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Alcaligenes latus 세포내 PHA 분해 관여 유전자의 클로닝, 재조합 균주의 배양만으로 광학적으로 순수한 (R)-3-하이드록시카르복실산들을 효율적으로 생산하기 위한 기술이다.전체공정이 배양공정과 분리 및 정제공정으로 크게 간소화되며 연속공정에의 응용이 가능하다. 또한 세포고정화기술을 적용할 경우 균체 회수 및 폐기처분의 필요가 없어지거나 크게 줄어들 수 있어 생산성과 경제성에 큰 향상효과를 기대할 수 있다.
생분해성 고분자의 원료로 사용되는 유산을 생산하는 발효방법에 관한 기술로서 유산의 생산성을 획기적으로 높일 수 있는 발효방법을 제공한다. 세포재순환 연속발효기를 다단계로 연결하여 운전하는 장치 및 운전방법에 관한 것이다.본 기술의 연속발효방법은 세포재순환 장치를 이용해서 세포농도를 높이고, 이 것을 2단 이상으로 연결하여 앞단에서는 세포의 성장을 주로 도모하고 끝단에서 원하는 최종농도의 유산이 생성되게 함으로써, 경제적이면서도 높은 생산효율로 유기산을 제조할 수 있는 방법이다.
본 기술은 유전자 변이 진단을 위한 DNA 탐침의 제작 방법과 고정화 방법에 관한 것으로, 변이 위치를 포함한 코돈 전체에 대해서 염기서열을 검색하는 코돈 검색 알고리즘과 아민-알데하이드 반응을 이용한 스폿팅 방법을 통해 DNA 칩을 제작하여 다수의 원하는 변이를 보다 정확히 검색할 수 있는 방법을 제공한다.본 기술은 지정된 코돈 전체를 검색함으로써 보다 정확한 변이 진단을 수행할 수 있고, 스폿팅과 아민-알데하이드 반응을 통해수월한 DNA 탐침의 고정화가 가능하여 DNA 칩을 보다 손쉽게 제작할 수 있다.
본 기술은 마이크로시스틴 (microcystin)을 생산하는 남조류를 검출하기 위해 이들에게만 고유하게 존재하는 펩타이드 신세테이즈 (peptide synthetase) (mcyB) 유전자의 특정부위를 증폭할 수 있는 primer쌍과 이를 PCR에 이용하는 방법에 관한 것이다.본 기술은 PCR을 이용한 방법으로 매우 적은 양의 미생물도 쉽게 검출이 가능하다.
하이드록시기를 가지는 화합물로부터 일차 아민 또는 치환되지 않은 아미노 화합물의 신규 제조방법을 제공하였다. 또한 광학활성을 지닌 하이드록시 화합물일 경우 광학활성이 유지되는 일차 아민 또는 치환되지 않은 아미노 화합물의 신규 제조 방법을 제공하였다. 쉽게 구할 수 있는 하이드록시 화합물을 이용하여 생리활성을 지니는 일차 아민이나 치환되지 않은 아미노 화합물을 합성하였고, 간단한 반응으로 광학활성을 지니는 물질을 생산할 수 있다.
본 기술은 인체에서 유래한 과립성 백혈구의 콜로니 자극인자 (hG-CSF)를 생산하고 분비하는 대장균에 관한 것으로, 카나마이신 저항유전자, 엔도자일라나제 분비신호서열, 13개의 아미노산으로 구성된 올리고펩타이드, 변형된 hG-CSF 유전자 및 Trc 프로모터를 포함하는 재조합 플라스미드 벡터, 전기플라스미드 벡터로서 형질전환된 대장균 및 전기 대장균에서 분비되는 hG-CSF 융합단백질로부터 순수한 hG-CSF를 분리, 정제하는 방법을 제공한다.본 기술은 hG-CSF 단백질을 대장균의 주변세포질로 분비생산하는 방식으로 기존의 대장균 세포내에 불용성 응집체 형태로 생산하는 방식에 비해 훨씬 효율적인 방법으로 대량생산 및 분리정제가 가능하다.
새로이 분리, 동정된 유기산 생산 균주인 만헤이미아 스피시스 55E 균주 및 이를 이용한 생물학적 유기산 (숙신산, 젖산) 생산방법이다.신규균주인 만헤이미아 스피시스 55E를 이용하여, 발효공정변수를 변화시킴으로써 숙신산 및 젖산을 생산하는 방법을 제공한다.
