일반기술
생명과학 > 미생물자원
에리스리톨 생산균주를 당밀, 꿀 등에서 분리하였고, 에리스리톨 생산 wild균을 모균으로한 균주역가향상 실험결과 생산성이 선진국대비 80% 수준인 균주를 분리하였다. 에리스리톨 물성실험을 통해 설탕의 대체감미료로 적합한 것으로 확인하였다. - 토양으로부터 CGTase 생산균주를 분리하여 발효조건을 결정한 후, 생산된 CGTase의 분리정제, 안정화 실험을 수행하였다. 발효 후 역가는 30-21균주가 5.67U/ml이었다. CD생산후처리공정으로 전분제거방법, 효소불활성화 등을 Test하였으며 이중에서 2건을 특허출원하였다. CD의 응용적성실험으로는 분무건조조건을 확립하고 레몬오일과 박하유를 이용하여 포접물 생성조건과 안정성을 Test하였다. - 국내 가축으로부터 내산성.내담즙성.내열성 그리고 항생제 내성이 우수한 총40여개의 유산균주를 선발하였다. 이들 균주들을 대량배양하기위한 배지를 CSL과 molasses를 기본으로하여 제조하였으며, MRS배지의 가격과 비교하여 약17배 저렴하였다. 유산균의 임상효능을 연구하기 위한 기초작업으로서 장내 세균을 선택적으로 검정할 수 있는 여러 선택배지를 조사하였으며, 그 결과 2종의 비선택배지와 7종의 선택배지가 효과적임을 확인하였다. - Captopril중간체인 D-HIBA를 100g/l 발효 및 분리정제 수율 73% 수득. - 주사용 장티푸스백신 생산을 위하여 유가식 배양을 통하여 100μg/ml의 Vi-polysaccharide를 얻었다. 정제공정을 통하여 단백질.발열성 물질.핵산 등이 효율적으로 제거되었다. 합성한 immunostimulator의 기초 효력시험 완료하였다. - 소유균주 Aureobasidium pullulans GM21을 돌연변이시켜 풀루란 생산능이 증가된 변이주들을 선택하고 풀루란 분자량 조절에 관여하는 아밀라아제를 순수분리하여 특성을 조사하였다. 발효최적화 실험을 통하여 소유균주의 풀루란 생산능이 목표치 이상인 선진국 대비 95%의 수준에 도달하였다.
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- 한국생산기술연구원
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- 2000-09-06
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일반기술
생명과학 > 기타 유전자 공학
자연계에 존재하는 미세 조류를 유용 유전자로 형질전환 시키고 이들을 대량 배양하여 미세조류로부터 유용한 물질을 경제적인 비용으로 대량 생산하는 기술을 개발하는 것이다. 본 발명에서는 미세조류의 원형질체를 생성하여 외래 유전자를 대량 발현시키고 이를 이용한 제품을 만드는 것이다. 본 발명은 어류의 성장호르몬 유전자를 이용하여 미세조류를 형질전환 시킨 후 대량 배양하여 어류의 성장을 촉진하는 기능성 사료를 개발하는데 있었으 며 이 기술을 이용하여 성장 호르몬 유전자를 다른 유용 유전자로 대체하여 원하는 기능성 단백질을 대량 생산하는 진핵세포 발현 시스템을 개발할 수 있다. 예를 들면 어류의 성장 호르몬 유전자를 interferon과 같은 면역관련 유전자로 대체할 경우 어류의 면역기능을 증가 시키는 특수 사료를 제조할 수 있을 것이다. 현재 본 연구진에 의하여 어류로부터 여러 유 용 유전자가 분리되어 있기 때문에 여러 가지의 특수 기능을 가진 유용 단백질의 대량 생산 이 가능할 것이다. 이러한 적용 범위는 어류에 국한된 것이 아니어서 유전자가 확보될 경우 의학적, 산업적으로 가치있는 단백질을 형질전환된 미세조류로부터 생산할 수 있을 것이며 따라서 본 발명의 적용 범위와 효과는 무한하다고 볼 수 있다.- 미세조류는 단세포로 된 진핵 생물로 동물이나 식물이 만드는 단백질과 가장 가까운 기 능과 활성을 지닌 단백질을 만들 수 있다. 또한 미세조류는 간단한 시설과 저렴한 비용으로 대량 생산할 수 있으며 이들로부터 발현된 단백질을 분리 정제하는 방법도 간단하여 이들 물질의 생산비를 크게 감소시킬 수 있어 경제성이 탁월하다.
