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일반기술 생명과학 > 발생학

이종중합형 패리틴 생산 방법

○ 기술발명의 목적: 이종중합형 패리틴 생산방법○ 기술 요약 및 특징: 본 발명은 생체이용성이 우수한 형태의 철을 다량 저장할 수 패리틴을 생산하는 방법에 관한 것으로, (a) 단일 숙주세포에 패리틴 라이트체인이 패리틴 헤비체인에 비하여 높은 분자비율로 발현되도록 고안한 패리틴 라이트체인 발현용 벡터 I 및 패리틴 헤비체인 발현용 벡터 II를 순차적으로 도입하고, (b) 상기 두 벡터가 모두 도입된 형질전환체를 선별하고 및 (c) 상기 형질전환체를 배양하여 이종중합형 패리틴을 발현시키는 것을 포함하는 이종중합형 패리틴 생산방법을 제공한다.○ 색인어: 패리틴, 철, 이종중합형본 발명의 이종중합형 패리틴은 패리틴 라이트체인 및 헤비체인이 조합된 형태로, 바람직하게는 라이트체인이 헤비체인에 비하여 높은 비율로 조합된 것이다. 더욱 바람직하게는 헤비체인:라이트체인이 1:5 내지 1:10이다. 상기 비율범위를 벗어날 경우 철 흡수율 및 저장율이 현저히 감소될 수 있다.본 발명의 이종중합형 패리틴 생산방법은 (a) 단일 숙주세포에 패리틴 라이트 체인이 헤비체인에 비하여 높은 비율로 발현되도록 고안한 패리틴 라이트체인 발현용 벡터 I 및 패리틴 헤비체인 발현용 벡터 II를 도입하고, 상기 두 벡터로 형질전환 된 형질전환체를 제조하고 및 (b) 상기 형질전환체를 배양하여 이종중합형 패리틴을 발현시키는 것이다.숙주세포는 형질전환여부를 확인할 수 있도록 최소 2개 이상의 영양요구성(auxotrophic) 표현형을 가지며, 본 발명에서는 일예로 우라실 및 루이신 영양요구성 표현형을 기재한다. 또한 숙주세포는 외부 단백질 발현을 변성시킬 수 있는 위험성을 제거하기 위하여 프로테아제 결핍성 균주가 바람직하다. 일예로, PEP4 대립유전자가 비활성화된 것일 수 있다.바람직한 숙주세포는 사카로마이세스 세레비지아 2805(MATαpep4::HIS3 prb1-δCan1 GAL2 his3 ura3-52)과 사카로마이세스 세레비지아 15Dau(MAT ade1 his2 leu2-3,112 trp1-1 ura3Δns)를 교배시켜 제조한 자낭포자 후대, 사카로마이세스 세레비지아 2805-a1 내지 19이다. 상기 사카로마이세스 세레비지아 2805-a1 내지 19는 2개의 선별마커(ura -및 leu - )를 가지며, pep4 - 유전자형이다.패리틴 라이트체인 및 헤비체인은 서로 다른 비율로 발현시키기 위하여, 각 서브유닛은 플라스미드 카피수가 다른 벡터에 클로닝할 수 있다. 바람직하기로는 패리틴 라이트체인은 고카피 벡터에 클로닝하고, 헤비체인은 저카피 벡터에 클로닝하는 것이며, 발현정도를 엄격하게 조절하기 위하여 양 서브유닛은 모두 동일한 프로모터하에 발현되도록 한다. 상기 프로모터는 효모에서 발현가능한 공지의 프로모터이다.

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전북대학교

등록일

2006-05-24

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일반기술 생명과학 > 발생학

말잘피 종자의 발아생육 거치대

본 발명은 말잘피의 번식을 위한 말잘피 종자의 발아생육 거치대에 관한 것으로 더욱 상세하게는 해초의 일종인 말잘피를 안정된 번식과 높은 생존율을 위해 지지대와 상기 지지대에서 돌출되는 복수의 가지를 가지는 말잘피 종자의 발아생육 거치대에 관한 것이다. 본 발명은 말잘피 종자가 상기 말잘피 종자의 발아생육 거치대의 가지에 결착되도록 하여 파도나 조류 등에 의해 말잘피 종자의 유실을 방지하여 말잘피 군락을 안정적으로 형성함으로써 수산자원생물의 직간접적인 먹이원의 확보 등에 의한 수중생물의 서식처 확보 및 수중 수질 개선 등의 효과로 인한 수산 생산성을 높이는 말잘피 종자의 발아생육 거치대에 관한 것이다.본 발명에 따른 말잘피 종자의 발아생육 거치대는 말잘피 종자가 부착 되도록 하여 파도나 조류 등에 의한 말잘피 종자의 유실을 방지하여 말잘피 군락을 보다 안정적으로 형성할 수 있도록 하여 수산자원생물의 직간접적인 먹이원의 확보에 의한 수중생물의 서식처 및 산란장 제공, 치어의 생육지 제공 등으로 이어져 수산 생산성을 높이고, 말잘피 군락에 의한 수중 환경정화 및 적조 예방에도 기여하는 이점이 있다. 본 발명에 따른 말잘피 종자의 발아생육 거치대는 종래의 말잘피 성체를 이식하여 말잘피 군락을 형성하는 방법과 달리 말잘피 종자를 자연적으로 생장시킴으로써 이식에 따른 천연 말잘피 서식지의 훼손이 없으며 또한 이식된 성체 말잘피의 생존율에 비해 월등히 높은 말잘피의 번식률을 확보하는 이점이 있고 또한 종래의 수중 에폭시 등의 접착수단을 이용한 아식에 비해 화학약품의 독성 물질을 사용하지 않고 거센 파도나 빠른 조류의 연안지대에 말잘피의 높은 생존율과 번식률을 보장받을 수 있는 이점이 있다.

