전자기장 발생에 의한 유전자치료법 및 그 치료장치
인체에 전류 등 제요소를 결합한 전자기장을 발생시켜 병변 유전자 등을 정상 유전자로 복원시키는 유전자 치료기술 및 그 치료장치의 개발기술유전자에 대한 조작이나 시술을 하지 않고 인체의 유전자 발현체계를 가동시켜 치료하는 장치로서 안전성이나 윤리성에 문제가 없음.
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- 2000-01-17
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1 / 183 페이지천연고분자 키틴-키토산을 이용한 농약없는 콩나물재배
본 연구실에 의해 연구중인 농약없는 콩나물의 재배기술은 바다게(crab)껍질의 성분에서부터 얻어진 키틴(chitin), 키토산(chitosan)유도체를 이용한 것이다.키틴,키토산류는 항생능력이 뛰어나며 동시에 인체에 유익한 성분으로 밝혀져 있다. 또한 소화흡수 및 생리효능이 뛰어난 것으로 알려져 현재 건강 보조식품 및 식이 요법제로 시중에서 판매중이다. 게껍질의 주성분인 키틴, 키토산은 천연 고분자 (natural polymer)또는 생물고분자(Biopolymer)의 일종으로써 인류에게 좋은 역할을 해 주는 것으로 알려져 있다. 건강 식이섬유로 알려진 셀룰로우즈와 키틴-키토산의 구조를 비교해 보면 아주 유사한 구조이며 키틴-키토산이 셀룰로우즈 보다 콜레스테롤 등의 제거 효과가 월등한 것으로 보고되어있다. 농업용으로 쓰일 때는 무공해의 유기질 비료로써 해충의 감소, 달콤한 과일의 열매, 탐스러운 꽃을 열리게 해준다.
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- 2000-01-17
전자기장 발생에 의한 유전자치료법 및 그 치료장치
인체에 전류 등 제요소를 결합한 전자기장을 발생시켜 병변 유전자 등을 정상 유전자로 복원시키는 유전자 치료기술 및 그 치료장치의 개발기술유전자에 대한 조작이나 시술을 하지 않고 인체의 유전자 발현체계를 가동시켜 치료하는 장치로서 안전성이나 윤리성에 문제가 없음.
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- 2000-01-17
전분과 설탕으로부터의 혼합발효배양을 이용한 의료용 Dextran 생산에 관한 연구
다당류의 일종인 덱스트란(dextran, Glucose 1>6 )을 가수분해하는 효소(dextranase)를 생산하는 효모균인 Lipomyces starkeyi와 덱스트란을 합성하는 효소(dextransucrase)를 생산하는 박테리아균 Leuconostoc mesenteroides를 설탕과 전분을 함께 혼합발효 배양함으로써 특정한 크기의 덱스트란을 생산했다. Lipomyces starkeyi의 dextranase와 amylase에 의해 각각 만들어진 덱스트란과 전분분해산물은 작은 크기의 덱트트란 (Mr=40kDa)을 합성했다.혼합발효배양에서 총 덱스트란과 의료용 덱스트란 수율은 15% 설탕을 이용했을 때 각각 이론적 수율의 73%(w/w)와 69%(w/w)이였고 12% 설탕과 3% 전분을 이용했을 때는 이론적 수율의 84%(w/w)와 79%(w/w)로 수율이 높아졌음을 볼수 있었다.