본 기술은 헬리코박터 파이로리를 검사하기 위한 기술로서, 방사성동위원소인 14C를 표지한 요소를 섭취한 후 반응을 알기위해 호기(입)에 검출기를 직접 밀착하여 호기 검사하는 방법에 관한 것이다.- 호기배출 14CO2 가스를 전처리 과정없이 곧바로 4π 연속플로우형 계수기로 검출. - 연속플로우형 계수기의 검출장치에 14CO2 가스와 계수가스를 적절히 주입하는 장치.
올리고뉴클레오타이드를 화학적으로 생분해성 고분자와 결합시켜 고분자의 분해속도에 따라 올리고뉴클레오타이드의 제어방출이 가능한 미셀형태를 지니는전달체의 조성 및 제작방법에 관한 기술이다.올리고뉴클레오타이드를 화학적으로 고분자와 접합시켜 미셀형태의 올리고뉴클레오타이드 세포전달체를 만드는 것을 특징으로 한다.
본 기술은 신규 세포내 PHA 분해효소 클로닝 재조합 균주의 배양만으로 광학적으로 순수한 (R)-3-하이드록시카르복실산들을 효율적으로 생산하기 위한 기술이다.본 기술은 신규 세포내 폴리하이드록시알칸산 분해효소 (intracellular PHA depolymerase) 유전자를 알칼리게네스 레이터스로부터 클로닝하였으며, 이를 재조합 대장균에서 폴리하이드록시알칸산 합성효소들과 함께 발현시키므로써 의약 합성전구체로서 유용한 (R)-하이드록시알칸산들을 광학적으로 순수하게 생산할 수 있다.
무작위적인 돌연변이를 통한 N-카바모일라아제의 라이브러리 제조 및 이에 대한 스크리닝 방법을 개발하였으며 이를 이용하여 산화적 안정성이 증진된 N-카바모일라아제를 분리 분석하였다.스크리닝 방법의 경우 효소 반응시 발생하는 pH의 변화에 기반하여 발색 반응을 유도하였음. 기존의 N-카바모일라아제가 0.2 mM의 과산화 효소에 의해 활성을 상실한 반면 산화적 안정성이 증진된 효소의 경우 80 %의 활성이 남아있음을 확인한다.
분자 수준에서 항체의 배향성을 조절하면서 단분자막을 제조함으로써 항원인식 반응을 최대로 할 수 있는 방법이다.새로운 인터페이싱 물질인 덴드리머 단분자막에 단백질 A 와 연결분자를 도입하여 분자 수준에서 항체의 배향성을 조절하고 유동성을 부여하면서 항체분자의 단분자막을 제조할 수 있는 기술이다.
분자내 전위를 이용, 유전체의 임의부위를 제거하여 새로운 미생물 변이주를 제조하고, 비필수 유전자를 선별하는 새로운 기술이다.본 기술은 양방향 분자내 전위을 통한 유전체 부분의 임의 제거하고 미생물의 비필수 유전자 선별, 유전체 축소된 미생물 변이주 제조할 수 있다.
본 기술은 폐수 및 휘발성 유기화합물(Volatile Organic Compounds, VOCs)을 생물학적으로 제거하는 담체충진형 생물여과장치에서 담체에 과도하게 증식·부착된 미생물을 제거하는 방법에 관한 것으로써 상기 담체충진형 생물여과장치의 하단부로부터 물과 공기방울을 혼합하여 역세척 함으로써 과량의 미생물을 효율적으로 제거하는 기술이다.담체충진형 생물여과장치에서 과량의 미생물 증식에 의해서 발생되는 압력손실로 인하여 오염물질제거효율이 저하됨 이와 같은 문제점을 해결하기 위해서 기존에 연구되어진 물만으로 역세척하는 방법을 물과 공기를 병행함으로써 역세척 효율을 높이고 폐수발생량을 현저히 줄일수 있으며 역세척 시간을 현저히 저감시킬 수 있다.
간염B바이러스의 S 항원에 대한 항체를 생산하는 재조합 CHO 세포에 세포예정사를 억제하는 Bcl-2 단백질의 과발현을 유도할 수 있도록 Bcl-2 발현 벡터를 도입한다. Subcloning 방법을 통하여 Bcl-2를 과발현하는 세포를 확보하고 이 세포를 회분배양하는 과정에서 항체를 생산하는 단계에서 배지내에 외래단백질의 발현을 증가시키는 sodium butyrate를 첨가하고 sodium butyrate의 세포독성으로부터 유도되는 세포예정사를 Bcl-2 단백질의 과발현을 통하여 억제함으로써 최종항체생산성을 대조군과 비교하여 2배 이상 증가시킬수 있다. 본 기술은 외부단백질의 발현효율을 높일 수 있는 sodium butyrate의 세포독성에 대한 저항성을 세포에 부여하기 위하여 생존단백질로 알려져있는 Bcl-2 단백질을 항체생산 CHO 세포에서 과발현을 유도하여 재조합 단백질의 단위생산성 증가 및 배양 기간의 연장을 동시에 실현함으로써 최종 단백질생산성 증가를 가능하게 하는데 기술적 특징이 있다.
