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일반기술 생명과학 > 식물자원

고추 한별품종으로부터 분리한 식물병 방어 관련 스텔라시아닌 유전자 및 이를 이용한 식물체의 저항성 반응 판별방법

본 발명은 식물 병원균 및 외부 환경의 스트레스에 의한 식물체의 저항성반응 여부 판별과 저항성 작물의 육종에 분자유전학적으로 이용될 수 있는 스텔라시아닌 유전자에 관한 것으로, 고추세균성점무늬병( Xanthomonas campestris pv. vesicatoria )에 대해 저항성을 보이는 한별 품종으로부터 스텔라시아닌 유전자를 분리하는 한편, 식물병원균,방어관련 유전자 유도체로 알려진 화합물 및 여러 가지 외부환경 스트레스에 의한 스텔라시아닌 유전자의 발현조절기작을 조사함으로써 식물체의 병원균에 대한 저항성반응의 표지 및 식물병저항성 분자육종을 위한 유전재료로 이용할 수 있는 효과가 있다.이상의 실시예를 통하여 명백한 바와 같이, 본 발명은 고추 세균성 점무늬병( Xanthomonas campestris pv. vesicatoria )에 대해 저항성을 보이는 고추 한별 품종( Capsicum annuum L. cv. Hanbyul)으로부터 식물병 방어반응을 보이는 스텔라시아닌 유전자를 분리하여 그 염기서열을 결정함으로써 식물체 방어반응의 표지 및 식물병 저항성 작물의 분자육종을 위한 유전재료로 이용될 수 있고 또한 고추 세균성 점무늬병균, 고추역병균, 탄저병균 및 비생물적 유도체에 의한 상기 스텔라시아닌 유전자의 유도 발현 정도를 측정하는 방법을 제공하고, 저항성을 일으키는 식물체의생화학적 변화를 분자적 수준에서 이해함으로써 이를 이용하여 식물 병원균 및 외부 환경의 스트레스에 의한 식물체의 방어반응 여부 판별과 저항성 작물을 육종할 수 있는 효과가 있으므로 농산업 및 식물육종산업상 매우 유용한 발명인 것이다.

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고려대학교
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2007-03-15
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일반기술 생명과학 > 생물 분리정제 (H74)

아토피성 피부염에 치료효과를 갖는 약독화된 살모넬라균주

본 발명은 아토피성 피부염에 대한 치료효과를 보이는 약독화된 살모넬라 균주의 새로운 용도에 관한 것으로서, 더욱 구체적으로는 약독화된(attenuated) 살모넬라(Salmonella typhimurium) 균주를 유효성분으로 함유하는 아토피성 피부염 치료용 조성물에 관한 것이다.본 발명이 제공하는 살모넬라 균주는 병원성이 없는 약독화된 살모넬라 균주로써 동물에 주사할 때 체내 사이토카인의 변화를 유도하여 아토피피부염의 억제인자중 하나인 인터페론 감마(Interferon-gamma)의 발현을 높이고 활성인자인 IL-4 의 발현을 낮추어 주었으며 동시에 IgE의 발현을 억제하는 효과를 보여주었다. 이 결과로 피부염완화를 유도하고 아토피성 피부염의 증상인 가려움증 및 피부염증의 증상완화효과를 보여주었다. 따라서, 본 발명의 살모넬라 제제는 난치성 질환으로 적절한 치료제가 부제한 아토피성질환의 치료 및 보조 예방제제로서 의약산업에 매우 유용하게 사용될 수 있다.본 발명이 제공하는 살모넬라 균주는 병원성이 없는 약독화된 살모넬라 균주로써 동물에 주사할 때 체내 사이토카인의 변화를 유도하여 아토피피부염의 억제인자중 하나인 인터페론 감마(Interferon-gamma)의 발현을 높이고 활성인자인 IL-4의 발현을 낮추어 주었으며 동시에 IgE의 발현을 억제하는 효과를 보여주었다. 이 결과로 피부염 완화를 유도하고 아토피성 피부염의 증상인 가려움증 및 피부염증의 증상완화효과를 보여주었다. 따라서, 본 발명의 살모넬라 제제는 난치성 질환으로 적절한 치료제가 부제한 아토피성질환의 치료 및 보조 예방제제로서 의약산업에 매우 유용하게 사용될 수 있다.

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고려대학교
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2007-03-15
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일반기술 생명과학 > 식물자원

고추 한별 품종 (Capsicum annuum L.cv. Hanbyul)으로부터 유래한리피드트랜스퍼단백질 CALTP Ⅰ·CALTPⅡ·CALTPⅢ을 코딩하는 유전자 및 마커로서의 활