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부산대학교

등록일

2006-05-22

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일반기술 생명과학 > 발생학

신규한 아스퍼질러스 오리재 파이루베이트 디카르복실라제유전자의 프로모터, 그 재조합 플라스미드 및 형질전환된미생물

○ 기술발명의 목적: 상기 균주를 이용하여 아스퍼질러스 오리재의 유용한 재조합단백질의 생산방법을 제공○ 기술 요약 및 특징: 본 발명은 장류 제조 및 효소 생산 등의 식품산업에 사용되는 균주인 아스퍼질러스 오리재(Aspergillus oryzae)의 파이루베이트 디카르복실라제(pyruvate decarboxylase) 유전자의 프로모터 부분의 유전자 염기서열에 관한 것으로서 아스퍼질러스 오리재의 영양생식 세포에서 가장 많이 발현되는 것으로 분석된 파이루베이트 디카르복실라제 유전자를 아스퍼질러스 오리재 ATCC 22788로부터 분리하고 염기서열을 분석함으로써 이 유전자의 프로모터 부분을 특성화하였고 분리된 프로모터를 이용하여 아스퍼질러스 오리재 및 다른 곰팡이에서 유용단백질의 발현을 높히고 생산성을 향상할 수 있는 뛰어난 효과가 있다.○ 색인어: 아스퍼질러스 오리재, 파이루베이트 디카르복실라제 프로모터본 발명은 아스퍼질러스 오리재의 게놈 DNA로부터 유전자 은행을 제작하는 단계; 아스퍼질러스 오리재의 영양생식세포에서 만든 유전자표지 (Gene Signature)중 다량으로 발견된 파이루베이트 디카르복실라제 유전자 표지를 프로브(probe)로 사용하여 아스퍼질러스 오리재의 유전자은행을 선별하는 단계; 선별된 클론으로부터 파이루베이트 디카르복실라제 유전자의 프로모터부분을 분리하는 단계; 분리된 프로모터의 세기를 검증하는 단계로 구성된다.이하, 본 발명의 파이루베이트 디카르복실라제 유전자의 프로모터부분의 염기서열을 밝히기 위한 구체적인 방법은 실시예를 들어 설명하지만, 본 발명의 권리 범위는 이들 실시예에만 한정되는 것은 아니다.실시예1:아스퍼질러스 오리재 파이루베이트 디카르복실라제(Pyruvate decarboxylase) 유전자의 프로모터부분의 분리 아스퍼질러스 오리재에서 다량 발현되는 파이루베이트 디카르복실라제 유전자의 유전자 표지가 Hwang 등(Hwang, H.-A., Lee, D. W., Kim, J. H., Lee, T. K., Yang, M. S., and Chae, K.-S. (1998) Quantitative analysis of expressed genes inAspergillus oryzaeby sequencing 3'-directed cDNA clones, J. Microbiol. 36: 111-117)에 의해 발표되었다. 따라서 밝혀진 유전자 표지(GS)를 random prime labelling의 방법에 의해 방사성 동위원소 α- 32P-dCTP로 표지(labelling)하고 아스퍼질러스 오리재의 게놈 DNA를 여러 가지의 제한효소로 절단한 후 서던 블럿 하이브리제이션(Southern blot hybridization)방법에 의해 2.5 kbHindⅢ DNA절편에 파이루베이트 디카르복실라제 유전자가 위치함을 알아내었다. 따라서 아스퍼질러스 오리재의 게놈DNA로부터 pUC19 벡터(vector)에HindⅢ 제한효소를 사용하여 유전자 은행을 만들고 위에서 사용한 표지(probe)를 사용하여 파이루베이트 디카르복실라제 유전자가 포함된 2.5 kb의HindⅢ DNA절편을 갖는 클론을 찾아내었다. 이HindⅢ 절편을 염기서열 결정에 의해 확인하였으나 프로모터 부분이 완전히 포함되지 않았으므로, 위와 같은 방법에 의해 파이루베이트 디카르복실라제 유전자의 프로모터 부분이HindⅢ 절편의 처음 253 bp에 위치한EcoRⅤ로부터 위쪽(upstream)으로 1.2 kb의EcoRⅤ 절편에 위치함을 확인하였다.

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전북대학교

등록일

2006-05-22

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