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- 2000-01-17
재조합 대장균에 의한 생분해성 고분자 PHA 생산
폐플라스틱으로인한 환경문제가 심각히 인식되면서, 완전 생분해성이며 기존의 합성 고분자와의 유사한 물성을 갖고 있는 Polyhydroxyalkanoates (PHAs)는 기존의 석유합성 플라스틱의 대체 물질로써 현재 전세계적으로 연구의 대상이 되고 있다. 하지만 생분해성 고분자 PHAs는 아직까지 높은 생산 단가로 인하여 상용화에 어려움을 겪고 있다. 이러한 높은 생산 단가를 낮추기 위한 연구로, 유전자 재조합 기술을 이용한 재조합 대장균에의한 PHA 생산 연구가 한국과학기술원 화학공학과 이상엽 교수에 의해 수행되었다. Alcaligenes eutrophus의 PHA 생합성 유전자를 자기 복제능이 있는 플라즈미드 DNA에 끼우고 이것을 대장균에 넣어 탄소원이 첨가된 배지에서 대량증식하여 PHAs중에서 대표적인 Poly(3-hydroxybutyrate) [P(3HB)]를 생산정제하였다. 이를 위하여 안정화된 높은 복제수의 플라즈미드를 개발하였고, 이러한 개발된 플라즈미드를 가지고 여러 대장균을 형질 전환하여 최적의 재조합 균주를 선택하였고, 그 균주를 이용하여 P(3HB) 합성을 연구하였다. 또한 P(3HB) 생산단가에서 가장 큰 비중을 차지하고 있는 기질 및 배지의 생산 단가를 낮추기 위하여 저렴한 단순 배지를 사용한 P(3HB) 생산을 연구하였다. 또한 재조합 대장균이 P(3HB)를 합성할 경우 세포분열이 억제되어 균체가 신장되어지는 현상(필라멘테이션)을 발견하여, 이러한 필라멘테이션이 억제된 재조합 대장균을 개발하였다. 그 결과 저가의 단순배지에서, 지금까지 재조합 대장균을 이용한 P(3HB)의 생산에서 얻어진 가장 높은 값인 149 g/L의 세포농도, 104 g/L의 P(3HB) 농도를 51시간 만에 얻었다. 이러한 연구와 함께 보다 저가의 탄소원을 이용하여 재조합 대장균에서 P(3HB)를 생산하려는 연구도 시행중이다.현재 재조합 대장균을 이용한 P(3HB) 생산 기술을 이용할 경우 P(3HB)의 생산 단가를 kg당 $ 4 이하로 낮출 수 있으며, glucose 대신에 저가의 탄소원을 쓸 경우에는 그 이하의 생산 단가를 얻을 수 있다.
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- 2000-01-17
단백질성 철분제재
ㅇ 개발기술(제품) 내용 철분결핍으로 인한 빈혈의 예방 및 치료의 목적으로 철분이 강한 chelating을 형성하는 단백질 서이분들(주로 ransferin과 IgG)을 동물의 혈장으로부터 분리하여 철분과 결합시켜 식품첨가제 또는 의약품 용도록 사용될 수 있는 철분제제 제조기술 - 가공(제조)공정 혈액수거 -> 혈장분리 및 트랜스페린 추출물 분획 -> 농축 및 건조 -> 철분+트랜스페린 추출물 -> 멸균 -> 농축 및 건조ㅇ 실용화에 대한 의견 동물혈액을 이용하여 비교적 간단한 공정을 거쳐 제조되었으므로 경제적이고 대량생산이 가능하며 위생적인 안전성이 부여되었기 때문에 폐자원을 이용한 고부가 가치 제품의 생산이 가능 철분의 체내흡수를 증진시키고 위생적으로 안전한 단백질성 철분제제임
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- 2000-04-07
수퇘지고기의 웅취 신속판별 기술
ㅇ 개발기술(제품) 내용 돼지고기는 한국인들이 가장 많이 소비하는 육류이다. 그러나 한국인들이 돼지고기를 기피하는 원인중의 하나는 바로 돼지고기에서 나는 특이취인 웅취 때문이다. 그러나 웅취는 거세하지 않은 수퇘지에서만 나타나는 현상이며 그 확률 또한 7% 이하에 불과하다. 즉 100마리중 7마리 이하의 빈도로 나타난다. 물론 거세시킨 수퇘지에서는 웅취가 나타나지 않으나 수퇘지를 거세시킬 경우 사료효율과 정육률이 떨어져 약 15%의 경제적 손실이 있다. 따라서 거세 시키지 않은 수퇘지중 웅취가 발현되는 수퇘지를 신속 정확하게 판별할 수 있는 기술을 개발하여 냄새(웅취) 안나는 돼지고기의 유통을 가능토록 하였슴. - 판별시험과정 시료채취 -> 전처리 -> 웅취측정시험 -> 판별 -> 웅취돈(7% 미만) 선별 -> 비웅취돈(93%이상) 유통ㅇ 실용화에 대한 의견 : 국내 돈육 생산업체 또는 유통업체가 상기 기술의 전수를 원할 경우 현장적용 시험을 통하여 기술전수할 예정임.ㅇ 기타 참고 사항 : 농림수산 현장애로사업으로 개발된 기술로서 생산자 단체 혹은 중소기업이 본 기술의 전수를 원할 경우 우선 지원 예정.웅취를 판별하기 위하여 돼지 등지방을 개체당 20g∼ 50g 정도 채취하여 면역학적 방법, 근적외선분광분석법 등의 측정방법을 통하여 신속하게 판별함.
