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생명과학 > 기타 유전자 공학
자연계에 존재하는 미세 조류를 유용 유전자로 형질전환 시키고 이들을 대량 배양하여 미세조류로부터 유용한 물질을 경제적인 비용으로 대량 생산하는 기술을 개발하는 것이다. 본 발명에서는 미세조류의 원형질체를 생성하여 외래 유전자를 대량 발현시키고 이를 이용한 제품을 만드는 것이다. 본 발명은 어류의 성장호르몬 유전자를 이용하여 미세조류를 형질전환 시킨 후 대량 배양하여 어류의 성장을 촉진하는 기능성 사료를 개발하는데 있었으 며 이 기술을 이용하여 성장 호르몬 유전자를 다른 유용 유전자로 대체하여 원하는 기능성 단백질을 대량 생산하는 진핵세포 발현 시스템을 개발할 수 있다. 예를 들면 어류의 성장 호르몬 유전자를 interferon과 같은 면역관련 유전자로 대체할 경우 어류의 면역기능을 증가 시키는 특수 사료를 제조할 수 있을 것이다. 현재 본 연구진에 의하여 어류로부터 여러 유 용 유전자가 분리되어 있기 때문에 여러 가지의 특수 기능을 가진 유용 단백질의 대량 생산 이 가능할 것이다. 이러한 적용 범위는 어류에 국한된 것이 아니어서 유전자가 확보될 경우 의학적, 산업적으로 가치있는 단백질을 형질전환된 미세조류로부터 생산할 수 있을 것이며 따라서 본 발명의 적용 범위와 효과는 무한하다고 볼 수 있다.- 미세조류는 단세포로 된 진핵 생물로 동물이나 식물이 만드는 단백질과 가장 가까운 기 능과 활성을 지닌 단백질을 만들 수 있다. 또한 미세조류는 간단한 시설과 저렴한 비용으로 대량 생산할 수 있으며 이들로부터 발현된 단백질을 분리 정제하는 방법도 간단하여 이들 물질의 생산비를 크게 감소시킬 수 있어 경제성이 탁월하다.
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- 한국생산기술연구원
- 등록일
- 2000-09-06
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생명과학 > 기타 유전자 공학
1. 생물학적 다양성을 이용한 유용유전자원의 탐색 및 보존 110여종의 외생근균류, 30여종의 토양유래 효모류 확보. 야생곤충의 장내미생물을 탐색, 섬유질분해와 관련된 31종의 미생물을 분리 동정, 그 효능이 우수한 3종을 선별 추후의 유전자분석에 사용. 2. 신속분류체계의 개발 분류지표 유전자로 ITS 유전자의 PCR-RFLP에 의한 database 작성, Trichoderma속 균의 분류 및 토양유래 효모의 분류에 its 유전자의 RFLP 양상을 적용. 3. 유용유전자의 탐색 1) 균류의 분화관련 유전자 Flammulina velutipes를 대상으로 differential display 방법으로 total RNA로부터 분화단계별로 mRNA의 발현 양상의 차이를 조사. 분화단계에 따라 발현강도와 발현유무의 차이를 보이는 총 73개의 특이적인 clone을 확보, 클로닝. 곤충병원성 사상균으로 부터 세포벽 합성 유전자의 일부를 확보, 그 유전자 염기서열 및 아미노산 서열을 조사하여, 이들 병원균의 분류학적 위치 분석. 2) 내열성 유용효소관련 유전자 내열성 균주인 Thermus caldophilus GK24로부터 genomic library를 제조하고, 이로 부터 찾아낸 유전자의 일차구조를 결정, 산업적으로 유용한 새로운 용도의 내열성 효소를 개발. 3) 곤충으로부터의 유용유전자 집누에나방과 흰불나방의 탈피 및 변태에 관여하는 chitinase의 cDNA의 확보, 그 염기서열 및 아미노산 서열을 조사, 생장에 따른 탈피과정에서의 발현정도 및 유무를 Southem hybridization으로 확인, 집누에나방의 chitinase를 baculovirus expression vector를 이용하여 곤충세포주에서 발현시켜 효소의 활성을 확인. 4) 당뇨질환모델동물의 유전적 형질검정 혈청내 생화학적 구성 성분의 비교분석에서 Glucose의 양이 유의성 있음. Total protein 및 triglycerides도 역시 모델동물 계통들이 ICR 계통에 비해 다소 차이. 비만과 직접연관되는 HDL-cholesterol과 creatinine kinase는 큰 차이를 나타내지 않음. 제한효소 절단다형질은 Xba I 만이 polymorphism을 보여, glycogen synthase cDNA와 hybridization 함으로써 당뇨질환의 모델형에 따른 대립인자 존재확인.