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- 한국생산기술연구원
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- 2000-09-06
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생명과학 > 효소공학 (H73)
1단계 3차년도에 25종의 후보물질을 합성 후 MIC test를 수행하였다. 그 결과 M-301의 경우 cefixime과 유사한 항균력을 보여주고 있으나 Staphylococcus 균주에 대한 항균력은 이보다 6-7배 우수하게 나타났다. 이를 토대로 C7 위치를 변환한 후 cefdinir와 비슷하거나 그 이상의 항균력을 갖는 후보물질을 합성중이고(경구용), 후보물질 M-006036-1의 경우 cefepime과 거의 같은 항균력을 나타내고 있으나 Staphylococcus aureus의 경우 cefpirome의 항균력에 미치지 못하고 있다. 그러나 Enterobacter의 경우 cefpirome보다 2배, cefepime보다 4배의 항균력을 보여주었다.
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- 한국생산기술연구원
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- 2000-09-06
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생명과학 > 효소공학 (H73)
Candida rugosa KCCM 35430균주를 이용하여 D-β-Hydroxy isobutyric acid (D-HIBA)의 생성 및 분해에 미치는 여러가지 조건들을 검토하고 유가식 배양을 실시하여 100g/L의 D-HIBA를 얻었다. - 대량생산에 적용이 용이한 D-HIBA의 분리정제공정을 개발하여 불안정한 D-HIBA 대신 안정한 금속염 형태로 정제수율 73%로 정제하였으며, 한편으로 HIBA의 ester형태로도 정제하였다. - D-HIBA가 분해되는 단계가 결핍된 전환율이 향상된 균주개량을 시도하여 모균주의 전환율이 30∼40%인데 비하여 향상된 75%전환율을 보이는 변이주를 획득하였다. - 분리정제된 D-HIBA를 원료로 최종목표물질인 Captopril제조에 성공하였다
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- 한국생산기술연구원
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- 2000-09-06
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생명과학 > 기타 유전자 공학
1. 생물학적 다양성을 이용한 유용유전자원의 탐색 및 보존 110여종의 외생근균류, 30여종의 토양유래 효모류 확보. 야생곤충의 장내미생물을 탐색, 섬유질분해와 관련된 31종의 미생물을 분리 동정, 그 효능이 우수한 3종을 선별 추후의 유전자분석에 사용. 2. 신속분류체계의 개발 분류지표 유전자로 ITS 유전자의 PCR-RFLP에 의한 database 작성, Trichoderma속 균의 분류 및 토양유래 효모의 분류에 its 유전자의 RFLP 양상을 적용. 3. 유용유전자의 탐색 1) 균류의 분화관련 유전자 Flammulina velutipes를 대상으로 differential display 방법으로 total RNA로부터 분화단계별로 mRNA의 발현 양상의 차이를 조사. 분화단계에 따라 발현강도와 발현유무의 차이를 보이는 총 73개의 특이적인 clone을 확보, 클로닝. 곤충병원성 사상균으로 부터 세포벽 합성 유전자의 일부를 확보, 그 유전자 염기서열 및 아미노산 서열을 조사하여, 이들 병원균의 분류학적 위치 분석. 2) 내열성 유용효소관련 유전자 내열성 균주인 Thermus caldophilus GK24로부터 genomic library를 제조하고, 이로 부터 찾아낸 유전자의 일차구조를 결정, 산업적으로 유용한 새로운 용도의 내열성 효소를 개발. 3) 곤충으로부터의 유용유전자 집누에나방과 흰불나방의 탈피 및 변태에 관여하는 chitinase의 cDNA의 확보, 그 염기서열 및 아미노산 서열을 조사, 생장에 따른 탈피과정에서의 발현정도 및 유무를 Southem hybridization으로 확인, 집누에나방의 chitinase를 baculovirus expression vector를 이용하여 곤충세포주에서 발현시켜 효소의 활성을 확인. 4) 당뇨질환모델동물의 유전적 형질검정 혈청내 생화학적 구성 성분의 비교분석에서 Glucose의 양이 유의성 있음. Total protein 및 triglycerides도 역시 모델동물 계통들이 ICR 계통에 비해 다소 차이. 비만과 직접연관되는 HDL-cholesterol과 creatinine kinase는 큰 차이를 나타내지 않음. 제한효소 절단다형질은 Xba I 만이 polymorphism을 보여, glycogen synthase cDNA와 hybridization 함으로써 당뇨질환의 모델형에 따른 대립인자 존재확인.