본 발명은 고추 한별 품종에서 분리한 세 종류의 리피드트랜스퍼단백질 유전자군의 염기 서열 및 마커로서의 용도에관한 것으로 이를 이용하면 식물병 저항성과 환경 내성을 유도할 수 있고, 식물병 저항성 또는 환경내성 품종의 육종에 적용함으로써 식물병을 방제할 수 있으며, 식물의 전신획득저항성을 유도하는 미생물 또는 물질의 선발에 이용 할수 있는 뛰어난 효과를 제공한다.상기의 목적은 고추·세균성점무늬병원균의 특정 레이스에 대해 저항성을 보이는 고추 한별 품종에서 분리한 세 종류의 리피드트랜스퍼단백질의 염기서열을 밝히고, 다양한 생물적 ·환경적 인자에 의한 발현을 확인함으로써 달성되었다.본 발명은 고추 한별 품종 유래 리피드트랜스퍼단백질 CALTPⅠ ·CALTPⅡ ·CALTPⅢ의 아미노산 서열을 각각코딩하는 서열목록의 서열 1 ·2 ·3에 기재된 유전자 염기서열을 제공한다.또한 본 발명은 생물적 ·환경적 스트레스에 대해 반응하는 상기 리피드트랜스퍼 유전자중 어느 하나 이상의 유전자를 함유함을 특징으로 하는 생물적 ·환경적 스트레스 진단용 마커를 제공한다.아울러, 상기 기재의 생물적 ·환경적 스트레스 진단용 마커를 숙주식물세포에 주입한 경우에 있어, 상기 마커로부터전사된 mRNA를 확인함으로써 숙주식물세포들이 생물적 ·환경적스트레스에 노출되어 있는지 여부를 진단하는 방법을 제공한다.상기의 실시예에 의하여 고추에서 저항성 반응인 과민성 반응에서 발현이 유도되는 본 발명의 리피드트랜스퍼단백질유전자 산물은 식물병 저항성과 환경 내성을 유도할 수 있고, 식물병 저항성 또는 환경내성 품종의 육종에 적용함으로써 식물병을 방제할 수 있으며, 이를 이용하여 식물의 전신획득저항성을 유도하는 미생물 또는 물질 선발에 이용 할수 있는 뛰어난 효과가 있으므로 식물재배산업상 매우 유용한 발명인 것이다.

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고려대학교
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2007-03-15
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일반기술 생명과학 > 식물자원

식물병원세균에 의해 유도되는 고추 유래의 아스코르베이트 과산화효소 유전자와 과산화효소 유전자 및 상기 유전자를 이용한 식물방어반응 탐색 방법

본 발명은 식물 병원성 세균 혹은 식물체 병저항성 유도물질에 의해 유도되는 고추 유래의 방어유전자 및 상기 유전자를이용한 식물방어반응의 탐색방법에 관한 것으로, 본 발명은 식물 병원성 세균 혹은 식물체 병저항성 유도물질에 의해 유도되는 방어유전자인 고추 유래의 아스코르베이트 과산화효소 및 과산화효소를 각각 코딩하는 유전자를 제공하는 뛰어난 효과가 있다. 또한, 본 발명은 방어유전자인 고추 유래의 아스코르베이트 과산화효소 및 과산화효소를 각각 코딩하는 유전자를 이용하여 식물방어반응을 탐색하는 방법을 제공하는 뛰어난 효과가 있다. 따라서, 본 발명 고추 유래의 아스코르베이트과산화효소 및 과산화효소를 각각 코딩하는 유전자를 이용하여 식물방어반응의 표지 및 고추분자육종을 위한 유전재료로서 사용될 수 있다.본 발명의 상기 목적은 고추세균성점무늬병균에 감염된 고추에서 방어유전자를 디퍼련셜 하이브리다이제이션을 이용하여분리하고 선별된 유전자의 염기서열을 결정한 다음 건전한 고추식물에서 상기 유전자들의 각 기관별 발현 양상을 조사하고 고추세균성점무늬병균에 감염된 고추 잎에서 총 과산화효소 활성 및 과산화수소의 함량을 조사하며 고추역병균 또는고추열매탄저병균에 감염된 고추 잎에서 상기 방어유전자의 발현 여부를 조사하고, 식물체 병저항성 유도물질인 살리실산과 과산화수소를 처리하여 상기 방어유전자의 발현 여부를 조사함으로써 달성하였다.이상 상기 실시예를 통하여 설명한 바와 같이, 본 발명은 식물 병원성 세균 혹은 식물체 병저항성 유도물질에 의해 유도되는 방어유전자인 고추 유래의 아스코르베이트 과산화효소 및 과산화효소를 각각 코딩하는 유전자를 제공하는 뛰어난 효과가 있다. 또한, 본 발명은 방어유전자인 고추 유래의 아스코르베이트 과산화효소 및 과산화효소를 각각 코딩하는 유전자를이용하여 식물방어반응을 탐색하는 방법을 제공하는 뛰어난 효과가 있다. 따라서, 본 발명 고추 유래의 아스코르베이트 과산화효소 및 과산화효소를 각각 코딩하는 유전자를 이용하여 식물방어반응의 표지 및 고추분자육종을 위한 유전재료로서사용될 수 있어 분자육종산업상 매우 유용한 발명인 것이다.

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고려대학교
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2007-03-15
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일반기술 생명과학 > 식물자원

고추의 엘알알 단백질 유전자 및 식물병저항성 반응마커로서 이용

본 발명은 고추식물의 고추세균성점무늬병( Xanthomonas campestris pv. vesicatoria )의 비병원성균에 감염되었을 경우 저항성을 보이는 한별 품종으로부터 분리한 엘알알 단백질(LRR: leucine-rich repeat protein) 유전자의 발현 특성과 기타 식물병원균의 감염이나 비병원성균의 처리, 식물병저항성유도물질로 알려진 화학물질들을 처리, 건조, 저온, 염 및 상처와 엽산의 처리시, 식물병원균의 감염 및 염, 상처처리에서만 엘알알 단백질 유전자가 발현됨을규명한 발명이다. 이 연구를 통해 식물체의 병원균에 대한 방어반응의 표지 및 분자육종을 위한 유전재료로서 고추식물의 엘알알 단백질 유전자의 사용이 제안되어 질 수 있다.본 발명은 고추 한별 품종 유래 엘알알 단백질의 아미노산 서열을 암호화하는 서열번호 2에 기재된 유전자의 염기서열을 제공한다.또한, 본 발명은 서열번호 2 기재의 엘알알 단백질 코딩 유전자를 포함하는 것을 특징으로 하는 식물 형질전환용 벡터를 제공한다.또한, 본 발명은 상기의 벡터가 도입된 숙주식물로부터 서열번호 2에 기재된 엘알알 단백질 코딩 유전자의 mRNA를확인함으로써 숙주식물들이 고추세균성점무늬 병균, 고추역병균의 병원성, 고추역병균의 비병원성 균주 및 고추탄저병균 중 선택되는 어느 하나에 감염된 것을 확인하는 것을 특징으로 하는 식물체의 생물적 침입에 대한 감염 여부 확인방법을 제공한다.또한, 본 발명은 상기의 벡터가 도입된 숙주식물로부터 서열번호 2에 기재된 엘알알 단백질 코딩 유전자의 mRNA를확인함으로써 숙주식물들이 염 또는 상처에 노출되어 있는지를 확인하는 것을 특징으로 식물체의 환경적 스트레스에의 노출 여부 확인방법을 제공한다.

