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생명과학 > 효소공학 (H73)
1. EGF의 대량정제공정 확립 EGF 발현균주인 E. coli JM101/pTE105를 발효시켜 획득한 발효상등액으로부터 3단계 정제공정을 거쳐 1회 정제시 99.5% 이상의 순도를 가지는 EGF를 1.5g 이상 분리정제하는 공정을 확립하였으며 이 정제방법을 특허출원 하였다(대한민국 특허출원 제93-6980호). 2. 구조, 조성 및 물리화학적 특성규명 정제한 EGF의 아미노산 서열 및 조성분석, peptide mapping 및 disulfide 결합위치 분석등을 수행한 결과 천연에 존재하는 EGF와 동일한 아미노산서열 및 구조를 갖는다는 것을 규명하였으며, 또한 SDS-PAGE, Western blotting, Gel filtration FPLC, RP-HPLC등의 분석법을 적용하여 EGF의 분자량 및 면역학적 성질이 천연의 것과 동등하였고, circular dichroism 분석과 NMR의 방법으로 분석하였을 때 2차 및 3차 구조도 천연의 EGF와 동일함을 확인하였다. 3. EGF의 생물학적활성 연구 정제된 EGF의 생물학적 활성을 mitogenic assay와 receptor binding assay를 수행하여 측정한 결과 정제된 EGF 1mg은 국제활성단위(international unit)로 1.37±0.17×106 IU로 측정되었으며, in vivo 실험인 guinea pig의 피부창상에 대해서도 EGF는 유의성있는 피부재생효과를 나타내었다. 4. EGF의 안정성연구 EGF의 안정성시험을 pH 및 온도, 장기보관, 가혹보관등의 조건하에서 수행한 결과, EGF는 중성 pH(pH 5∼7)에서 안정하였으며, -20℃와 4℃에 58주 동안 장기보관시, 분말 혹은 용액상태에 관계없이 함량, 순도, 활성의 유의적인 변화를 보이지 않았다. 한편 온도가 37℃ 이상 및 freezing and thawing등의 가혹조건 하에서는 탈아미노 EGF와 같은 분해산물들이 나타났으나 이들 역시 90% 이상의 생물학적 활성을 나타내었다. 5. 피부재생제 및 각막부활용 의약품으로의 개발 본 연구결과 화상치료 및 각막손상의 근본적 치료제로서 유망한 EGF 단백질원료의 대량생산이 가능해졌으므로, 빠른 시일내 의약품으로의 제품화가 가능할 것으로 기대된다. 현재 대웅제약에서는 본 연구를 통하여 얻어진 EGF를 피부창상, 화상 및 만성피부궤양을 치료하고자 하는 피부상처치료제와 각막수술, 엑시머레이져에 의한 근시교정술시 손상되는 각막의 회복을 촉진시키는 각막상처 치료제로의 개발을 추진하고 있다.
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- 한국생산기술연구원
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- 2000-04-07
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생명과학 > 효소공학 (H73)
분지 올리고당 제조 효소(BLMA)의 발효 생산 공정을 최적화하여 최종 균체 농도 64 g/l, 최대 BLMA 역가 442 U/ml 을 얻었으며, 대량 생산을 위한 산업화 배지 조성을 결정하였다.고정화 효모에 의한 연속 생물반응기에서 순도 88%의 고순도 분지 올리고당 생산 공정을 개발하였다. Sodium alginate에 고정화된 효모로 충진된 연속 반응기에서 포도당과 맥아당을 제거하여 순도 88%의 고순도 분지 올리고당을 생산하였다. 말토올리고당을 생산하기 위하여 재조합 Bacillus subtilis LKS88에 의한 효소 생산, 효소의 회수 및 정제 공정 개발, 고정화 효소 개발등을 수행하였다. 갈락토올리고당 생산효소 변이주의 생리적 특성 및 효소 생산, 효소의 정제 및 특성, 효소의 고정화와 연속 전환 공정, 올리고당 반응 조건의 최적화를 수행하였다. 대두올리고당 개질효소를 선발하였고 효소의 사용으로 프럭토올리고당과 대두올리고당의 혼합물을 얻었다. Fructosyl transferase에 의한 설탕 전환 반응을 고찰한 결과 pH 5.5, 온도 55℃에서 최대의 전환율을 보였다. 효소 반응으로 난소화성 올리고당의 비율을 30%에서 65% 이상 증가시켰다.