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- 한국식품연구원
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- 2000-04-07
충치예방 계란
ㅇ 개발기술(제품) 내용 닭에다 충치균인 Streptoccocus mutans를 접종하여서 난황에서 항-충치균 IgY를 생산하는 기술임 - 가공(제조)공정 항원제조 -> 닭에 접종 -> 계란 수거 ->특수란 ->식품에 첨가 ->IgY 분리 ㅇ 실용화에 대한 의견 -특수란으로 시판 -소재 추출 후 아이스크림, 요쿠르트, 껌, 초코렛 등에 첨가 5세 미만의 유아에게 안전한 충치 예방 소재임, 계란 단백질이므로 매우 안전함
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- 2000-04-07
난황으로부터 포스파티딜콜린의 생산기술
ㅇ 개발기술(제품) 내용 계란으로부터 동물성 레시친의 중요한 원료인 난황레시친을 상업적으로 생산하기 위하여 phosphatidyl choline 함량 50% 이상 및 80% 이상의 난황레시친의 경제적인 생산기술. - 가공(제조)공정 계란-> 할란-> 난황->전처리->추출->농축->1차정제(PC 50% 난황레시친) -> 2차정제(PC 80% 난황레시친)ㅇ 실용화에 대한 의견 : 기능성 식품소재, 의약품, 화장품 및 식품의 원부재료로 광범위하게 이용 가능한 소재의 생산기술로 1일 700㎏ 생산시 건축소요면적 500평, 기기설비비 16억원 등으로 추산됨.유해성 용매잔류 위험 배제, 저온처리하여 고품질의 레시친 생산, 건강보조식품 및 의약품 원료로 이용, 알츠하이머형 노인성 치매 예방 및 치료용 원료, 동맥경화 및 지방간 예방 치료용 소재
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- 2000-04-07
신규유전자 탐색.기질세포 유전자 판넬의 개발과 이를 이용한 암전이 유전자 검색
본 연구는 지금까지 연구가 체계적으로 이루어지지 않고 있는 기질세포를 대상으로 유전자를 분리하여 643종의 유전자원을 확보하고 염기서열을 결정하여 data base를 구축하였다. 또한 확보된 유전자를 이용하여 두 조직 혹은 두세포간의 유전자 발현의 차이를 조사하는 Differential EST Screening (DES) 방법을 독자적으로 개발하고 이 방법을 이용하여 두경부암 및 대장암에서 발현이 변동된 유전자를 탐색하였다. 그 결과, 각종 유전자 탐침을 확보하게 됨으로써 이를 필요로 하는 연구팀에게 분양을 해 줄 수 있게 되었으며 유전자 판넬을 저렴한 가격으로 공급해 줄 수 있다. 또한 본 연구팀이 확보한 유전자 분리, 분석 기술과 신기능 유전자 분리기술, 유전자기능 분석기술등을 타기관에 제공할 수 있다. 유전자 database를 타기관도 자유롭게 접속할 수 있게 함으로써 유전자 정보를 제공할 수 있다
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- 한국생산기술연구원
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- 2000-04-07
작물의 기관발생 및 화기형성 조절 유전자의 개발
배추와 고추로부터 유전자 개발 및 조작기술과 형질전환 기술 등을 이용하여 개화시기의 조절, 웅성불임의 유도 및 환경 내성을 간직한 신기능 작물을 개발하기 위하여 배추의 약, 화사 및 암술로부터 부터 poly(A)+ RNA를 분리하고 이를 이용하여 cDNA library를 제조하였다.약의 cDNA library로부터 약 특이 cDNA clone을 분리하기 위하여 차별혼성화 반응을 수행함으로써 43개의 약 특이 cDNA clone을 확보하였으며, 이들중에서 5개의 clone이 기존의 유전자와 유사성을 보였다. 배추 약 특이성 clone 중에서 유채의 화분 특이 clone인 BAN215에 해당하는 유전자를 genomic library로부터 분리해 내고 이의 promoter에 GUS 유전자를 부착하여 담배에 도입시켜 발현을 조사한 결과 GUS 활성이 화분에서만 특이하게 발현되는 것을 관찰하였다.배추의 화사 cDNA library를 탐색하여 화사 특이성 clone인 C38을 분리하였다. 또한 암술 cDNA library에서 분리된 111개의 cDNA clone에 대하여 부분적인 염기서열을 결정하고 database를 탐색한 결과 27개의 clone이 기존의 유전자와 동질성을 보여주었는데 이들에는 가뭄에 의하여 유도되는 유전자와 자가불화합성 관련 thioredoxin 유사 유전자가 포함되었다.또한 고추에서 유용유전자를 분리하기 위하여 genomic library를 제조하였다