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고려대학교
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2007-03-15
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일반기술 생명과학 > 생물반응기

1,3-위치 선택성 리파아제와 무위치 선택성 리파아제를이용하여 바이오디젤을 제조하는 방법

본 발명은 유지와 알코올을 기재로 하고 1,3-위치 선택성 리파아제 및 무위치 선택성 리파아제를 동시 첨가하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 바이오디젤을 생산하는 방법에 관한 것으로, 성질이 다른 두 종류의 리파아제를 사용하는 본 발명의 방법으로 바이오디젤의 생산 효율을 극대화시킬 수 있다.본 발명은 유지와 알코올을 기재로 하고 1,3-위치 선택성 리파아제 및 무위치 선택성 리파아제를 동시 첨가하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 바이오디젤을 생산하는 방법에 관한 것으로, 성질이 다른 두 종류의 리파아제를 사용하는 본 발명의 방법으로 바이오디젤의 생산 효율을 극대화시킬 수 있다.본 발명의 방법으로 바이오디젤을 생산함으로써 높은 전환률로 반응시간을 단축시켜 반응 효율을 극대화할 수 있다.본 발명의 방법으로 바이오디젤을 생산함으로써 높은 전환률로 반응시간을 단축시켜 반응 효율을 극대화할 수 있다.본 발명의 방법으로 바이오디젤을 생산함으로써 높은 전환률로 반응시간을 단축시켜 반응 효율을 극대화할 수 있다.본 발명의 방법으로 바이오디젤을 생산함으로써 높은 전환률로 반응시간을 단축시켜 반응 효율을 극대화할 수 있다.

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고려대학교
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2007-03-15
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일반기술 생명과학 > 식물자원

아세틸콜린에스테라제 저해용 약쑥 추출물 및 이의 정제방법

본 발명은 약쑥 메탄올 추출물로부터 분리한 퇴행성 치매와 밀접한 관련이 있는 뇌 세포에 함유된 아세틸콜린에스테라제 저해능 및 뇌신경세포 보호능을 갖는 저분자성 플라보노이드류와 그의 정제방법에 관한 것이다. 본 발명의 아세틸콜린에스테라제 저해성 플라보노이드류는 구성분자가 갖는 극성도에 따른 유기용매 분획, 연속적인 실리카겔 크로미토그라피, TLC (thin layer chromatography) 등 일련의 정제공정을 수행함으로써 약쑥 메탄올 추출물로부터 순수분리한다. 이렇게 제조된 AChE 저해활성 물질은 저분자의 플라본 성분으로서 아세틸콜린에스테라제 저해능 뿐만 아니라 in vitro 뇌 신경세포 보호 효과도 가지고 있어 퇴행성 치매 환자나 고령화로 인한 기억력 감퇴현상의 개선제로서 기능성 식품이나 약품소재에 유용하게 사용될 수 있다. 아울러 본 발명은 국내에서 충분히 재배 가능한 약쑥을 농가 부수입원으로 재배할 수 있다는 측면에서 유용하다.이상에서 상세히 설명하고 입증한 것과 같이 본 발명은 약쑥 메탄올 추출물로부터 분리한 뇌 신경세포 함유 AChE 저해성 플라보노이드류 및 그의 정제방법을 제공한다. 본 발명의 AChE 저해성 플라보노이드류는 유기용매 분획화, silica gel column 크로마토그래피, TLC (thin layer chromatography)를 통한 일련의 공정으로 약쑥 메탄올추출물에서순수 분리한다. 이렇게 분리한 AChE 저해성 천연 활성물질은 저분자의 플라보노이드류로 in vitro 실험에서와 같이신경세포 보호 효과를 갖고 있으므로 퇴행성 치매 또는 기억력 감퇴 등에 효율적인 소재로 이용할 수 있고 기능성 식품으로의 이용도 유용하다. 한편 약쑥의 재배가 국내에서 비교적 보편적으로 가능 할 뿐 아니라 농가의 부 수입원 개발이라는 측면에서 제약산업 및 기능성식품산업상 매우 유용한 발명이다.

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고려대학교
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2007-03-15
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일반기술 생명과학 > 식물자원