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- 한국생산기술연구원
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- 2000-09-07
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생명과학 > 기타 유전자 공학
본 연구는 새로운 성장관련 유전자들이 도입된 형질전환 돼지를 생산기술을 개발하고 동시에 과다한 성장관련인자의 유전자 발현을 적절한 수준으로 조절하기 위하여 새로운 promotor를 개발하고 자돈의 성장초기나 중기에서부터 이들 유전자의 발현이 시작되도록 외래유전자를 조작하여 신체적 결함이 없는 고급육 생산 형질전환돼지를 개발하기 위하여 실시하였다. 도살된 돼지의 난소에서 회수된 미성숙 난포난의 성숙과 체외 수정을 유도하고 체외 발달을 위한 배양액과 새로운 첨가제를 개발하였다. 산양의 성장호르몬, IGF 및 돼지의 GHBP유전자를 RT-PCR방법으로 cloning하고 특이한 promotor와 재조합하였으며 산양 성장호르몬 재조합유전자를 171개 생쥐 수정란에 미세주입하여 외래유전자가 삽입된 4마리의 산자를 생산 하였다. 43마리의 공란돼지에서 채취한 625개의 수정란 중 453개를 23마리의 수란돼지에게 비외과적으로 이식한 결과, 18마리는 임신이 확인되었다. 이상과 같은 연구결과들을 고려해 볼 때, 본 연구에서 고급육을 생산하는 형질전환 돼지개발에 필요한 기초기술들이 개발 정립되었으며 이러한 기술들은 타가축에서도 그 생산성을 제고시키는데 응용가능 하다고 본다
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- 한국생산기술연구원
- 등록일
- 2000-09-07
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본 연구는 지금까지 연구가 체계적으로 이루어지지 않고 있는 기질세포를 대상으로 유전자를 분리하여 643종의 유전자원을 확보하고 염기서열을 결정하여 data base를 구축하였다. 또한 확보된 유전자를 이용하여 두 조직 혹은 두세포간의 유전자 발현의 차이를 조사하는 Differential EST Screening (DES) 방법을 독자적으로 개발하고 이 방법을 이용하여 두경부암 및 대장암에서 발현이 변동된 유전자를 탐색하였다. 그 결과, 각종 유전자 탐침을 확보하게 됨으로써 이를 필요로 하는 연구팀에게 분양을 해 줄 수 있게 되었으며 유전자 판넬을 저렴한 가격으로 공급해 줄 수 있다. 또한 본 연구팀이 확보한 유전자 분리, 분석 기술과 신기능 유전자 분리기술, 유전자기능 분석기술등을 타기관에 제공할 수 있다. 유전자 database를 타기관도 자유롭게 접속할 수 있게 함으로써 유전자 정보를 제공할 수 있다.
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- 한국생산기술연구원
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- 2000-09-07
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1. EGF의 대량정제공정 확립 EGF 발현균주인 E. coli JM101/pTE105를 발효시켜 획득한 발효상등액으로부터 3단계 정제공정을 거쳐 1회 정제시 99.5% 이상의 순도를 가지는 EGF를 1.5g 이상 분리정제하는 공정을 확립하였으며 이 정제방법을 특허출원 하였다(대한민국 특허출원 제93-6980호). 2. 구조, 조성 및 물리화학적 특성규명 정제한 EGF의 아미노산 서열 및 조성분석, peptide mapping 및 disulfide 결합위치 분석등을 수행한 결과 천연에 존재하는 EGF와 동일한 아미노산서열 및 구조를 갖는다는 것을 규명하였으며, 또한 SDS-PAGE, Western blotting, Gel filtration FPLC, RP-HPLC등의 분석법을 적용하여 EGF의 분자량 및 면역학적 성질이 천연의 것과 동등하였고, circular dichroism 분석과 NMR의 방법으로 분석하였을 때 2차 및 3차 구조도 천연의 EGF와 동일함을 확인하였다. 3. EGF의 생물학적활성 연구 정제된 EGF의 생물학적 활성을 mitogenic assay와 receptor binding assay를 수행하여 측정한 결과 정제된 EGF 1mg은 국제활성단위(international unit)로 1.37±0.17×106 IU로 측정되었으며, in vivo 실험인 guinea pig의 피부창상에 대해서도 EGF는 유의성있는 피부재생효과를 나타내었다. 