것이다. 이 방법을 이용하면 다수의 동물들에 대한 백신투여가 용이해질 것이다. 현재 백신 투여에 필요한 연무질 생산기는 연무질의 생산원리에 있어서 다양한 차이점을 나타낸다. 그들 중에 몇몇은 살아있는 세균 백신과 함께 작동하지 못한다. 또다른 종류는 낮은 생산성을 나타내기도 한다.연무질 백신화를 위한 여러 가지 모델이 제시된 결과 다수의 동물들에게 연무질 백신화를 시행할 수 있는 보편적인 모델이 개발되었다. 이 모델을 이용하면 적정 농도의 백신 제제를 연무질 형태로 만들 수 있고, 또한 백신화의 전 과정을 조절할 수 있다.본 기술은 다수의 동물들에 대한 백신화에 이용될 것이다.
저렴하고 독성이 없는 가축과 조류용 생육 촉진제를 찾던 중, 코발트(II) 클로라이드tris(izonicotinhydrazid)를 채택하였다.정육 및 우유 생산량을 증가시키기 위해 촉진제를 포함하는 영양식을 개발해냈다.
프로젝트 진행 목표: 생태적 측면 및 품종개량에 관련된 세부사항, 개체수의 변동, 최적 밀도 및 매우 변동이 심한 서식 조건에 생육하는 유제류 개체군의 구성(Saiga Tatarica, Gazella Subgutturosa, Alces Alces, Capreolus Pygargus, Cervus Elaphus, Moschus Moschiferus, Sus Scrofa, Ovis Ammon, Ovis Vigne, Capra Cibirica, Equus Hemionous)에 대한 연구 및 이를 합리적으로 이용하기 위한 방법의 실천과 교육. 이와 같은 연구의 결과로서, 인위적으로 변경된 환경에 서식하는 유제류 개체군을 활용하기 위한 조건을 진단할 수 있는 기반을 마련하는 동시에 개체군의 추이를 모니터할 수 있다.-
Phospholipase C (PLC)와 thioredoxin peroxidase (TPx)에 대한 분자 유전학적 연구를 수행하고 이를 바탕으로 관련 인체 질병에 대한 형질전환 모델 동물을 제작하고자 제 1차년도에서 다음과 같은 기반 연구결과를 얻었다. 1. PLC의 분자유전학적 연구Balb/c genomic library에서 PLCβ3 유전자의 exon 5를 함유하는 DNA 절편과 PLCβ4 유전자의 exon 6을 포함하는 DNA 절편을 각각 cloning 하였고, exon/intron의 구조와 위치, 제한효소지도 등을 작성하므로써 gene targeting에 사용될 vector 제작에 필요한 분자유전학적 기반을 마련하였다. 2. TPx의 분자유전학적 연구생쥐의 뇌 cDNA library로부터 TPx 유전자를 분리하여 단백질의 구조를 확인하였고, 생쥐 1292종의 genomic DNA library로부터 3종의 TPx genomic DNA clone을 분리하여 exon/intron의 구조, 제한효소지도 등을 연구한 결과 생쥐 genome에는 적어도 2가지 이상의 밀접히 연관된 TPx 유전자가 존재함이 파악되었다. 이 중 한가지는 적어도 6개의 exon과 5개의 intron으로 형성되는 구조를 가지고 있었으나, 다른 한가지는 단일 exon과 5개의 intron으로 형성되는 구조를 가지고 있었으나. 다른 한가지는 단일 exon으로 구성되어 있다. 두 TPx 유전자 모두 198개의 아미노산으로 구성되는 단백질을 암호화할 수 있었으며, 그 아미노산 서열의 유사성은 약 96%였다. 3. 유전자 발현조절부위의 분리생쥐 129 SVJ의 genomic library로부터 metallotheinein, albumin 등 조직 특이적 발현 유전자의 promoter와 Tpx 유전자의 promoter 등을 분리하였고, 이에 대한 제한효소 지도를 작성하였다. 4. Gene targeting을 위한 기반기술배아간세포 (embryonic stem cell : ES cell)에서의 homelogous recombination을 통한 gene targeting 기법에 의하여 형질전환 동물을 제작하고자, 그 기초기술로써 feeder cell의 제조, ES 세포주의 계대 및 유지기술, ES 세포주를 이용한 chimera 생산방법 등을 해외훈련을 통하여 습득하고 본 연구실에서 확립하였다.