RT-PCR을 이용하여 이산화탄소 가스 처리에 의한브라시카 과 식물의 자가불화합성 타파여부를스크리닝하는 방법

본 발명의 기술적 과제는 CO 2 가스처리에 각기 다르게 반응하는 다른 두 브라시카 캄페스트리스( Brassica campestris ) 라인인 733와 734를 비교 실험하여 달성할 수 있었다. 734라인은 CO 2 가스처리에 민감하여 자가불화합성타파가 용이하게 되는 반면 733라인은 그렇지 못한 둔감한 라인으로 밝혀졌다. 상기 실험에 의하여, 734라인의 자가불화합성 타파가 자가불화합성 관련 유전자인 SLG 유전자의 발현 감소를 수반하고 있음을 밝혀졌다.본 발명에서 또한 RT-PCR실험을 수행하여 734라인의 CO 2 가스처리에 대한 자가불화합성 타파와 S-유전자의 발현과의 연관성을 알아 볼 수 있었다. 두 라인의 주두에서 얻어진 mRNA를 주형으로하고 SLG 유전자의 염기서열에서제작된 프라이머로 수행한 RT-PCR 실험에서 CO 2 가스처리 후 734라인에서는 SLG 유전자의 발현 감소를 보이는반면 733라인에서는 별 다른 변화를 보여주지 않음을 발견하였다.따라서 본 발명의 RT-PCR을 유전자의 발현양을 측정하여, CO 2 가스처리에 의한 자가불화합성의 타파 여부를 좀더 빠르고 쉽고, 정확하게 스크리닝 할 수 있게되어 종자산업 발달에 이바지 할 수 있게 되었다.본 발명은 RT-PCR을 이용하여 유전자 발현양을 측정하여 브라시카 과(Brassica family)의 자가불화합성 타파 여부를 스크리닝하는 방법에 관한 것으로, 기존의 매개체를 이용한 수분 후 CO₂가스를 처리하여, 종자가 형성되는지 아닌지를 보거나 염색 후 현미경으로 관찰하는 방법들의 복잡하고 정확하게 확인할 수 없는 등의 문제점을 극복하고, 좀더 빠르고 쉽고, 정확하게 자가불화합성 타파 여부를 스크리닝하여 CO 2 가스처리 등에 의한 자가불화합성을 보다폭 넓게 종자 산업에 이용할 수 있는 효과가 있으므로 이는 종자 산업상 매우 유용한 발명이다.

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고려대학교
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2007-03-15
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일반기술 생명과학 > 줄기세포 분화 기술

인간 배아줄기세포 증식 측진 인간 태반기질세포 생산 및인간 배아줄기세포 증식배양 기술

본 기술개발의 목적은 정상 산모로부터 정상 분만 후 제공자에 해가 없이 채집 가능하면서 추가적 비용 없이 충분한 공급이 가능한 인간 태반기질세포를 지지세포로 이용하여 인간 배아 줄기세포의 증식배양 효과가 동물 유래 지지세포와 비견되거나 우월함을 증명함으로써 보다 안전하고 효율적으로 인체에 적용할 수 있는 인간 배아 줄기세포 증식배양 기술을 개발함에 있다. 이를 위하여 출원인 등은 인간 태반기질세포를 지지세포 적용한 인간 배아 줄기세포의 증식배양을 시도하면서 그를 쥐 유래 STO 세포를 지지세포로 증식배양한 인간 배아줄기세포와 비교하고 면역화학염색, RT-PCR, 그리고 염색체, 유전자 지문 분석 등을 통하여 증명하였다.본 기술 발명은 인간 배아 줄기세포의 증식배양 산물을 실제 인간의 세포치료를 위하여 매우 유용하게 응용될 수 있다.본 발명으로 정상 인간 태반기질세포가 인간 배아줄기세포의 증식배양을 위한 지지세포로 탁월한 기능을 나타냄을 확인할 수 있다. 또한 상기 인간 태반기질세포는 기존 기술인 쥐 배아 섬유아세포를 이용하는 경우보다 안전하면서도 효율적으로 인체에 적용할 수 있는 인간 배아줄기세포를 생산할 수 있으리라고 기대된다.본 발명으로 정상 인간 태반기질세포가 인간 배아줄기세포의 증식배양을 위한 지지세포로 탁월한 기능을 나타냄을 확인할 수 있다. 또한 상기 인간 태반기질세포는 기존 기술인 쥐 배아 섬유아세포를 이용하는 경우보다 안전하면서도 효율적으로 인체에 적용할 수 있는 인간 배아줄기세포를 생산할 수 있으리라고 기대된다.

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고려대학교
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2007-03-15
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일반기술 생명과학 > 식물자원

오스모틴을 코딩하는 씨에이오에스엠1 유전자 및 이를이용한 식물병저항성 탐색방법

본 발명은, 고추세균성점무늬병에 대한 저항성유전자인 CAOSM1 유전자 및 이의 저항성 탐색에의 이용방법에 관한 것으로서, 구체적으로는, 감자의 PA35 유전자, 담배의 PR-5D 유전자, 담배의 NP24 유전자 및 토마토의 AP24 유전자와 각각96%, 95.2%, 77.2% 및 77.2%의 상동성을 나타냄으로써 신규한 것으로 밝혀진 오스모틴 코딩 유전자 CAOSM1의 염기/아미노산 서열; 및 세균, 화학물질 또는 환경적 스트레스를 접종 또는 처리한 고추 식물체로부터 RNA를 분리하여 전기영동시키고 나이트란막으로 전이시킨 후, 32P를 처리한 상기 CAOSM1 유전자 프로브와 반응시켜 CAOSM1 유전자의 차별적 발현을 확인하는 것으로 구성되는 식물체 병저항성의 탐색방법에 관한 것이다.이상과 같이 본 발명이 완성됨으로써, 감자의 PA35 유전자와 96%, 담배의 PR-5D 유전자와 95.2%, 담배의 NP24 유전자와 77.2%, 토마토의 AP24 유전자와 역시 77.2%의 상동성을 나타냄으로써 신규한 것으로 밝혀진 오스모틴 코딩 유전자CAOSM1의 염기/아미노산 서열; 및 세균, 화학물질 또는 환경적 스트레스를 접종 또는 처리한 고추 식물체로부터 RNA를분리하여 전기영동시키고 나이트란막으로 전이시킨 후, 32P를 처리한 상기 CAOSM1 유전자 프로브와 반응시켜CAOSM1 유전자의 차별적 발현을 확인하는 것으로 구성되는 식물체 병저항성의 탐색방법이 제공될 수 있게 되었다.본 발명이 완성됨으로써, 식물 병에 대한 방어반응에 관여하는 것으로서 식물병저항성 관련 유전자의 하나인 오스모틴(Osmotin)을 코딩하는 CAOSM1 유전자를 분리하여 해독함으로써 그 서열 정보 및 그에 따른 아미노산 서열 정보를 제공함과 동시에, 이를 이용하여 식물 병에 대한 저항성 존재 여부를 탐색하는 저항성 탐색방법을 제공할 수 있게 된 것이다.