4. EGF의 안정성연구 EGF의 안정성시험을 pH 및 온도, 장기보관, 가혹보관등의 조건하에서 수행한 결과, EGF는 중성 pH(pH 5∼7)에서 안정하였으며, -20℃와 4℃에 58주 동안 장기보관시, 분말 혹은 용액상태에 관계없이 함량, 순도, 활성의 유의적인 변화를 보이지 않았다. 한편 온도가 37℃ 이상 및 freezing and thawing등의 가혹조건 하에서는 탈아미노 EGF와 같은 분해산물들이 나타났으나 이들 역시 90% 이상의 생물학적 활성을 나타내었다. 5. 피부재생제 및 각막부활용 의약품으로의 개발 본 연구결과 화상치료 및 각막손상의 근본적 치료제로서 유망한 EGF 단백질원료의 대량생산이 가능해졌으므로, 빠른 시일내 의약품으로의 제품화가 가능할 것으로 기대된다. 현재 대웅제약에서는 본 연구를 통하여 얻어진 EGF를 피부창상, 화상 및 만성피부궤양을 치료하고자 하는 피부상처치료제와 각막수술, 엑시머레이져에 의한 근시교정술시 손상되는 각막의 회복을 촉진시키는 각막상처 치료제로의 개발을 추진하고 있다.
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- 한국생산기술연구원
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- 2000-09-07
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유전공학기술의 발전은 바이러스 표면항원 단백질등을 항원으로 하는 재조합 백신의 개발에 큰 기여를 했지만, 현재 인류의 복지건강에 큰 위협이 되고 있는 HIV(Human Immunodeficiency Virus), HCV(Hepatitis C Virus)등의 Vacicne은 아직 개발되지 못했다. 이는 면역성을 향상시키는데 필수적인 백신 보조제 개발부진 때문이며, 따라서 재조합 항원 단백질의 백신 효율성을 증대시키기 위한 새로운 신규 면역보조제의 개발이 매우 시급한 실정이다. 현재 면역 보조제로는 Aluminum Hydroxide (이하 Alum)외에 선진국에서 신규 면역 보조제를 개발중에 있으며 이들 중에는 Saponin계, Oil emulsion계, Monophosphoryl lipid A계, Cytokines계 등이 있다. 이들 중에는 특히 Saponin계 역역보조제와 Oil emulsion계 면역보조제 등이 속하며, 이로부터 새로운 신규 면역보조 성분을 개발하려하고 있다. 특히 남미산 식물인 Quilaja Saponaria Molina로부터 추출한 Saponin은 체액 및 세포성 면역반응을 증가시키는 것으로 밝혀졌다. 우리는 Quiliaja saponaria molina의 표피추출물을 한외 투석막으로 투석후, 이를 C4 RP-HPLC로 분리하여 개개의 사포닌 분획물들 분리정제하였다. 이 방법에 따라 32개 이상의 사포닌 변이체가 분리되는데 이중 비교적 수율이 높으면서 높은 면역보조 활성을 갖는 5개의 peak을 QS-L1, QS-L2, QS-L3, QS-L4, QS-L5로 명명하였으며, 이 peak들의 면역보조활성 및 생쥐에서의 독성을 측정하였다. 실험결과들을 종합해 볼때 QS-L1은 Alum과의 혼합사용시 탁월한 면역보조 효과를 나타내며, 또한 CD-1 생쥐 독성시험에서도 QS-L5을 포함한 다른 사포닌 분획물보다 훨씬 낮은 독성을 보여 면역보조제로서의 인체사용 가능성을 높게해 준다.
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- 한국생산기술연구원
- 등록일
- 2000-09-07
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생명과학 > 기타 유전자 공학
본 발명은 폐질환을 일으키는 폐흡충의 인체 병인에 중요한 역할을 담당하는 시스테인 단백질분해효소(cysteineprotease, 이하, 시스테인 프로테아제라 한다)를 암호화하는 전체 유전자 서열 및 발현된 단백질에 관한 것이다.본 발명은 폐흡충의 시스테인 프로테아제를 암호화하는 유전자 서열 및 이 서열에 의해 발현된 단백질에 관한 것이다. 본발명에 따른 유전자 서열 및 단백질 서열은 특정의 프라이머를 사용함으로서 규명되었고, 이들 프라이머는 폐흡충의 감염을 진단하는데 유용하게 사용될 수 있다.