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- 한국생산기술연구원
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- 2000-09-07
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생명과학 > 효소공학 (H73)
. 대표적인 함금속단백질 가스분해 효소인 carboxypeptidase A의 효소기능을 선택적으로 상실시키는 새로운 형태의 억제제 개발 . carboxypeptidase A의 알려진 작용기작과 작용부위의 구조를 기초로 설계 . 창출한 2-benzyl-3,4-epoxybutanoic acid는 효소작용부위내에 존재하는 Glu-270에 공유결합을 형성하면서 부착하여 효소의 기능을 상실시킴.- 효소의 작용기작 및 작용부위 규명에 이용
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- 한국생산기술연구원
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- 2000-09-07
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일반기술
생명과학 > 효소공학 (H73)
○ 섬유가공용 내열성 -amylase 고생산성 B. licheniformis 변이주를 개발하여 발효조건을 검토한 결과 현재 생산량이 산업적 수준의 20%에 해당하며, 이로부터 내열성 -amylase 유전자를 크로닝하고 염기배열 분석 및 염색체상의 변이지점을 확인함. ○ 내열성 -amylase 고생산성 변이주와 효소유전자 발현 기작 분석을 위한 -amylase 결손변이 주 B. subtilis를 개발 완료하고 구조유전자 발현용 promoters를 탐색하여 tandem promoter로 개발중임. ○ 핵산계 대사물질의 고생산성 변이주를 다수 확보하고 변이주의 발효조건을 검토하였으며 핵산계 대사물질 생합성에 관여하는 핵심 효소 유전자 (guaA, guaB, purF)를 크로닝하여 분석하였슴. ○ Aspergillus의 alkaline protease 유전자 절편 크로닝을 완료하고 염기서열을 결정중임 ○ 발효용 종균으로부터 Aspergillus oryzae, A. sojae 분리하고 숙주균으로 사용가능한 영양요구성 OTC변이주 개발하였으며 promoters와 terminator를 도입하여 염색체 삽입발현벡터를 제조함. ○ 글루타치온 생합성에 관련된 -glutamylcysteine synthetase 변이 유전자 제조와 특성 분석함 ○ 재조합 대장균의 배양조건을 검토하여 plasmid 안정성 향상을 위한 연구를 진행중이며 고정화 혼합균주를 개발중임. ○ 인간 유래의 lactoferrin 구조유전자를 3 단편으로 나누어 확보하였고 -galactosidase 유전자를 크로닝함. ○ 인간의 분변으로 부터 두 종류 장내세균을 분리하고 lactate 내성변이주로 개발하고 장내분리균과 변이주 발효에 미치는 탄소원과 발효산물의 영향을 규명함
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- 한국생산기술연구원
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- 2000-09-07
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일반기술
생명과학 > 기타 유전자 공학
본 연구는 새로운 성장관련 유전자들이 도입된 형질전환 돼지를 생산기술을 개발하고 동시에 과다한 성장관련인자의 유전자 발현을 적절한 수준으로 조절하기 위하여 새로운 promotor를 개발하고 자돈의 성장초기나 중기에서부터 이들 유전자의 발현이 시작되도록 외래유전자를 조작하여 신체적 결함이 없는 고급육 생산 형질전환돼지를 개발하기 위하여 실시하였다. 도살된 돼지의 난소에서 회수된 미성숙 난포난의 성숙과 체외 수정을 유도하고 체외 발달을 위한 배양액과 새로운 첨가제를 개발하였다. 산양의 성장호르몬, IGF 및 돼지의 GHBP유전자를 RT-PCR방법으로 cloning하고 특이한 promotor와 재조합하였으며 산양 성장호르몬 재조합유전자를 171개 생쥐 수정란에 미세주입하여 외래유전자가 삽입된 4마리의 산자를 생산 하였다. 43마리의 공란돼지에서 채취한 625개의 수정란 중 453개를 23마리의 수란돼지에게 비외과적으로 이식한 결과, 18마리는 임신이 확인되었다. 이상과 같은 연구결과들을 고려해 볼 때, 본 연구에서 고급육을 생산하는 형질전환 돼지개발에 필요한 기초기술들이 개발 정립되었으며 이러한 기술들은 타가축에서도 그 생산성을 제고시키는데 응용가능 하다고 본다
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- 2000-09-07
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일반기술
생명과학 > 기타 생물공정·대사공학