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고려대학교
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2007-03-15
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일반기술 생명과학 > 줄기세포 분화 기술

인간 배아줄기세포의 배아체 분화를 위한 인간태반기질세포 생산 및 배아체 분화배양 기술

본 발명은 인간 배아 줄기세포로부터 배아체(embryoid bodies) 생산을 목적으로 분화배양 시 지지세포(feeder cells)로 인간 태반기질세포(human placenta stromal cells)를 적용시키는 기술에 관한 것이다. 구체적으로, 본 발명은 인간 배아줄기세포로부터 배아체 생산을 위한 지지세포로 인간 태반기질세포를 사용한 경우 기존의 쥐 유래 지지세포(STO cells)를 적용한 경우보다 그 증식배양 효율은 비슷하거나 매우 양호함을 증명함으로써 인간 배아줄기세포로부터 배아체 생산을 위한 분화 배양을 위하여 인간 태반 기질세포를 적용시키는 본 기술은 인간 배아 줄기세포 분화배양 산물들의 실제 세포치료에 유용하게 응용될 수 있다.본 발명으로 정상 인간 태반기질세포가 인간 배아줄기세포로부터 분화배양을 통한 배아체생산을 위한 지지세포로 탁월한 기능을 나타냄을 확인할 수 있다. 또한 상기 인간 태반기질세포는 기존 기술인 쥐 배아 섬유아세포를 이용하는 경우보다 안전하면서도 효율적으로 인체에 적용할 수 있는 인간 배아줄기세포 유래 배아체를 생산할 수 있으리라고 기대된다.본 발명으로 정상 인간 태반기질세포가 인간 배아줄기세포로부터 분화배양을 통한 배아체생산을 위한 지지세포로 탁월한 기능을 나타냄을 확인할 수 있다. 또한 상기 인간 태반기질세포는 기존 기술인 쥐 배아 섬유아세포를 이용하는 경우보다 안전하면서도 효율적으로 인체에 적용할 수 있는 인간 배아줄기세포 유래 배아체를 생산할 수 있으리라고 기대된다.

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고려대학교
등록일
2007-03-15
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일반기술 생명과학 > 줄기세포 분화 기술

인간 배아줄기세포 증식 측진 인간 골수기질세포 생산 및 인간 배아줄기세포 증식배양 기술

본 발명은 인간 배아 줄기세포의 증식배양을 위한 지지세포(feeder cells)로 인간 골수기질세포(human bone marrow stromal cells)를 적용시키는 기술에 관한 것이다. 구체적으로, 본 발명은 인간 배아 줄기세포을 위한 지지세포로 인간 골수기질세포를 사용한 경우 그 증식배양 효율은 양호함을 증명함으로써 인간 배아줄기세포 증식배양을 위하여 인간 골수기질세포를 적용시키는 본 기술은 인간 배아 줄기세포 증식배양 산물들의 실제 세포치료에 유용하게 응용될 수 있다.본 발명으로 정상 인간 골수기질세포가 인간 배아줄기세포의 증식배양을 위한 지지세포로 역할을 할 수 있음을 확인할 수 있다. 상기 인간 골수기질세포는 기존 기술인 쥐 배아 섬유아세포를 이용하는 경우보다 안전하게 인체에 적용할 수 있는 인간 배아줄기세포를 생산할 수 있으리라고 기대된다.본 발명으로 정상 인간 골수기질세포가 인간 배아줄기세포의 증식배양을 위한 지지세포로 역할을 할 수 있음을 확인할 수 있다. 상기 인간 골수기질세포는 기존 기술인 쥐 배아 섬유아세포를 이용하는 경우보다 안전하게 인체에 적용할 수 있는 인간 배아줄기세포를 생산할 수 있으리라고 기대된다

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등록일
2007-03-15
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일반기술 생명과학 > 줄기세포 분화 기술

인간 배아줄기세포의 배아체 분화를 위한 인간골수기질세포 생산 및 배아체 분화배양 기술개발

본 발명은 인간 배아 줄기세포로부터 배아체(embryoid bodies) 생산을 목적으로 분화배양 시 지지세포(feeder cells)로 인간 골수기질세포(human bone marrow stromal cells)를 적용시키는 기술에 관한 것이다. 구체적으로, 본 발명은 인간배아 줄기세포로부터 배아체 생산을 위한 지지세포로 인간 골수기질세포를 사용한 경우 그 증식배양 효율이 양호함을 증명함으로써 인간 배아줄기세포로부터 배아체 생산을 위한 분화 배양을 위하여 인간 골수 기질세포를 적용시키는 본 기술은 인간 배아 줄기세포 분화배양 산물들의 실제 세포치료에 유용하게 응용될 수 있다.본 발명으로 정상 인간 골수기질세포가 인간 배아줄기세포로부터 분화배양을 통한 배아체생산을 위한 지지세포로 역할을 할 수 있음을 확인할 수 있다. 또한 상기 인간 골수기질세포는 기존 기술인 쥐 배아 섬유아세포를 이용하는 경우보다 안전하게 인체에 적용할 수 있는 인간 배아줄기세포 유래 배아체를 생산할 수 있으리라고 기대된다.본 발명으로 정상 인간 골수기질세포가 인간 배아줄기세포로부터 분화배양을 통한 배아체생산을 위한 지지세포로 역할을 할 수 있음을 확인할 수 있다. 또한 상기 인간 골수기질세포는 기존 기술인 쥐 배아 섬유아세포를 이용하는 경우보다 안전하게 인체에 적용할 수 있는 인간 배아줄기세포 유래 배아체를 생산할 수 있으리라고 기대된다.