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- 한국과학기술연구원
- 등록일
- 2000-11-22
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생명과학 > 기타 유전자 공학
현재 아래와 같은 사업을 하고 있으며, 기술개발은 DNA분석 blast,psiblast등데이타베이스을 구축하여 운영중입니다.PROGRAM : BLAST , PSIBLAST , PHIBLAST , entrez , GENOME : MICROBIOLOGY GENOME , HUMAN GENOME , EST ,STS , SNP GENOME ,mouse ,초파리 ,기생충 ,식물 등등(http://www.badasoft.com) mail:armarchi@badasoft.com##########################################독자적 게놈 데이타 베이스를 쓰는 이유 a.미생물이나 인간의 게놈 정보를 공개되지 않은 상태에서 genome 데이타베이스로 저장하고 blast search를 통해서 기능을 규명하고 독자적 특허나 knowhow를 획득 할 수 있다 b.국제적 표준에 맞는 데이타 베이스를 구축하여 여러가지 바이오인포메틱스 프로그램을 이용할 수 있다 . c. 생물체의 전체게놈을 독자적 서버에서 운영하며 더 강력하고 편리하게 기능을 규명할 수 있다 d. 대중이 사용하는 서버가 아니기 때문에 슈퍼컴퓨터 가 아닌 작은 용량의 서버 로도 genome database가 구축 가능하다 e. search option 을 확장하여 blast search 를 할 수 있다. f. More flexible and powerful options with standalone versionsg. No externally imposed limits on the number of searches or sizes of queryh. Built in batch capabilityi. Custom databasesj. Hardware requirements becoming easily achievableSERVER 사양 : LINUX , UNIX , NT PROGRAM : BLAST , PSIBLAST , PHIBLAST , entrez , GENOME : MICROBIOLOGY GENOME , HUMAN GENOME , EST ,STS , SNP GENOME ,mouse ,초파리 ,기생충 ,식물 등등#####################################1. Genome Database 및 서버 구축:Microbiology, Pharmacology, Botany, MedicalDB2. Bioinformatics CGI Program 제작:기술 - NCBI의 Blast, Entrez등의 프로그램등 연동3. Biotechnology Consulting:바이오인포매틱 정보기술을 이용하여 바이오테크 회사들과 제약회사들의 R&D진행(유전정보분석 시스템 개발 연구용역 및 공동개발)4.Genome function annotation5.Protein function prediction 및 Virtual drug design진행중입니다.(http://www.badasoft.com) mail:armarchi@badasoft.com신약개발에 필요한 여러가지 복합기술게놈에 관련 데이타베이스구축
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- 한국생명공학연구원
- 등록일
- 2001-02-08
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일반기술
생명과학 > 기타 유전자 공학
본 발명은 정자의 정상성을 정확히 검정하여 우수한 유전자원의 활용을 극대화시켜 가축개량 촉진에 의한 생산성 향상 및 정액생산비를 절감시킬 수 있는 정자정상성 검정 방법에 관한 것이다.동결된 소 정액을 융해시키고, 두 층의 액을 CO2 배양기에서 배양한 후 상등액만을 취하는 단계; 회수한 상등액을 약 10배 부피의 약 100 m Osmol/kg의 저장액(hypo-osmotic solution)과 혼합한 후 약1시간 동안 배양하는 단계 및 현미경을 이용하여 일정한 수의 총정자를 계수하고, 이 정자 중에 존재하는 정자 미부의 팽윤상태를 검사하는 단계를 포함하는 정자의 정상성 검정 방법.
- 등록일
- 2001-02-19
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일반기술
생명과학 > 기타 유전자 공학
본 발명은 유기태 인인 피테니트(myo-inositol hexakisphosphate)를 분해 시키는 피타제(phytase)를 대량으로 확보하는 수단을 제공하는 것으로, 유전자내에 Eco RI, Bam HI, Pst I, Hing Ⅲ, Acc I, Sal I의 6가지 제한효소의 인식부위를 가진 엔테로박터 sp. 4(Enterobacter sp. 4)의 피타제 유전자, 이를 pUC19에 결합시킨 발현벡터 pBP01 플라스미드 및 이를 함유한 형질 전환체의 제공에 관한 것이다.엔테로박터 sp. 4(enterobacter sp. 4)로부터 유래되며, 유전자내에Bam HI, Pst I, Eco RI, Hind III, Acc I 및 Sal I의 6가지 제한효소의 인식부위를 가짐을 특징으로 하는 피타제(phytase)유전자.