수두 바이러스는 동물세포 대량배양에서 많이 사용되는 microcarrier culture에서는 바이러스의 수율이 낮다. 이러한 문제점을 해결하기 위한 방안으로서 본 연구에서는 충전탑 세포배양기를 개발하였다. 적절한 충전탑 세포배양기를 사용한 결과 숙주세포의 성장 및 수두 바이러스의 증식이 원활함을 확인하였으며 숙주세포의 shear sensitivity를 고려한 Air lift Packed-bed Reactor(APR)를 개발하였다. 본 연구에서 개발된 바이오리액터에서의 고농도세포배양을 통하여 T-flask와 비교할 때 2배 이상의 고농도 세포배양이 가능함을 알 수 있었다. 이같은 결과는 바이오리액터를 사용할 때의 산소농도 및 pH 제어의 유리함 때문인 것으로 생각된다. 한편 바이러스 증식에서도 APR을 사용할 경우 T-flask보다 높은 바이러스 수율을 얻을 수 있었으며, 이러한 바이오리액터는 특히 scale-up에 있어서 Roller bottle, Cell factory등의 기존 생산 시스템보다 우수한 것으로 판단된다. 바이러스의 분리를 위해서 다양한 세포 파괴 방법을 시도한 바 그 중에서 sonication방법이 가장 우수하였으며 sonication으로 수두 바이러스를 분리할 때 scale-up 지표로서 sonication power/volume (P/V)이 효과적으로 사용될 수 있슴을 확인하였다. 바이러스의 증식 모델을 통한 수두 바이러스 생산조건 최적화를 위하여 Finite element 방법으로 바이러스 감염을 simulation한 결과 실험치에 근접하는 모델을 얻을 수 있었으며 이러한 바이러스 증식 모델은 생산조건이 최적화에 유용하게 사용될 수 있을 것으로 생각된다.
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- 한국생산기술연구원
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- 2000-09-07
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일반기술
생명과학 > 기타 생물공정·대사공학
세포배양중에 Taxol 및 유도체 분리정제를 효과적으로 수행할수 있는 막분리시스템과 in-site 흡착 분리 시스템을 확립하였다. - 2단계 세포배양 시스템에서 Taxol 생산성을 2배 이상 향상시키는 Elicitor 및 precussor처리 조건을 확립하였다. - 주목미성숙종자는 taxol이 고함유되어 있어 taxol생합성연구의 좋은 소재가 될수 있음이, 성게알을 이용한 생물검정법은 주목식물체와 배양세포주로부터 신규 항암활성물질 개발에 적합함이 강하게 시사되었다. - 주목잎으로부터 taxol 및 관련물질을 초임계유체추출로 효율적으로 추출 할 수 있음을 밝혔다.
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- 한국생산기술연구원
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- 2000-09-07
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일반기술
생명과학 > 기타 단백질·탄수화물·지(방)질공학
본 개발기술을 통해 생산된 면역단백질을 이용하여 초유를 완전히 공급받지 못한 유아 혹은 어린가축에 조제분유 혹은 이유식에 첨가할 수 있으며, 기타 면역기능의 보강 및 질병예방효과가 있는기능성식품의 소재 혹은 그 용도로 활용가능.한외여과기를 이용한 면역단백질의 수율증가 방안확립. - 음이온 교환수지처리를 통한 면역단백질의 순도증가방안 확립. - 면역단백질의 산업적 생산방안 가능성 확인. - 면역단백질의 이용한 육제품 등 면역기능성 식품개발.- 본 연구에서 개발된 면역단백질의 생산기술은 특정성분 강화 기능성 식품으로서의 활용이 기대되며 정제를 통한 순도의 증가로 식품에서 뿐 아니라 의약품 및 특수용도로서의 사용가능성 개발도 기대됨. - 특히, 환경문제의 심각성이 강조되는 추세에서 폐기되는 혈액의 처리를 통하여 공해 원인물질의 감소 및 부가가치 향상에 기여
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- 한국생산기술연구원
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- 2000-09-07
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일반기술
생명과학 > 기타 유전자 공학
본 연구는 지금까지 연구가 체계적으로 이루어지지 않고 있는 기질세포를 대상으로 유전자를 분리하여 643종의 유전자원을 확보하고 염기서열을 결정하여 data base를 구축하였다. 또한 확보된 유전자를 이용하여 두 조직 혹은 두세포간의 유전자 발현의 차이를 조사하는 Differential EST Screening (DES) 방법을 독자적으로 개발하고 이 방법을 이용하여 두경부암 및 대장암에서 발현이 변동된 유전자를 탐색하였다. 그 결과, 각종 유전자 탐침을 확보하게 됨으로써 이를 필요로 하는 연구팀에게 분양을 해 줄 수 있게 되었으며 유전자 판넬을 저렴한 가격으로 공급해 줄 수 있다. 또한 본 연구팀이 확보한 유전자 분리, 분석 기술과 신기능 유전자 분리기술, 유전자기능 분석기술등을 타기관에 제공할 수 있다. 유전자 database를 타기관도 자유롭게 접속할 수 있게 함으로써 유전자 정보를 제공할 수 있다.