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고려대학교
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2007-03-15
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일반기술 생명과학 > 줄기세포 분화 기술

인간 배아줄기세포 및 배아체로부터 조혈모세포로의 분화를위한 인간 태반기질세포 생산 및 인간 배아줄기세포 및배아체로부터 조혈모세포로의 분화배양 기술

본 발명은 인간 배아 줄기세포로부터 제조된 배아체를 인간 태반기질세포와 복합배양함으로써 CD34+38- 인간 조혈모세포로의 분화를 촉진시키는 기술에 관한 것이다. 본 발명은 인간 배아 줄기세포로부터 5일간 분화된 배아체를 정상 인간 태반기질세포와 복합배양한 경우에 현저하게 CD34+38- 인간 조혈모세포로의 분화를 촉진시킴을 증명함으로써 본 기술은 인간 배아 줄기세포로부터 조혈모세포의 분화/ 증식 촉진을 통하여 세포 치료를 위한 면역세포 공급 및 인공 혈액의 생산에 유용하게 응용될 수 있다.본 발명으로 인간 태반기질세포가 인간 배아줄기세포 및 배아체로부터 조혈모세포로의 분화를 촉진함을 확인할 수 있었다. 특히 인간 유래 지지세포를 사용한 연구, 발명으로는 처음으로 인간 태반기질세포가 인간 배아줄기세포 자체로부터 조혈모세포로의 분화를 촉진함을 증명하였다. 뿐만 아니라 배아체와의 복합 배양에서는 그 효율이 18.47%, 7.43%로 성정촉진인자를 사용하지 않은 점을 감안하면 매우 높은 분화효율을 보이고 있음도 확인할 수 있었다. 결국 상기 인간 태반기질세포는 동물 유래 지지세포를 이용하는 경우보다 안전하게 인체에 적용할 수 있는 조혈모세포를 생산할 수 있으리라고 기대된다. 본 기술 발명은 특히 세포 치료에 필요한 혈액세포 생산 및 인공 혈액의 생산에 매우 유용하게 응용될 수 있을 것이다.

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고려대학교
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2008-04-11
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일반기술 생명과학 > 식물자원

디펜신을 코딩하는 씨에이디이에프1 유전자 및 이를이용한 식물병저항성 탐색방법

본 발명은, 고추세균성점무늬병에 대한 신규 저항성유전자인 CADEF1 유전자 및 이의 저항성 탐색에의 이용방법에 관한것으로서, 구체적으로는, 토마토, 감자, 페튜니아, 해바라기 및 피망과 각각 82%, 76%, 72%, 69%, 68%의 상동성을 나타냄으로써 신규한 것으로 밝혀진 디펜신 코팅 유전자의 염기/아미노산 서열; 및 세균, 화학물질 또는 환경적 스트레스를 접종 또는 처리한 고추 식물체로부터 RNA를 분리하여 전기영동시키고 나이트란막으로 전이시킨 후, 32P를 처리한 상기CADEF1 유전자 프로브와 반응시켜 CADEF1 유전자의 차별적 발현을 확인하는 것으로 구성되는 식물체 병저항성의 탐색방법에 관한 것이다.이상과 같이 본 발명이 완성됨으로써, 토마토와 82%, 감자와 76%, 페튜니아와 72%, 해바라기와 69%, 피망과 68% 등의상동성을 나타냄으로써 신규한 것으로 밝혀진 디펜신 코팅 유전자의 염기/아미노산 서열; 및 세균, 화학물질 또는 환경적스트레스를 접종 또는 처리한 고추 식물체로부터 RNA를 분리하여 전기영동시키고 나이트란막으로 전이시킨 후, 32P를 처리한 상기 CADEF1 유전자 프로브와 반응시켜 CADEF1 유전자의 차별적 발현을 확인하는 것으로 구성되는 식물체의 병저항성 탐색방법이 제공될 수 있게 되었다.본 발명이 완성됨으로써, 식물병저항성 관련 유전자의 하나인 디펜신(defensin)을 코딩하는 신규한 CADEF1 유전자의 염기/아미노산 서열 정보와, 이 염기/아미노산 서열을 이용한 고추세균성점무늬병 저항성 탐색방법이 제공될 수 있게 된 것이다.

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고려대학교
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2007-03-15
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일반기술 생명과학 > 분자생물학

