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일반기술 생명과학 > 프로테오믹스

돌연변이된 ＳＵＭＯ-1 단백질

본 발명은 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 돌연변이된 SUMO-1 단백질 및 이를 함유하는 SUMO화된 단백질의 검출용 조성물, 이를 이용하여 SUMO화된 단백질을 검출하는 방법을 제공한다.본 발명의 돌연변이된 SUMO-1 단백질은 정상 SUMO화 활성을 나타내고, 이를 이용하여 기질 단백질에서의 SUMO화 위치를 확인할 수 있으므로 이를 통해 단백질의 SUMO화와 관련된 치매, 당뇨, 암과 같은 질병에 대한 프로테오믹스 연구에 유용하게 사용될 수 있다. 대표청구항) 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 돌연변이된 SUMO-1 단백질.

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이화여자대학교

등록일

2008-12-29

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일반기술 생명과학 > 프로테오믹스

종양마커 발견을 위한 혈청 프로테옴 연구

혈장은 농도가 아주 높은 일련의 단백질들들을 함유하고 있어 (혈장 단백질의 약 80%가 알부민과 감마글로불린임) 분석이 쉽지 않다. 그렇기 때문에 프로테옴 연구는 소량의 단백질 성분들의 비율에 관심을 갖는다.혈장에 든 다량의 단백질들을 부분적으로 제거하고 프로테옴 분석 가능성을 증대시키기 위해 혈청을 열처리하였다. 이를 통해 혈청의 ≪내열 부위≫를 만들어냈다.다음 질병을 앓는 환자들 10명씩으로 구성된 5개 그룹들에서 샘플을 채취하였다.- 난소암 환자들- 자궁암환자들- 유선암 환자들- 난소양성종양 환자들- 건강한 여성들샘플들은 이합체 전기영동법과 MALDI-ТОF/ТОF-MS로 분석하였다.유선암 환자들의 경우 a1-acid glycoprotein (orosomukoid)과 clusterin (apolipoprotein J) 혈중 농도가 건강한 사람들에 비해 낮았다. a1-acid glycoprotein은 글리코실화된 단백질 질량의 두 배가 되었다.트랜스티레틴 - 이는 운반단백질로 염증이 생길 경우 혈중수치가 낮아진다. 특히 간염일 경우 그러하다. 난소암에서도 수치가 떨어졌다.Apolipoprotein A-1 형태들의 농도는 종류에 상관없이 암에 걸렸을 경우 그 농도가 낮아졌다.합토글로빈 (Haptoglobin) 알파-1은 난소암과 유선암에 걸렸을 경우 농도가 낮아졌다. 이는 다양한 종류의 악성종양 환자들의 혈청 절삭 분석 결과와 부합하는 것이었다. 혈청의 내열 절단면을 이용하여 저분자, 중분자 질량을 가진 단백질의 프로테옴 연구를 할 수 있다. 특히 이는 이합체 전기영동법에 좋다.