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- 한국생산기술연구원
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- 2000-09-07
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생명과학 > 효소공학 (H73)
: - 신규 유전자 이용. - 재조합 효소 생산. - 신 기능성 식품소재 다당류(레반) 생산. - 올리고 프락토스 생산. - 고순도 과당 생산.재조합 미생물 효소 레반슈크라제 생산 기술. - 효소공정에 의한 레반생산 기술최근에는 수용성 식이섬유와 올리고 당에 대한 관심이 높고 이를 이용한 시장 형성도 증가하고 있어 레반을 이용한 프락토올리고당의 생산도 사업화가 기대되며, 또한 레반을 이용한 고순도 과당 생산이 가능함. - 이밖에 레반의 대량생산 기술 확립에 따라 레반의 용도가 다양하게 개발됨으로써 전세계적인 레반의 시장규모가 급속히 확산될 것으로 예상되며 이에 따른 레반생산 기술 이전 및 제품의 활발한 해외 수출도 기대됨.
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- 한국생산기술연구원
- 등록일
- 2000-09-07
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일반기술
생명과학 > 동물자원
Phospholipase C (PLC)와 thioredoxin peroxidase (TPx)에 대한 분자 유전학적 연구를 수행하고 이를 바탕으로 관련 인체 질병에 대한 형질전환 모델 동물을 제작하고자 제 1차년도에서 다음과 같은 기반 연구결과를 얻었다. 1. PLC의 분자유전학적 연구Balb/c genomic library에서 PLCβ3 유전자의 exon 5를 함유하는 DNA 절편과 PLCβ4 유전자의 exon 6을 포함하는 DNA 절편을 각각 cloning 하였고, exon/intron의 구조와 위치, 제한효소지도 등을 작성하므로써 gene targeting에 사용될 vector 제작에 필요한 분자유전학적 기반을 마련하였다. 2. TPx의 분자유전학적 연구생쥐의 뇌 cDNA library로부터 TPx 유전자를 분리하여 단백질의 구조를 확인하였고, 생쥐 1292종의 genomic DNA library로부터 3종의 TPx genomic DNA clone을 분리하여 exon/intron의 구조, 제한효소지도 등을 연구한 결과 생쥐 genome에는 적어도 2가지 이상의 밀접히 연관된 TPx 유전자가 존재함이 파악되었다. 이 중 한가지는 적어도 6개의 exon과 5개의 intron으로 형성되는 구조를 가지고 있었으나, 다른 한가지는 단일 exon과 5개의 intron으로 형성되는 구조를 가지고 있었으나. 다른 한가지는 단일 exon으로 구성되어 있다. 두 TPx 유전자 모두 198개의 아미노산으로 구성되는 단백질을 암호화할 수 있었으며, 그 아미노산 서열의 유사성은 약 96%였다. 3. 유전자 발현조절부위의 분리생쥐 129 SVJ의 genomic library로부터 metallotheinein, albumin 등 조직 특이적 발현 유전자의 promoter와 Tpx 유전자의 promoter 등을 분리하였고, 이에 대한 제한효소 지도를 작성하였다. 4. Gene targeting을 위한 기반기술배아간세포 (embryonic stem cell : ES cell)에서의 homelogous recombination을 통한 gene targeting 기법에 의하여 형질전환 동물을 제작하고자, 그 기초기술로써 feeder cell의 제조, ES 세포주의 계대 및 유지기술, ES 세포주를 이용한 chimera 생산방법 등을 해외훈련을 통하여 습득하고 본 연구실에서 확립하였다.