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- 한국생산기술연구원
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생명과학 > 효소공학 (H73)
본 발명은 다음 일반식(I)으로 표시되는 효소의 역가수분해 반응을 이용한 당유도체의 제조법에 관한 것으로 특히 당의 C1위치에서 당을 포함하고 있는 알콜류와 효소반응으로 글리코시드 결합을 형성시키므로써 효소 합성 방법에 의해 당 유도체를 제조하는 방법에 관한 것이다. 당유도체를 제조하는 방법에 화학적인 것과 효소를 이용한 방법 들이 보고되어 있으나 여러 문제점이 있었으므로 탄수화물 유도체의 효소 합성을 유기용매상에서 진행시켜 간단한 방법으로 효소의 입체특이성과 넓은 적용 범위를 가지며 수용액상의 반응의 장점을 갖는 새로운 방법이 연구 되었다. 당의 C1위치에서 당을 포함하는 알콜류의 효소반응으로 글리코시드결합을 형성시키므로써 당 유도체를 제조함에 있어서 유기용매에 불용성인 탄수화물을 상변환체인 유기 붕산을 사용하여 유기용매중에 용해시키고,글리코시드 가수분해효소를 이용하여 역가수분해반응으로 글리코시드 결합을 형성시키므로써 당 유도체를 제조한다. 일반식(I)에서 R은 메틸,에틸,이소프로필, 또는 단당류를 나타낸다. 탄수화물은 단당류,이당류,다당류 중에서 선택된 것이며 유기용매는 친핵반응성이 없는 석유에테르,헥산,옥탄,톨루엔,벤젠,클로로포름,디옥산,아세톤 등을 하나 이상 사용하며 효소로는 탄수화물을 분해하는 글리코시다제,즉 글루코시다제,갈락토시다제 및 만노시다제 중에서 선택된 것을 사용한다.
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- 한국생명공학연구원
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- 2000-04-07
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생명과학 > 효소공학 (H73)
본 발명은 고온성 균주인 더머스 칼도필러스(Thermus caldophilus) CK24로부터 유래된 새로운 내열성 DNA 중합효소에 관한 것이며 또한 유전자 재조합 대장균을 이용하여 상기 내열성 DAN 중합효소를 제조하는 방법에 관한 것이다. 보다 상세하게는 더머스 칼도필러스 GK24로부터 새로운 내열성 DNA 중합효소를 분리하여 확인한 후 이를 코딩하는 유전자를 클로닝하여 염기 서열을 결정하고 이로부터 상기 단백질의 아미노산 서열을 결정하며 대장균내에서의 발현을 위한 최적화 조건을 구하여 상기 중합효소를 대량으로 제조 및 정제하는 방법에 관한 것이다. DNA 중합효소는 단일 가닥 DNA를 주형으로 하여 뉴클레오티드 삼인을 상보적으로 결합시켜 이중 가닥 DNA의 합성을 촉매하는 효소이다. 이러한 DNA 중합효소는 중온성 균인 대장균을 대상으로 많이 연구되어 왔으며, 이들중 DNA 중합효소 I 는DNA 염기 서열 및 전체 아미노산 서열이 결정되었고, 또한 이 DNA 중합효소 I 의 5'→3' 엑소뉴클레아제(exonuclease) 활성을 갖는 아미노 말단 영역을 제거한 클리나우 단편(Klenow fragment)은 삼차구조까지 밝혀진 바 있다(Jocye, C. M. etal., J. Biol, Chem. 257, 1958-1964(1982) ; Jocye, C. M. and Steitz, T. A., Trends Biochem. Sci. 12, 288-292(1987)). 이에 비해 고온성 균주들로부터 생성되는 내열성 DNA 중합효소에 관한 연구는 상대적으로 적었으며, 대표적인 것이 더머스 아쿠아티커스(Thermus aquaticus) YT-1의 Taq DNA 중합효소이다(Lawyer, F. C. et al., J. Bio. Chem. 264, 6427-6347(1989)). 이러한 DNA 중합효소들은 분자 생물학 분야에서 DNA의 염기 서열 결정 및 염기 치환 반응(nick-translation)등 여러 용도로 광범위하게 이용되고 있다. 특히 최근 개발된 DNA 중합효소 연쇄 반응(polymerase chain reaction, 약칭 PCR)은 DNA증폭을 비롯한 각종 유전병 진단에 유용하게 활용되고 있는데, 이 기술의 특징은 55~60℃의 프라이머 어닐링, 72℃에서의DNA 중합 반응 및 94℃에서의 주형 DNA 변성등 세단계 반응과정을 약 30회 정도 반복함으로써 목적 DNA 단편을 증폭시키기 때문에 고온에서 안정한 내열성 DNA 중합효소의 사용이 필수적이다(Erlich, H. A,. PCR Technology, 1989, StocktonPress, New York). 따라서 본 발명은 기존의 Taq DNA 중합효소와의 새로운 내열성 DNA 중합효소를 찾아내고 유전공학 기술에 의한 대량 생산이 가능하게 하여 보다 저렴한 가격으로 상기 효소의 다양한 활용을 가능하게 하는 것을 목적으로 하고 있다.