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- 한국생산기술연구원
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- 2000-04-07
형질전환 동.식물 이용기술 개발
형질전환 동식물 이용기술 개발을 목표로 다음과 같은 연구결과를 얻었다.형질전환 동물 분야 유용물질을 유즙중에 생산하는 형질전환동물 (젖소, 산양) 개발을 목표로 사람락토페린 생산 형질전환 생쥐의 유전성 및 유선조직 발현특이성이 관찰되었으며 사람 성장호르몬을 다량 (5500 ±620㎍/ml) 생산하는 형질전환 생쥐도 생산되었다. 또한 외래유전자가 수정란에 이식된 정상적인 송아지도 7마리 생산되었다. 형질전환 산양을 개발할 목적으로 사람 G-CSF, GM-CSF, goat β-casein 유전자가 클로닝되어 유선조직 특이 발현 vector 2종을 제작하였으며, 산양 수정란 및 정액 채취, 수정란 배양조건이 확립되었다. 그리고 염소 β-lactoglobulin의 5'조절부위와 α 1-antitrypsin, erythropoietin 유전자를 이용하여 각각의 발현벡터를 만들고 유선세포 및 형질전환 생쥐에서의 발현을 관찰하였다. 한편 국제공동연구로 신호전달효소인 PLC와 항산화물질인 TPx 의 유전자도 클로닝하였다. 이상의 결과를 통하여 형질전환 동물 (젖소, 산양) 개발에 필요한 기반기술이 확립되었다고 판단된다.
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- 한국생산기술연구원
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- 2000-04-07
신호전달계 효소 및 항산화물질 관련 형질전환 동물 개발
Phospholipase C (PLC)와 thioredoxin peroxidase (TPx)에 대한 분자 유전학적 연구를 수행하고 이를 바탕으로 관련 인체 질병에 대한 형질전환 모델 동물을 제작하고자 제 1차년도에서 다음과 같은 기반 연구결과를 얻었다. 1. PLC의 분자유전학적 연구Balb/c genomic library에서 PLCβ3 유전자의 exon 5를 함유하는 DNA 절편과 PLCβ4 유전자의 exon 6을 포함하는 DNA 절편을 각각 cloning 하였고, exon/intron의 구조와 위치, 제한효소지도 등을 작성하므로써 gene targeting에 사용될 vector 제작에 필요한 분자유전학적 기반을 마련하였다. 2. TPx의 분자유전학적 연구생쥐의 뇌 cDNA library로부터 TPx 유전자를 분리하여 단백질의 구조를 확인하였고, 생쥐 1292종의 genomic DNA library로부터 3종의 TPx genomic DNA clone을 분리하여 exon/intron의 구조, 제한효소지도 등을 연구한 결과 생쥐 genome에는 적어도 2가지 이상의 밀접히 연관된 TPx 유전자가 존재함이 파악되었다. 이 중 한가지는 적어도 6개의 exon과 5개의 intron으로 형성되는 구조를 가지고 있었으나, 다른 한가지는 단일 exon과 5개의 intron으로 형성되는 구조를 가지고 있었으나. 다른 한가지는 단일 exon으로 구성되어 있다. 두 TPx 유전자 모두 198개의 아미노산으로 구성되는 단백질을 암호화할 수 있었으며, 그 아미노산 서열의 유사성은 약 96%였다. 3. 유전자 발현조절부위의 분리생쥐 129 SVJ의 genomic library로부터 metallotheinein, albumin 등 조직 특이적 발현 유전자의 promoter와 Tpx 유전자의 promoter 등을 분리하였고, 이에 대한 제한효소 지도를 작성하였다. 4. Gene targeting을 위한 기반기술배아간세포 (embryonic stem cell : ES cell)에서의 homelogous recombination을 통한 gene targeting 기법에 의하여 형질전환 동물을 제작하고자, 그 기초기술로써 feeder cell의 제조, ES 세포주의 계대 및 유지기술, ES 세포주를 이용한 chimera 생산방법 등을 해외훈련을 통하여 습득하고 본 연구실에서 확립하였다.