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- 한국생산기술연구원
- 등록일
- 2000-09-07
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일반기술
생명과학 > 기타 유전자 공학
1. EGF의 대량정제공정 확립 EGF 발현균주인 E. coli JM101/pTE105를 발효시켜 획득한 발효상등액으로부터 3단계 정제공정을 거쳐 1회 정제시 99.5% 이상의 순도를 가지는 EGF를 1.5g 이상 분리정제하는 공정을 확립하였으며 이 정제방법을 특허출원 하였다(대한민국 특허출원 제93-6980호). 2. 구조, 조성 및 물리화학적 특성규명 정제한 EGF의 아미노산 서열 및 조성분석, peptide mapping 및 disulfide 결합위치 분석등을 수행한 결과 천연에 존재하는 EGF와 동일한 아미노산서열 및 구조를 갖는다는 것을 규명하였으며, 또한 SDS-PAGE, Western blotting, Gel filtration FPLC, RP-HPLC등의 분석법을 적용하여 EGF의 분자량 및 면역학적 성질이 천연의 것과 동등하였고, circular dichroism 분석과 NMR의 방법으로 분석하였을 때 2차 및 3차 구조도 천연의 EGF와 동일함을 확인하였다. 3. EGF의 생물학적활성 연구 정제된 EGF의 생물학적 활성을 mitogenic assay와 receptor binding assay를 수행하여 측정한 결과 정제된 EGF 1mg은 국제활성단위(international unit)로 1.37±0.17×106 IU로 측정되었으며, in vivo 실험인 guinea pig의 피부창상에 대해서도 EGF는 유의성있는 피부재생효과를 나타내었다. 4. EGF의 안정성연구 EGF의 안정성시험을 pH 및 온도, 장기보관, 가혹보관등의 조건하에서 수행한 결과, EGF는 중성 pH(pH 5∼7)에서 안정하였으며, -20℃와 4℃에 58주 동안 장기보관시, 분말 혹은 용액상태에 관계없이 함량, 순도, 활성의 유의적인 변화를 보이지 않았다. 한편 온도가 37℃ 이상 및 freezing and thawing등의 가혹조건 하에서는 탈아미노 EGF와 같은 분해산물들이 나타났으나 이들 역시 90% 이상의 생물학적 활성을 나타내었다. 5. 피부재생제 및 각막부활용 의약품으로의 개발 본 연구결과 화상치료 및 각막손상의 근본적 치료제로서 유망한 EGF 단백질원료의 대량생산이 가능해졌으므로, 빠른 시일내 의약품으로의 제품화가 가능할 것으로 기대된다. 현재 대웅제약에서는 본 연구를 통하여 얻어진 EGF를 피부창상, 화상 및 만성피부궤양을 치료하고자 하는 피부상처치료제와 각막수술, 엑시머레이져에 의한 근시교정술시 손상되는 각막의 회복을 촉진시키는 각막상처 치료제로의 개발을 추진하고 있다.
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- 한국생산기술연구원
- 등록일
- 2000-09-07
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일반기술
생명과학 > 식물자원
본 기술은 값싸게 자체제작할 수 있는 기포통기형 배양장치에서 영지를 비롯한 몇몇 버섯류의 액체배양에 의해 균사체 및 세포의 다당( 또는 색소류)의 대량생산공법 및 이외 기능성 식품소재화를 달성할 수 있는 일련의 기술임. 영양물질 및 pH 조절에 의해 영지버섯의 형태(morphology)를 조절하므로써 균사체 및 세포의 다당류를 대량생산할 수 있으며, 특히 영지버섯의 주성분인 항암활성 세포의 다당류는 국내의 타 연구자들의 수십배 상당량의 수율(약 13g/l)로 얻을 수 있슴. 이 기술의 초기 기술은 이미 특허 등록되어 있으며(특허등록 제 156986호, 1998년 7월 27일), 신령버섯, 상황버섯, 노루궁뎅이, 동충하초, 팽이, 느타리 등에도 적용할 수 있슴. 또 이들 균사체 및 다당류 소재화를 위한 각종 가공기술도 보유하고 있으며, 자실체 생산기술 제공 및 오염문제 해결도 가능함. 따라서 본 기술은 현행 버섯재배 기술의 공정개선 및 신규 용도개발이나 신규 제품생산을 포함하는 버섯으로부터 고부가가치의 각종 제품화가 가능한 기술임. 그러나, 신규 제품 생산을 위해서는 시설투자가 커지고 새로운 용도제품이므로 벤처성격이 강하여 판로문제가 불투명하므로 버섯자실체생산시설을 갖춘 기업에서 사용하면 유리함. 이 경우 액체종균에 의한 자실체 생산의 공정개선으로 오염감소 및 재배기간 단축이 가능하며, 애체배양에 의한 균사체 및 세포의 다당류의 고부가가치 제품의 생산 판매로 제조경쟁력을 크게 향상시킬 수 있슴. 아울러 본 연구자는 본 기술 구사 및 자실체 생산의 인력팀도 제공할 수 있슴.