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- 2000-04-07
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생명과학 > 효소공학 (H73)
고온성 균주인써머스써모필러스 HB27로부터 신규한 내열성 TOP DNA 중합효소 유전자를 분리해내고, 그의 뉴클레오티드 서열 및 TOPDNA 중합효소의 아미노산 서열을 밝혔으며, 상기 효소의 유전자를 포함하는 발현벡터를 제조한 후, 그에 의해 형질전환된대장균을 배양하여 TOP DNA 중합효소를 대량 생산하고, 이를 정제함으로써 본 발명을 완성하였다. 본 발명의 목적은 신규한 내열성 DNA 중합효소를 제공하는 것이다. 본 발명의 다른 목적은 상기 효소의 유전자를 포함하는 발현벡터 및 그에 의해 형질전환된 대장균을 제공하는 것이다. 본 발명의 또 다른 목적은 상기 형질전환된 대장균을 배양하여 신규한 내열성 DNA 중합효소를 대량 생산하는 방법 및 생산된 중합효소를 효과적으로 정제하는 방법을 제공하는 것이다.
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생명과학 > 효소공학 (H73)
본 발명은 고온성 균주인 더머스 칼도필러스 GK-24 로부터 분리·정제된 고온에서 활성이 큰 내열성 ADP-포도당 합성효소, 그의 제조방법 및 그의 아미노 말단과 내부에서 얻은 단백질 단편의 아미노산 서열에 관한 것으로서, 이들 ADP-포도당 합성효소를 이용하면 ADP-포도당을 경제적으로 얻을 수 있고 본 아미노산 서열을 통해 본 효소의 유전자를 얻는 것도 용이하다.
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생명과학 > 효소공학 (H73)
[구성]더머스 칼도필러스(Thermus caldophilus)GK24로 부터 정제된93,000 내지 95,000달톤의 분자량을 갖는 DNA 중합효소인 TcaDNA 중합효소.
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생명과학 > 효소공학 (H73)
본 발명은 고온성 균주인 더머스 칼도필러스 GK-24 로부터 분리·정제된 고온에서 활성이 큰 내열성 ADP-포도당 합성효소, 그의 제조방법 및 그의 아미노 말단과 내부에서 얻은 단백질 단편의 아미노산 서열에 관한 것으로서, 이들 ADP-포도당 합성효소를 이용하면 ADP-포도당을 경제적으로 얻을 수 있고 본 아미노산 서열을 통해 본 효소의 유전자를 얻는 것도 용이하다.
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생명과학 > 효소공학 (H73)
구인의 조추출물로부터 혈전용해효소를 순수하게 분리, 정제하는 방법 및 이들구인의 혈전용해효소를 코드화하는 cDNA유전자를 제공한다. <구성>음이온 교환 컬럼 크로마토그래피 소수성 결합 컬럼 크로마토그래피, 벤자미딘을 기간드로 사용하는 친화성 크로마토그래피 및 리마빈 트립신 억제제를 리간드로 사용하는 친화성 크로마토그래피의 조합에 의하여 구인의 조추룰물로 부터 혈전용해활성을 갖는 효소 분리, 정제하고, 혈정용해효소 P1을 코드화하는 식(A)의 cDNA유전자 LK7T1(등록번호 U25645).
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- 2000-04-07
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생명과학 > 효소공학 (H73)
본 발명은 토양으로부터 분리한 Pseudomonas aeruginosa 1001과 이로부터 유래한 신규 esterase 및 그의 아미노산 서열과 유전자의 염기서열에 관한 것이다. 따라서 본 기술은 특히 재조합 esterase의 생산과 이를 이용한 racemic carboxylic acid esters로부터 광학활성 카르복실산 및 그의 enantiomeric esters를 생산하는데 유용하게 사용.