우뭇가사리로부터 분리한 장관면역 활성화 추출물 및 그의제조방법

본 발명은 우뭇가사리로부터 분리한 장관면역 활성화능이 있는 추출물, 및 그의 제조방법과 용도에 관한 것으로서, 건조우뭇가사리에 대해 5배(V/W: ml/g)의 에탄올을 첨가하여 분쇄, 교반한 후 30분간 초음파분쇄(Sonication)하여 상등액과잔사로 분리하고, 상등액을 감압 추출하여 농축, 건조한 다음, 건조물을 물/헥산 혼합용액에 첨가하여 물과 헥산 층으로 분리한 후 이중 물 가용획분을 동결 건조시킴으로써 에탄올추출물 획분을 제조하고; 에탄올추출물 획분을 증류수:획분=2:1(V/W: ml/g)의 비율로 증류수에 용해시켜 열린컬럼크로마토그래피(2.5×30cm)에 넣고서, 헥산/에탄올 6:4(V/V) 용액을 이용 분당 1ml의 유속으로 용출시켜 가용획분을 제조하고; 가용획분을 박층크로마토그래피(실리카 젤 60F2540.5mm, 20×20cm)에 넣고서, 헥산/에탄올/물 65:35:4(V/V/V) 용액으로 용출시켜 3번째 획분을 장관면역 활성획분으로수득하는 것으로 이루어지는, 우뭇가사리로부터의 장관면역 활성화 추출물 제조방법, 이 방법을 이용하여 제조되는 장관면역 활성화 추출물, 이 추출물을 함유하는 장관면역 활성화 조성물 및 항암용 조성물에 관한 것이다.이상과 같이 본 발명이 완성됨으로써, 건조 우뭇가사리에 대해 5배(V/W: ml/g)의 에탄올을 첨가하여 분쇄, 교반한 후 30분간 초음파분쇄(Sonication)하여 상등액과 잔사로 분리하고, 상등액을 감압 추출하여 농축, 건조한 다음, 건조물을 물/헥산 혼합용액에 첨가하여 물과 헥산 층으로 분리한 후 이중 물 가용획분을 동결 건조시킴으로써 에탄올추출물 획분을 제조하고; 에탄올추출물 획분을 증류수:획분=2:1(V/W: ml/g)의 비율로 증류수에 용해시켜 열린컬럼크로마토그래피(2.5×30cm)에 넣고서, 헥산/에탄올 6:4(V/V) 용액을 이용 분당 1ml의 유속으로 용출시켜 가용획분을 제조하고; 가용획분을 박층크로마토그래피(실리카 젤 60F254 0.5mm, 20×20cm)에 넣고서, 헥산/에탄올/물 65:35:4(V/V/V) 용액으로 용출시켜 3번째 획분을 장관면역 활성획분으로 수득하는 것으로 이루어지는, 우뭇가사리로부터의 장관면역 활성화 추출물제조방법, 이 방법을 이용하여 제조되는 장관면역 활성화 추출물, 이 추출물을 함유하는 장관면역 활성화 조성물 및 항암용 조성물이 제공될 수 있게 되었다.본 발명이 완성됨으로써, 자연계에서 쉽게 구할 수 있고 그 가격이 상대적으로 저렴한 우뭇가사리로부터 장관면역 활성화능이 있는 추출물을 분리하여 그 제조방법과 함께 제공하고, 나아가 이 추출물을 이용한 장관면역 활성화용 조성물 및 항암용 조성물을 제공할 수 있게 된 것이다.

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고려대학교
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2007-03-15
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일반기술 생명과학 > 식물자원

식물병원 진균에 항균활성을 가지는 스트렙토마이세스로 제오플라브스 엘에스에이-24 균주 및 이 균주로부터 생산되는 항생물질

본 발명은 토양으로부터 분리한 신규의 스트렙토마이세스 로제오플라브스 LS-A24(Streptomyces roseoflavus LSA24)균주와 이 균주 배양액으로부터 분리, 추출되는 항균물질인 스타우로스포린(staurosporine) 및 이 항생물질을 이용하는 식물병 방제용 살균제 등에 관한 것이다.본 발명의 신규 균주 및 이로부터 분리되는 항균물질은 식물병원진균인 보트리티스 시네리아(Botrytis cinerea), 콜렉토트리큠 오비큘라리에(Collectotrichum orbiculare), 클라도스포리움 쿠쿠메리눔(Cladosporium cucumerinum), 디디멜라 브리오니에(Didymella bryoniae), 푸자리움 옥시스포름 f.sp. 라이코퍼시시(Fusarium oxysporum f.sp. lycopersici),라이족토니아 솔라니 (Rhizoctonia solani) 및 파이토프소라 캡시사이(Phytophthora capsici) 등에 대한 항균효과를 가진다.이상과 같이 본 발명이 완성됨으로써, 토양으로부터 분리한 신규의 스트렙토마이세스 로제오플라브스 LSA24(Streptomyces roseoflavus LS-A24) 균주와 이 균주 배양액으로부터 분리, 추출되는 항균물질인 스타우로스포린(staurosporine) 및 이 항생물질을 이용하는 식물병 방제용 살균제 등이 제공될 수 있게 되었다.본 발명이 완성됨으로써, 고추역병, 잿빛곰팡이병 등의 식물병 방제에 사용될 수 있는, 유기합성계 농약 수준의 높은 방제효과를 가지고 있으면서도 저독성이고 환경에 부작용을 일으키지 않는 친환경적 무공해 살균제가 제공될 수 있게 된 것이다.본 발명에 의하여 제공되는 살균제 조성물은 주요한 식물병원균, 예를 들어, 보트리티스 시네리아(Botrytis cinerea), 클라도스포리움 쿠쿠메리눔(Cladosporium cucumerinum), 디디멜라 브리오니에(Didymella bryoniae), 푸자리움 옥시스포름 f.sp. 라이코퍼시시(Fusarium oxysporum f.sp. lycopersici), 콜렉토트리큠 오비큘라리에(Collectotrichumorbiculare), 라이족토니아 솔라니 (Rhizoctonia solani), 파이토프소라 캡시사이(Phytophthora capsici) 등에 의한 식물병의 방제에 이용될 수 있다

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고려대학교
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2007-03-15
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일반기술 생명과학 > 기타 세포·조직공학