- 보유기관
- 한국생산기술연구원
- 등록일
- 2000-09-07
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일반기술
생명과학 > 미생물자원
o C. tropicalis 배양방법 먼저 108배지에 균을 활성화시킨다. 실온에 방치하여 1일 후에 흰색의 colony 들이 관찰됨. 직경 2mm이상됨. 108 agar 배지에서 활성화된 균을 1 loop을 5ml broth tube에 접종하여 정치시켜서 배양함. 실온에서 배양 1일 후에 5ml broth tube에 밑바닥에 균이 성장한 것을 관찰함. 잘 흔들어서 500ml broth에 접종하였다. 배양은 2일간 배양(48시간), 회전배양을 30 C로 조절하고 200rpm으로 회전시켰다. o C. tropicalis 항원제작 48시간 배양이 끝난 후에 formalin으로 3시간 동안 처리하였다. broth total volume이 50ml, 37% formalin을 6.85ml를 첨가, 그러면 total volume에 0.5% formalin을 첨가한 결과가 됨. 3시간 후에 formalin을 첨가한 것과 정상균주를 108 agar plate 에 접종하여 균이 완전히 사멸되었는가 검사. 실제로 포르말린 첨가된 효모는 agar plate에 성장하지 않음. 역시 30 C에서 200rpm으로 회전시켰다. 50ml conical tube에 40ml씩 분주하여 3000rpm에서 30분간 원심하였다. 상충액을 버린다. PBS(pH7.4)로 재부유시킨 후 다시 3000rpm에서 30분간 원심하는 방법으로 2회 세척하였다. 2회 PBS 세척 후에 pellet의 무게를 측정함. o 백신제작 PBS 6.3ml + 항원 (100mg/ml) 0.7ml; 10mg/ml을 되게 했음. Freund's complete adjuvant 7ml 유리 주사기로 잘 혼합. (아쥬반트에 혼합할때 소실양이 많으므로 여유있게 만듬) 2ml을 암탉의 흉근에 접종함. 접종할 때 양쪽 흉근에 나누어서 1ml씩 접종함. 달걀은 접종하기 전에 얻은 것을 냉장보관 채혈은 접종하기 전에 실시. 남은 백신은 -20C에 보관함 위의 실험방법을 이용하여 얻어진 백신을 4회 접종하여 항원을 포함한 수정란을 얻어냄
- 보유기관
- 한국생산기술연구원
- 등록일
- 2000-09-07
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일반기술
생명과학 > 기타 생물공정·대사공학
유용생물소재의 대량생산 공정기술 개발을 위하여 그 핵심 기술인 대사산물의 과생산 최적화, 고농도 세포배양시스템, 생리활성물질의 대량 분리정제 기술을 연구하였다. 대사산물의 과생산 최적화를 위해서는 대장균의 생리와 대사공학 연구에서 중요한 위치를 차지하는 부대사산물인 acetate의 생성 메카니즘의 생리학적 기능 규명, acetate 생성방지와 그에 대한 저항성 연구, 제한 성장 및 정지기에서의 대사능력에 대한 연구와 starvation promoter의 응용기술을 확립하였다. 고농도 세포배양 시스템 개발을 위해서는 세포집적 장치 및 세포농도의 onOline monitoring 장치를 개발하였다. 이러한 시스템은 간편하여 고농도로 세포를 배양하기 위한 영양성분의 적절한 공급 전략을 확립하고 세포배양 부산물로 분비되는 독성물질들을 처리하는 시스템의 구축에 이용된다. 또한, 생리활성 물질의 대향 분리정제 기술개발을 위해서는 난황과 난백으로 부터 Igy, 레시틴, 리소짐의 대량 분리 정제 기술을 확립하였다.