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- 2000-04-07
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생명과학 > 효소공학 (H73)
본 발명은 세포신호전달과정에서 중요한 역할을 하는 SH2 단백질을 고형상에 부착시키고, 이에 결합하는 방사능이 표지된 인산화펩티드 모티프를 반응시킨 다음, 고형상에 부착된 방사능을 측정하는 과정으로 구성된 탐색방법에 관한 것으로서, 본 방법은 간편하여 짧은 시간내에 많은 물질을 탐색할 수 있고 비용이 적게들어 신호전달과정이 관여하는 질환인 암 등의 진단 및 치료와 관련하여 유용하게 사용될 수 있다.
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- 2000-04-07
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생명과학 > 효소공학 (H73)
본 발명은 SH3 부위에 대한 결합저해제를 탐색하는 방법에 관한 것으로 SH3 단백질을 고형상에 부착시킨 후 비오틴이 결합된 펩티드 모티프를 반응시켜 흡광도를 측정함으로써 암등 신호전달과정이 관련되는 질환의 진단 및 치료에 기여할 수 있는 뛰어난 효과가 있다.
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생명과학 > 효소공학 (H73)
.고구마 배양세포로 부터 분리된 산성 퍼옥시다제 swp A1및 중성 퍼옥시다제 swp N1유전자는 고구마 배양세포와 식물체 줄기에서 특이적으로 발현하며 제놈내에 복수로 존재하며, 이를 이용하여 전체 또는 일부는 세포, 식물체, 미생물 및 박테리아에 형질전환시켜 퍼옥시제를 대량생산하는 방법이다.
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생명과학 > 효소공학 (H73)
신균주 프로테우스 불가리스(Proteus vulgaris) K80 이 생산하는 알카리및 단백질 분해효소에 내성이 강하고, 용매안정성이 큰 리파제 .균주, 리파제, 염기서열, 세제조성물, 생촉매
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- 2000-04-07
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생명과학 > 효소공학 (H73)
.신균주 슈도모나스 속 NS-83을 이용하여 고온성이면서 발효시간이 짧고, 유기용매에 내성이 우수한, 식물 및 제약산업이용 신규단백질 가수분해효소및 제조방법.가수분해효소, 고정화효소, 아스파탐제조방법
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- 2000-04-07
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생명과학 > 효소공학 (H73)
.신규주 바실러스 속 NS-70과 이를 이용하여 발효 소요시간이 짧고, 물에 친화력이 낮은 단백질 기질에서 작용하는 식품및 제약산업이용, 신규주 단백질 가수분해효소
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- 2000-04-07
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생명과학 > 효소공학 (H73)
.유전자조작에 의해 제조된 신규한 재조합 벡터 pKLE를 이용하여 알카리 및 단백질 분해효소에 대한 내성이 강하고 용매안정성이 우수한 리파제를 대장균 세포내에서 다량발현시키고, 분리정제방법.
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- 2000-04-07
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생명과학 > 효소공학 (H73)
.신규주 락토바실러스 속 DS-12와 이를 이용한 어류용 프로바이오틱스제조방법으로, 종래보다 개선된 내염성, 내담증성, 내산성등의 생리활성을 갖는 균주와 어류용 프로바이오틱스 제조
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- 2000-04-07
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생명과학 > 효소공학 (H73)
본 발명은 고온성 사이클로덱스트린 (cyclodextrine, CD) 생합성 효소, CD 생합성 효소의 제조방법 및 CD 생합성 효소를 생산하는 패니바실러스속 (Paenibacillus sp.) 균주에 관한 것이다. 보다 상세하게는, 본 발명은 전분으로부터 유기물 포접능을 갖는 CD 를 합성하는 고온성 CD 생합성 효소, 패니바실러스속 균주로부터 CD 생합성 효소를 제조하는 방법 및 새로운 패니바실러스속 균주에 관한 것이다.
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- 한국생명공학연구원
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- 2000-04-07
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생명과학 > 효소공학 (H73)
.시트로박터 프로인디의 L-Dopa합성 다기능 효소인 티로신 페놀리아제의 유전자, 재조함 플라스미드, 형질전환된 대장균, 이용 생산방법.티로신 페놀리아제 코드 올리고뉴클레오티드, 아미노산서열,벡터
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- 한국생명공학연구원
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- 2000-04-07
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