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- 한국생산기술연구원
- 등록일
- 2000-04-07
식품첨가를위해 이취 및 색택을 개선한 가축혈액으로부터 면역단백질 회수방법
본 개발기술을 통해 생산된 면역단백질을 이용하여 초유를 완전히 공급받지 못한 유아 혹은 어린가축에 조제분유 혹은 이유식에 첨가할 수 있으며, 기타 면역기능의 보강 및 질병예방효과가 있는기능성식품의 소재 혹은 그 용도로 활용가능한외여과기를 이용한 면역단백질의 수율증가 방안확립. 음이온 교환수지처리를 통한 면역단백질의 순도증가방안 확립. 면역단백질의 산업적 생산방안 가능성 확인. 면역단백질의 이용한 육제품 등 면역기능성 식품개발
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- 한국생산기술연구원
- 등록일
- 2000-04-07
고급단백질 생산 형질전환 식물 개발
담배(Nicotiana tabacum)에 도입된 인체 인터루킨-2, 인터루킨-6, 인슐린 유전자들의 transgenic 담배 제4세대로의 안정적 유전 및 발현 확인. 담배에 도입된 해녀콩 레그헤모글로빈 유전자의 transgenic 담재 제 2세대로의 안정적 유전 및 발현 확인, Transgenic 담배에서 인체 인터루킨류와 인슐린 유전자의 강력한 발현을 이끌 수 있을 것으로 판단되는 담배모자익바이러스(TMV)를 기초로한 expression vector의 조립 착수. Transgenic 담배에서 생성되는 인터루킨 또는 인슐린 단백질의 세포밖으로의 분비를 위한 signal peptide를 기록하는 DNA 합성, 브로꼴리와 양배추와 배추의 웅성불임화를 가져올 것으로 판단되는 cDNA 클론들(BASC-1과 BASC-2)의 완전한 염기서열 결정, BASC-1과 BASC-2 유전자의 브로꼴리 화아 발달과정에서 정확한 발현 위치를 확인하기 위한 in situ 분석, 브로꼴리와 양배추와 배추의 웅성불임화를 위한 expression vector의 조립에 필요한 promoter의 확보를 위하여 BASC-1과 BASC-2의 genomic 클로닝, 이미 조립된 BASC-1 또는 BASC-2 유전자가 cauliflower mosaic virus의 35S promoter뒤에 antisense 방향으로 삽입된 웅성불임 유도용 재조합 DNA를 배추에 도입하여 발현.
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- 한국생산기술연구원
- 등록일
- 2000-04-07
당지질계 생물고분자 유화제의 탐색 및 응용기술
Acinetobacter calcoaceticus RAG-1이 생산하는 Emulsan의 지방산 조성을 다른 종류의 탄소원을 기질로 공급함으로써 변화시킬 수 있었다. 지방산 조성이 바뀐 Emulsan은 oil/water system에서 서로 다른 emulsifying activity를 나타내었다. Emulsan의 지방산은 decanoic acid, dodecanic acid, dodecenoic acid, 2-hydroxydodecanoic acid, 3-droxydodecanoic acid, tetradecanoic acid, hexadecanoic acid, heradecenoic acid, octadecanoic acid와 octadecenoic acid 등으로 이루어져 있다. E,mulsan의 구성지방산 중 3-hydroxydodecanoic acid가 emulsifying activity에 가장 중요하게 작용하는 것으로 나타났다. 40,000여개의 colony로부터 야생형에 대해서 20% 정도의 성장을 보이며 oleic acid가 첨가되면 80% 정도 성장이 회복되는 한 개의 불포화지방산 영양요구 돌연변이를 획득하였다.