목적단백질 생산을 위하여 산업적으로 널리 사용되는 DHFR이 결핍된 CHO DUKX 세포주를 무혈청 배지에서 부유배양이 가능하도록 적응하였다. 예정사를 억제하기 위하여 bcl-2, 아데노 바이러스 E1B-19K 유전자를 각각 도입한 후 subcloning과 western blotting을 통하여 과발현하는 CHO 숙주세포주를 확보하여, 회분배양을 통해 세포의 농도와 생존율을 측정하였다. Bcl-2, 아데노 바이러스 E1B-19K 단백질을 과발현하는 세포주는 세포 생존율이 대조군에 비하여 완만하게 감소하였으며, 상대적으로 예정사가 감소하였다.본 기술은 무혈청 배지에서 부유배양이 가능하고, 예정사에 저항성을 갖는 DHFR이 결핍된 CHO 숙주세포주를 제공하므로써, 이 CHO 숙주세포주를 이용하면 예정사에 저항을 갖는 다양한 목적단백질을 생산하는 재조합 CHO 세포주를 효율적으로 제작할 수 있게 하는데 기술적 특징이 있다.
목적 단백질 말단에 폴리하이드록시알칸산 세포외 분해효소 기질흡착영역을 융합 발현시키는 재조합 미생물 및 그를 이용한 단백질 칩 또는 마이크로어레이의 제조방법에 관한 것이다.PHA 분해효소의 기질흡착영역을 대장균에서 목적단백질에 융합발현시켜서 이용하였을 경우 PHA 칩 상에 위치 특이적으로 고정되며 또한 정제 및 봉쇄공정이 필요치 않으므로 효율적으로 경제적으로 단백질 반응을 검출할 수 있다.
B형 간염 바이러스의 S 표면 항원에 대한 인간화된 항체를 생산하는 재조합 CHO 세포의 apoptosis를 억제하기 위하여 caspase-3에 대한 antisense RNA를 encoding하는 발현 vector를 도입하였다. Subcloning과 Western blotting을 이용하여 caspase-3의 발현량이 줄어든 세포를 확보하고 다양한 농도의 sodium butyrate가 첨가된 배지를 사용하여 회분배양을 실시하였다. Antisense RNA의 발현으로 sodium butyrate에 의한 apoptosis를 억제하였지만 항체의 생산은 증가하지 않았다. 그러나 세포막의 integrity를 유지시켜줌으로써 생산된 생산 단백질의 질을 향상시킬 수 있을 것으로 여겨진다.본 기술은 동물세포 배양 과정에서 생산된 단백질의 질에 나쁜 영향을 미치는 apoptosis를 억제하기 위해 Bcl-2 단백질과 같은 oncogenic 성질을 갖는 생존 단백질을 사용하지 않고 apoptosis의 마지막 단계에 작용하는 caspase-3 단백질 분해 효소에 대한 antisense RNA를 세포내에서 직접 유도으로써 caspase-3의 발현을 억제함과 동시에 생존단백질을 사용함으로써 발생할 수 있는 regulatory 문제를 해결할 수 있다는데 그 특징이 있다.
모체 단백질 (parent protein) 이나 효소 (enzyme)와는 유전자의 염기서열이나 길이 (sequence space)가 틀린 새로운 단백질이나 효소를 제조하는 방법에 관한 기술이다.대상 단백질이나 효소 유전자의 기능이 파괴된 결함 유전자에 무작위로 잘려진 유전체 DNA 조각이 무작위로 합성된 올리고뉴클레오타이드를 무작위로 삽입하거나 치환함으로써 염기서열의 유사성에 상관없이 모체 유전자와 염기서열과 크기가 다른 새로운 단백질이나 효소를 제조할 수 있다. 따라서 단백질 및 효소의 크기 변화는 물론 새로운 구조 및 특성을 갖는 새로운 단백질 및 효소의 제조가 가능하다.
세린 부유 외래 단백질 발현을 위한 재조합 대장균에서 대장균 유래 cysK 유전자를 동시 발현시킴으로서 생산성 향상 방법에 관한 것이다.재조합 대장균에 cysK 유전자를 동시 발현시키면 세린 부유 외래 단백질뿐만 아니라 다른 외래 단백질들도 효과적으로 생산할 수 있다.