- 보유기관
- 한국생산기술연구원
- 등록일
- 2000-09-07
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일반기술
생명과학 > 동물자원
포유동물의 수정란에 조직특이적 발현벡터를 도입시키기 위하여 염소의 β-lactoglobulin (BLG)의 5' -조절 부위와 polyadenylation 신호 서열을 갖는 벡터로 삽입하여 제조하였다. 사람 α1-antitrypsin (α1-AT)과 erythropoietin (EPO) 유전자의 genomic 염기서열을 BLG의 5' -조절 부위 서열을 갖는 pBluescript에 각각 삽입하여 p1692g-AT와 p1692epo 벡터를 만들었다. 형질 전환된 유선 세포 HC11에서의 α1-AT 및 EPO mRNA 발현을 확인하였으며, 형질 전환된 유선 세포에서의 α1-AT 및 EPO 단백질 발현 및 분비를 면역블랏 방법으로 확인하였다. 또한 조직특이적 유용단백질 발현 효율증진을 위하여 유선 특이적 actiavtion element를 포함하는 것으로 추정되는 -470∼-740 지역을 Gel-shift 및 Foot-printing 방법으로 분석하여 actiavtion element로 추정되는 -697∼-744 부위를 올리고뉴클레오타이드로 합성하였다. 이 올리고뉴클레오타이드는 BLG의 205 프로모터의 상류에 세벌로 결합되었을 때 205 프로모터를 크게 활성화 시켰을뿐만 아니라, 이 oligonucleotide는 젖 생산 호르몬들을 처리 했을 때 프로모터 활성을 약 6배 정도 증가 시켰다. 이상과 같은 유선 특이적 actiavtion element는 유선 조직-특이적 고활성 프로모터의 제작에 이용될 수 있을 것이다. 이상과 같이 제조된 사람 α1-antitrypsin 과 EPO 유전자 발현용 재조합 DNA를 생쥐 수정란에 미세주사하여 유전자이식 생쥐를 만든 결과 여러 마리의 founder mice를 만드는데 성공하였고, 이 founder mice를 다시 교배시켜 외부 유전자의 삽입이 확인된 유전자이식생쥐 Line을 얻었다. 특별히 EPO 발현 유전자이식생쥐의 line들을 분석한 결과 유전자이식생쥐에서 EPO가 혈액으로 다량을 분비되는 polycythemia와 유사한 phenotype이 발견되었다. 지금까지 얻은 결과들로 미루어 보아 염소의 BLG promoter가 생쥐의 생체내에서 확실히 발현된다는 것을 알 수 있었고, 유전자이식생쥐의 polycythemic phenotype에 의한 교배의 어려움으로 인해 유즙생산을 위해 비교적 오랜 시간이 필요할 것으로 예상되나, 궁극적으로 조직특이적 발현의 개선과 함께 성공적인 유전자이식생쥐의 개발과 유즙 내에서의 EPO 대량생산이 가능하라리 기대된다. 현재 얻은 EPO 유전자이식생쥐는 세계에서 처음으로 개발된 것으로서 유용단백질 생산의 차원을 떠나 polycythemia의 질병모델로도 그 가치가 높이 평가되고 있다. 적혈구수, hematocrit, 혈액중 EPO 농도, 거대비장증(splenomegaly) 등 여러 가지가 인간의 polycythemia와 극히 유사하여, 이 질병의 기전연구와 치료를 위한 중요한 실험동물로 쓰일 수 있다.
- 보유기관
- 한국생산기술연구원
- 등록일
- 2000-09-07
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일반기술
생명과학 > 동물자원
- 인체 유용 생리활성 물질 2종 (G-CSF, GM-CSF)의 유전자를 PCR 방법으로 cloning 하였음 - 산양(goat) 유선조직에서 특이적으로 발현되는 유전자인 β-casein 유전자의 promoter 부위 (약 2kb)를 cloning하였음 - 유선조직특이적 발현 vector 2종을 construction 하였음 - G-CSF 및 GM-CSF의 유전자를 산양 유선조직특이적 발현벡터 2종에 각각 subcloning하였음 - 한국재래산양에서의 수정란 다배란 유기방법 확립 - 외래 유전자 주입을 위한 1세포기 산양 수정란의 채취시기 및 방법을 확립하였음 - 체외수정용 난포란의 채취를 위한 호르몬의 적정투여량과 투여방법 확립 - 체외수정 및 인공수정에 사용될 정액의 채취방법 확립 - 산양 수정란의 체외배양조건 확립 - 외래유전자가 주입된 산양 수정란의 체외발달을 시도하여 배양조건을 확립하였음
- 보유기관
- 한국생산기술연구원
- 등록일
- 2000-09-07
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