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- 한국생산기술연구원
- 등록일
- 2000-04-07
해충제어용 활성미생물 탐색기술개발(II)
전국의 자연계로부터 지속적으로 BT 균주를 분리하여 총 3000여 균주를 확보하였으며 이들 중 2,000여 균주에 대하여 crystal morphology , 독소 단백질의 SDS - PAGE , bioassay , biochemical 특성조사 등을 완료하였고, DNA dot blot hybridization 및 PCR 을 통하여 가장 효과적으로 신규성이 있는 균주를 선별하는 방법을 확립하였다. 이런 방법으로 분리균주 BF190으로 부터 새로운 2개의 독소유전자를 발견하였으며 두종류 모두 cloning 하여 염기서열을 결정하였는데 둘다 기존의 다른 독소 유전자와 상동성을 가지지 않았다. 또한 분리주 BP465에서도 cryV-type 의 독소유전자를 발견하여 염기서열을 결정한 결과 새로운 독소유전자임이 밝혀졌다. 딱정벌레류에 독성을 보이는 Bt subsp. tenebrioruis(BTT)형태의 균주를 국내 최초로 분리하였으며 독소 단백질을 SDS -PAGE 로 분석한 결과 기존의 BTT 균주보다 더 많은 양의 독소단백질을 합성하는 균주를 발견할 수 있었다. 이러한 독소단백질 과다생산 균주는 기존의 BTT 균주보다 좀더 우수한 살충성을 보일 것으로 기대되며 기존의 BTT 제제와 경쟁력이 있을 것으로 기대된다. 한편 파밤나방에 대해서 가장 강한 활성을 보이는 cryIC유전자를 Bt subsp. entomocidus HD198 균주에서 cloning 한 후 이 유전자를 이용 재조합 plasmid 를 만들어서 BT 4D11 균주에서 발현시키는데 성공하였다. 이 재조합 균주는 파밤나방이 집중적으로 발생하는 시기에 작물의 보호에 유용하게 사용될 수 있을 것으로 전망된다.
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- 한국생산기술연구원
- 등록일
- 2000-04-07
미세조류 형질 전환법에 의한 유용 물질의 생산
자연계에 존재하는 미세 조류를 유용 유전자로 형질전환 시키고 이들을 대량 배양하여 미세조류로부터 유용한 물질을 경제적인 비용으로 대량 생산하는 기술을 개발하는 것이다. 본 발명에서는 미세조류의 원형질체를 생성하여 외래 유전자를 대량 발현시키고 이를 이용한 제품을 만드는 것이다. 본 발명은 어류의 성장호르몬 유전자를 이용하여 미세조류를 형질전환 시킨 후 대량 배양하여 어류의 성장을 촉진하는 기능성 사료를 개발하는데 있었으며 이 기술을 이용하여 성장 호르몬 유전자를 다른 유용 유전자로 대체하여 원하는 기능성 단백질을 대량 생산하는 진핵세포 발현 시스템을 개발할 수 있다. 예를 들면 어류의 성장 호르몬 유전자를 interferon과 같은 면역관련 유전자로 대체할 경우 어류의 면역기능을 증가시키는 특수 사료를 제조할 수 있을 것이다. 현재 본 연구진에 의하여 어류로부터 여러 유용 유전자가 분리되어 있기 때문에 여러 가지의 특수 기능을 가진 유용 단백질의 대량 생산이 가능할 것이다. 이러한 적용 범위는 어류에 국한된 것이 아니어서 유전자가 확보될 경우 의학적, 산업적으로 가치있는 단백질을 형질전환된 미세조류로부터 생산할 수 있을 것이며 따라서 본 발명의 적용 범위와 효과는 무한하다고 볼 수 있다.미세조류는 단세포로 된 진핵 생물로 동물이나 식물이 만드는 단백질과 가장 가까운 기능과 활성을 지닌 단백질을 만들 수 있다. 또한 미세조류는 간단한 시설과 저렴한 비용으로 대량 생산할 수 있으며 이들로부터 발현된 단백질을 분리 정제하는 방법도 간단하여 이들 물질의 생산비를 크게 감소시킬 수 있어 경제성이 탁월하다.