포유동물의 수정란에 조직특이적 발현벡터를 도입시키기 위하여 염소의 β-lactoglobulin (BLG)의 5' -조절 부위와 polyadenylation 신호 서열을 갖는 벡터로 삽입하여 제조하였다. 사람 α1-antitrypsin (α1-AT)과 erythropoietin (EPO) 유전자의 genomic 염기서열을 BLG의 5' -조절 부위 서열을 갖는 pBluescript에 각각 삽입하여 p1692g-AT와 p1692epo 벡터를 만들었다. 형질 전환된 유선 세포 HC11에서의 α1-AT 및 EPO mRNA 발현을 확인하였으며, 형질 전환된 유선 세포에서의 α1-AT 및 EPO 단백질 발현 및 분비를 면역블랏 방법으로 확인하였다. 또한 조직특이적 유용단백질 발현 효율증진을 위하여 유선 특이적 actiavtion element를 포함하는 것으로 추정되는 -470∼-740 지역을 Gel-shift 및 Foot-printing 방법으로 분석하여 actiavtion element로 추정되는 -697∼-744 부위를 올리고뉴클레오타이드로 합성하였다. 이 올리고뉴클레오타이드는 BLG의 205 프로모터의 상류에 세벌로 결합되었을 때 205 프로모터를 크게 활성화 시켰을뿐만 아니라, 이 oligonucleotide는 젖 생산 호르몬들을 처리 했을 때 프로모터 활성을 약 6배 정도 증가 시켰다. 이상과 같은 유선 특이적 actiavtion element는 유선 조직-특이적 고활성 프로모터의 제작에 이용될 수 있을 것이다. 이상과 같이 제조된 사람 α1-antitrypsin 과 EPO 유전자 발현용 재조합 DNA를 생쥐 수정란에 미세주사하여 유전자이식 생쥐를 만든 결과 여러 마리의 founder mice를 만드는데 성공하였고, 이 founder mice를 다시 교배시켜 외부 유전자의 삽입이 확인된 유전자이식생쥐 Line을 얻었다. 특별히 EPO 발현 유전자이식생쥐의 line들을 분석한 결과 유전자이식생쥐에서 EPO가 혈액으로 다량을 분비되는 polycythemia와 유사한 phenotype이 발견되었다. 지금까지 얻은 결과들로 미루어 보아 염소의 BLG promoter가 생쥐의 생체내에서 확실히 발현된다는 것을 알 수 있었고, 유전자이식생쥐의 polycythemic phenotype에 의한 교배의 어려움으로 인해 유즙생산을 위해 비교적 오랜 시간이 필요할 것으로 예상되나, 궁극적으로 조직특이적 발현의 개선과 함께 성공적인 유전자이식생쥐의 개발과 유즙 내에서의 EPO 대량생산이 가능하라리 기대된다. 현재 얻은 EPO 유전자이식생쥐는 세계에서 처음으로 개발된 것으로서 유용단백질 생산의 차원을 떠나 polycythemia의 질병모델로도 그 가치가 높이 평가되고 있다. 적혈구수, hematocrit, 혈액중 EPO 농도, 거대비장증(splenomegaly) 등 여러 가지가 인간의 polycythemia와 극히 유사하여, 이 질병의 기전연구와 치료를 위한 중요한 실험동물로 쓰일 수 있다.
- 인체 유용 생리활성 물질 2종 (G-CSF, GM-CSF)의 유전자를 PCR 방법으로 cloning 하였음 - 산양(goat) 유선조직에서 특이적으로 발현되는 유전자인 β-casein 유전자의 promoter 부위 (약 2kb)를 cloning하였음 - 유선조직특이적 발현 vector 2종을 construction 하였음 - G-CSF 및 GM-CSF의 유전자를 산양 유선조직특이적 발현벡터 2종에 각각 subcloning하였음 - 한국재래산양에서의 수정란 다배란 유기방법 확립 - 외래 유전자 주입을 위한 1세포기 산양 수정란의 채취시기 및 방법을 확립하였음 - 체외수정용 난포란의 채취를 위한 호르몬의 적정투여량과 투여방법 확립 - 체외수정 및 인공수정에 사용될 정액의 채취방법 확립 - 산양 수정란의 체외배양조건 확립 - 외래유전자가 주입된 산양 수정란의 체외발달을 시도하여 배양조건을 확립하였음