PAH 노출 여부 진단용 바이오 마커 단백질

본 발명은 환경 유해 물질인 PAH(Polycyclic Aromatic Hydrocarbons)에 노출되었을 때 바이오마커로 사용 될 수 있는단백질 개발에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 정상인의 혈액에는 없으나 PAH벤젠에 노출된 사람의 혈액에는 존재하거나정상인의 혈액에서 보다 PAH에 노출된 사람의 혈액에서 더 많이 발현되는 바이오 마커 단백질과 이를 이용한 PAH 노출여부 진단키트에 관한 것이다.본 발명에 따르면, 얻기 간편한 소량의 혈액으로부터 작업자의 PAH 노출 정도를 측정할 수 있을 뿐만 아니라, 이렇게 측정된 오염 정도로 PAH 노출자의 생리적인 상태를 파악 할 수 있다. 또한, 본 발명의 바이오마커 단백질을 기초로 제조된 단일클론항체는 immunoassay 키트 (ELISA, antibody coated tube test, lateral-flow test, potable biosensor)에 이용될수 있을 뿐만 아니라, 보다 높은 특이도와 민감도를 나타내는 항체의 개발을 통한 다양한 난분해성 오염물질 검출 스펙트럼을 갖는 단백질칩 개발에 이용될 수도 있다.상기와 같이 이차원 전기영동실험을 수행한 결과, 다음과 같이 PAH에 노출된 사람에서 새롭게 발현되거나 발현양이 증가하는 단백질들이 동정되었다.1. 새롭게 발현되는 단백질정상인 33명과 PAH에 노출된 작업자 48명을 대상으로 이차원 전기영동을 수행한 결과 PAH에 의해 새로이 발현되는 1개단백질을 찾아내었다(도 2). 상기 새로이 발현된 1개의 점(4981)을 MALDI-TOF/MS 분석하고 그 질량스펙트럼을NCBInr에 대해 ProFound 서치를 수행한 결과 trypsin-digested peptide 서열이 2개 (서열번호 1 및 2) 일치하여'putative capacitative calcium entry channel' (NCBI Accession No. CAC06090)로 동정되었으며 (도 5), 그 결과를 표1에 요약하였다.

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고려대학교
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2007-03-15
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일반기술 생명과학 > 줄기세포 분화 기술

안티센스 텔로머라제를 생산하는 아데노바이러스 및 이를이용한 조혈모세포의 증식 및 분화 방법

본 발명은 조혈모세포의 자가갱신(self-renewal)과 관련이 있는 텔로머라제 효소 활성의 억제가 가능한 안티센스를 생산하는 아데노바이러스 및 이를 조혈모세포 분화, 증식 촉진에 사용하는 용도에 관한 것이다. 구체적으로, 본 발명은 조혈모세포를 비롯한 줄기세포에서 자가갱신을 위하여 필수적인 텔로머라제의 활성 억제가 가능한 아데노바이러스 벡터와 그의응용방법에 관한 것으로서, 본 발명의 아데노바이러스 클론 Ad-OA는 조혈모세포의 분화/증식 촉진을 통하여 세포 치료를위한 면역세포 공급 및 인공혈액의 생산에 유용하게 응용될 수 있다.이상 설명한 바와 같이, 본 발명의 아데노바이러스 발현 벡터 및 이로부터 얻은 바이러스 클론 Ad-OA 는 조혈모세포의 증식, 분화를 유도하는데 탁월한 효과를 나타냄을 확인할 수 있다. 또한 상기 아데노바이러스 클론은 다양한 중합효소 연쇄반응 등을 수행한 결과 증식성 변이 바이러스를 전혀 만들어내지 않으므로 안전하고 용이하게 사용될 수 있기 때문에 난치성 질환을 대상으로 하는 면역세포를 이용한 세포치료를 위한 면역세포의 생산 및 인공 혈액의 생산에 상당한 기여를 할수 있으리라고 기대된다. 그리고, 본 발명의 아데노바이러스 Ad-OA 는 기존의 안티센스 올리고머에 비해 독성이나 부작용이 적은 반면 기존의 안티센스 올리고머와 거의 같은 효과를 내는 것으로 생각되어 매우 우수한 안전성을 나타낸다.

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일반기술 생명과학 > 줄기세포 분화 기술

텔로머라제 억제 siRNA 발현 벡터 및 이를 이용한유전자 치료제

본 발명은 종양 발생 및 줄기 세포 분화와 관련있는 텔로머라제 효소 활성을 RNAi 기술을 이용하여 조절 가능한 텔로머라제 억제 siRNA 발현 벡터 및 이를 이용한 유전자 치료제에 관한 것이다.구체적으로, 본 발명은 90 % 이상 종양 및 줄기세포에서 그 활성이 보고되는 텔로머라제의 활성 억제가 가능한 유전자 치료 벡터와 그의 응용방법에 관한 것으로서, 본 발명의 플라스미드 벡터는 다양한 종양 치료 및 줄기세포 분화조절에 유용하게 사용될 수 있다.이상 설명한 바와 같이, 본 발명의 siRNA 발현 벡터는 암세포 및 줄기 세포의 텔로머라제 활성의 조절이 가능하고 이로써암세포를 사멸시키거나 성장을 억제시키거나 줄기세포의 분화조절에 이용이 가능하다. 또한 상기 발현 벡터는 바이러스벡터에 의한 부작용이 없고 인체 게놈 중 유사 부위가 존재하지 않아 텔로머라제 특이적 활성 억제가 가능하다. 본 발명의siRNA 발현 벡터는 기존의 안티센스 올리고머나 바이러스 벡터에 비해 독성이나 부작용이 적은 반면 기존의 안티센스 올리고머보다 월등하게 우수한 효과를 내는 것으로 생각되어 항암 유전자 요법이나 줄기세포 분화 조절에 사용하는 경우 매우 우수한 안전성 및 효과를 나타내게 된다.

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2007-03-15
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