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- 한국생산기술연구원
- 등록일
- 2000-04-07
버섯류의 발효에 의한 미백식품의 개발
식품을 통하여 기미나 노인성 검버섯을 치유할 수 있는 목적기초연구를 수행하였다. 이들 증상을 일으키는 물질인melanin의 생합성에는 인체내에서 tyrosinase라는 한가지 효소만이 관여하므로 이 효소의 저해제를 탐색하였다.식품미생물로부터 저해제 생산능이 높은 fungus를 선정하였으며 저해제 생산을 위한 배지는 표고버섯과 glucose 두 가지만으로도 충분하였다. 식용식물체 129종 및 식품 성분 15종의 tyrosinase 활성 저해능을 탐색한 결과 홍고추, 무, 표고버섯, 4-hexylresorcinol, L-cystein, glutathione, kojic acid 등이 80% 이상의 높은 저해능을 보였다.생체 내에서 저해제의 효과가 발휘되는지를 알아보기 위하여 저해제를 cysteine 등이 함유된 식품첨가물 처리구, 표고버섯을 Aspeptomyces bikiniensis와 검은툭눈붕어를 이용하여 효능을 평가한 결과 식품 첨가물 처리구와 버섯 발효액 처리구 붕어는 검은색이 퇴색하여 대조구보다 명도와 yellowness가 유의성이 있게 높은 것으로 나타나 melanin 생성 억제 효과가 뚜렷하였다. 이 결과를 바탕으로 tyrosinase 저해제가 함유된 음료 1종을 개발하였다.
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- 한국생산기술연구원
- 등록일
- 2000-04-07
신호전달체계 연구를 위한 세포성장인자 유전자 탐색 및 발현
1. EGF의 대량정제공정 확립 EGF 발현균주인 E. coli JM101/pTE105를 발효시켜 획득한 발효상등액으로부터 3단계 정제공정을 거쳐 1회 정제시 99.5% 이상의 순도를 가지는 EGF를 1.5g 이상 분리정제하는 공정을 확립하였으며 이 정제방법을 특허출원 하였다(대한민국 특허출원 제93-6980호). 2. 구조, 조성 및 물리화학적 특성규명 정제한 EGF의 아미노산 서열 및 조성분석, peptide mapping 및 disulfide 결합위치 분석등을 수행한 결과 천연에 존재하는 EGF와 동일한 아미노산서열 및 구조를 갖는다는 것을 규명하였으며, 또한 SDS-PAGE, Western blotting, Gel filtration FPLC, RP-HPLC등의 분석법을 적용하여 EGF의 분자량 및 면역학적 성질이 천연의 것과 동등하였고, circular dichroism 분석과 NMR의 방법으로 분석하였을 때 2차 및 3차 구조도 천연의 EGF와 동일함을 확인하였다. 3. EGF의 생물학적활성 연구 정제된 EGF의 생물학적 활성을 mitogenic assay와 receptor binding assay를 수행하여 측정한 결과 정제된 EGF 1mg은 국제활성단위(international unit)로 1.37±0.17×106 IU로 측정되었으며, in vivo 실험인 guinea pig의 피부창상에 대해서도 EGF는 유의성있는 피부재생효과를 나타내었다. 4. EGF의 안정성연구 EGF의 안정성시험을 pH 및 온도, 장기보관, 가혹보관등의 조건하에서 수행한 결과, EGF는 중성 pH(pH 5∼7)에서 안정하였으며, -20℃와 4℃에 58주 동안 장기보관시, 분말 혹은 용액상태에 관계없이 함량, 순도, 활성의 유의적인 변화를 보이지 않았다. 한편 온도가 37℃ 이상 및 freezing and thawing등의 가혹조건 하에서는 탈아미노 EGF와 같은 분해산물들이 나타났으나 이들 역시 90% 이상의 생물학적 활성을 나타내었다. 5. 피부재생제 및 각막부활용 의약품으로의 개발 본 연구결과 화상치료 및 각막손상의 근본적 치료제로서 유망한 EGF 단백질원료의 대량생산이 가능해졌으므로, 빠른 시일내 의약품으로의 제품화가 가능할 것으로 기대된다. 현재 대웅제약에서는 본 연구를 통하여 얻어진 EGF를 피부창상, 화상 및 만성피부궤양을 치료하고자 하는 피부상처치료제와 각막수술, 엑시머레이져에 의한 근시교정술시 손상되는 각막의 회복을 촉진시키는 각막상처 치료제로의 개발을 추진하고 있다.
- 보유기관
- 한국생산기술연구원
- 등록일
- 2000-04-07