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한국기술벤처재단

등록일

2009-03-27

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대장암 단백질 마커

대장암은 암환자들의 사망률로 볼 때 세계 3위이다. 암환자 사망률의 총 10%를 차지하는데, 러시아도 예외가 아니다. 게다가 대장암 발병률이 계속 증가하고 있다.현재 일련의 대장암 단백질 마커들이 알려졌는데, CEA, 암항원 (СА) 242, 19-9, 72-4, 그리고 Tu M2-PK 등이 있다. 그러나 이러한 마커들은 민감도가 낮기 때문에 초기 진단에 이용하는 데 어려움이 있다. 한편 종양전이로 인해 간에 주로 나타나는 단백질은 혈청에서도 발견될 가능성이 크다. 그래서 초기진단용 마커로 이용할 수 있는 가능성이 크다.건강한 간조직과 종양이 전이된 간조직의 샘플은 대장암이 간에 전이된 후 이를 제거하는 수술을 통해 확보하였다. 그리고 간조직 샘플을 저온저장하는 은행이 만들어졌다. 저온저장은행에 보관되었던 인간 간조직 샘플의 프로테옴을 두 종류의 질량분광법으로 분석하였다 (이온 트랩 XCT Ultra와 4중극자 Time of-Flight 분석기 Q-TOF).간조직에서 정체가 확인된 마이크로솜 파편의 단백질들은 총 500여 가지였다. 프로테오믹스 SpectrumMill 소프트웨어를 이용해 일부 대장암 환자들의 간조직 샘플들에서 시토크롬 p450수치가 정상인의 것보다 더 많은 것으로 나타났다. 시토크롬 p450의 isoform들의 생화학 활성 테스트로 대장암 환자의 경우 그 활성도가 훨씬 높은 것으로 나타났다. 프로테옴 분석법으로 인간 간세포의 마이크로솜 멤브레인에서 시토크롬 p450을 발견하고 정체를 파악하였다.수술로 혈관종(정상세포)과 대장암이 전이된 간암(병든 세포)을 치료하기 위해 절단한 간조직을 연구재료로 이용하였다.분석과정은 다음단계들을 포함한다.모노머와 이합체 전기영동으로 단백질 분리질량분광법으로 45~66 kDa 젤부분의 분자를 스캔 (시토크롬 p450의 분자질량에 해당하는 부분).1D-ZOO 기술로 단백질 분석. 1D-ZOO는 개별 질량분광분석을 하였던 기존의 표준분석법과 달리 복수분석으로 하였다.간에 병이 들었을 때 단백질 수가 정상수치 보다(445) 많아졌다 (825). 45~66 kDa 부분에서 13개 마이크로솜 멤브레인 단백질의 정체가 확인되었으며, 그 중에는 1А2, 1В1, 2А6, 2Е1, 2C8, 2С9, 2С10, 2D6, 3А4, 4A11, 4F2 같은 시토크롬 p450들도 있었다.1А, 2В, 2С, 3А, 2Е 같은 시토크롬 p450 효소활성 연구를 통해 1А1/1А2와 3А4 시토크롬 p450의 O-dealkylation과 N-demethylation 속도가 감소되는 것을 알게 되었다. 그리고 프로테옴 분석과 생화학분석을 겸하는 것이 시토크롬 p450의 종류를 확인하고 그 발현정도를 파악하는 데 훨씬 효과적임을 확인하였다.

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한국기술벤처재단

등록일

2009-03-27

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일반기술 생명과학 > 프로테오믹스

헬리코박터 파일로리균의 프로테옴 지도 연구

Helicobacter pylori는 전세계적으로 널리 퍼진 질병 중 하나이다. 그람 음성균(gram-negative bacteria)인 Н. pylori는 인간 위장 점막에서 발견되는데, 만성위염, 위궤양, 십이지장궤양 등의 원인이 되고, 이것이 발전되면 악성종양으로 발전되기도 한다. Н. pylori의 게놈은 현재까지 연구된 박테리아들 중 가장 변화가 심한 것으로 알려져 있다.Н. pylori의 균주는 십이지장궤양과 만성위염 환자들의 바이옵시(Biopsy)에서 추출한 것이다 (이 환자들은 모스크바와 모스크바주, 그리고 노보시비르스크 두 지역에서 선발됨). 트립신 가수분해물의 이합체 젤 전기영동과 MALDI-TOF-MS로 박테리아 프로테옴 지도를 만들었다. 이 지도에 나타난 약 500개 단백질이 이미 분석되었으며, 105개는 그 정체가 확인되었다. 프로테옴 지도에서 Н. pylori 균과 가장 많이 닮은 단백질의 위치를 평가하였으며, 그 중 몇 개는 발현정도도 평가하였다.병균연구는 프로테옴 지도에서 동일한 타입의 변화를 겪는 것들을 묶어서 진행하였는데, 총 두 그룹이 만들어졌고, 그 중 한 그룹에는 서로 다른 지방들에서 얻은 병균들이 포함되었다.(모스크바주와 노보시비르스크)프로테옴 지도에서 등전점(Isoelectric dots) 차이에 따라 다음과 같은 특징들이 확인되었다.세포단백질 샤페론(chaperone) groEL (60 kDa)트리거 팩터 trigger factor (tig)질병부위 단백질 Cag26;아데노신 삼인산(ATP)에 속해있고, 프로테이나아제와 결합하는 sub-unit헤몰리신(hemolysin)을 분비하는 전구단백질 (precursor protein)전사(transcription) 조절인자로 추정되는 물질초과산화물 불균등화 효소(superoxide dismutase)와 NADPH-flavinoxyreductase의 자유래디컬과 과산화수소(Hydrogen peroxide)를 불활성화시키는 효소들 세포벽 리포 프로테인 성분비혈청 페리틴(ferritin)발현정도에 따른 일련의 단백질들의 변화가능성이 규명되었다. 예를 들어 질병요인이 되는 단백질점 cag26(독성부위 유전자)의 경우 일부 임상분리균(clinical isolate) 지도들에서 발견되지 않았다. 지도에서 일정한 단백질점들이 부재하는 것은 단백질 발현이 억제되어서 그렇거나 또는 게놈에서 해당 유전자가 누락되었기 때문이다.

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한국기술벤처재단

등록일

2009-03-27

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