- 등록일
- 2001-02-19
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생명과학 > 기타 유전자 공학
벌꿀은 당이기 때문에 벌꿀 70%이상을 분말화 하는 것은 어렵다 그 문제점을 해결함으로써 새로운 식품 소재의 가능성벌꿀 분말시 이유식,감미료,다류 시장, 기타 기능성 식품 원료
- 등록일
- 2001-03-13
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생명과학 > 기타 유전자 공학
효모 사카로마이세스 세레비시에에서 재조합 인간 혈장알부민을 효율적으로 생산하기 위한 고효율 알부민 발현벡터 조립 및 이를 함유한 형질전환체의 배양 방법에 관한 것이다. 본 기술에서는 인체에 대해 병원성이 없고 내독소를 생산하지 않는 GRAS 미생물이며 현재 여러 효모 시스템 중에서 숙주-벡터 시스템이 가장 잘 확립되어 있는 효모 사카로마이세스 세레비시에를 숙주로 하여 분비 발현율이 우수한 재조합 알부민 발현 벡터를 개발하고 이로써 알부민 단백질을 높은 발현율로 생산할 수 있는 배양조건을 확립하고자 하였다. 이에 본 기술은 효모 사카로마이세스 세레비시에에서의 알부민 발현 벡터들을 제조하는 과정과 상기 발현 벡터를 함유한 효모 형질전환체의 선별, 이로부터 재조합 인간 혈장 알부민의 발현을 극대화하고 동시에 분비된 HSA의 분해를 최소화하여 고농도로 축적된 재조합 인간 혈장 알부민을 생산하는 공정으로 구성된다. 본 기술에 따르면 조립된 HSA 발현벡터로 형질전환된 효모균주를 완충용액이 첨가된 배지에서 배양하면 고효율로 발현분비된 재조합 HSA 단백질을, 분해되지 않은 완전한 형태로 배지에 축적된 상태로 얻을 수 있어, 의약산업상 매우 유용한 기술이 될 것이다인간 혈장알부민(HSA)은 585 개의 아미노산으로 이루어진 분자량 66.6 kDa 크기의 단백질이다. 혈장 단백질 함량의 약 60%를 차지하는 알부민은 혈장의 삼투압을 유지하는 역할과 더불어 지방산, 담즙 색소, 아미노산, 스테로이드 호르몬, 금속 이온들을 운반하는 역할을 한다. 알부민은 혈장 확장액의 대체용액으로 또는 출혈시 혈액보충액으로 사용되고 있어 의료학적으로 그 수요량이 크게 증가하고 있다. 현재까지 인간 혈장알부민은 혈액으로부터 분리 정제한 것을 주로 사용하고 있으나, 병원균이나 바이러스의 오염에 의한 안정성 문제가 최근 크게 대두되고 있어서 재조합 알부민의 대량생산이 절실히 필요하게 되었다. 본 기술은 효모 사카로마이세스 세레비시에 유래의 프로모터와 알부민 자체 또는 효모 유래의 분비 시그날을 포함한 알부민 cDNA를 포함한 알부민 발현벡터의 조립, 이를 함유한 형질 전환 효모의 선별, 완충액 또는 질소원의 첨가로 인해 배지 pH를 5-6으로 유지함으로써 형질전환체에서 발현분비된 알부민의 분해를 최소화시켜 인간 혈장알부민을 고효율로 배양 생산하는 방법으로써, 본 기술에 의해 재조합 알부민의 대량생산이 가능해 진
- 보유기관
- 특허법인충정
- 등록일
- 2001-05-18
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효모 한세눌라 폴리모르파에서 재조합 인간 혈청 알부민을 효율적으로 대량 생산하기 위한, 고효율 알부민 발현벡터 조립 및 이를 함유한 형질전환체의 제조 및 배양방법에 관한 것이다.본 기술에서는 메탄올 자화효모로서 높은 생산성 및 고농도 배양의 장점으로 인해 새로운 재조합 단백질 발현 시스템으로 각광을 받고 있는 효모 한세눌라 폴리모르파를 숙주로 하여 분비 발현율이 우수한 재조합 알부민 발현 벡터를 개발하고, 이 벡터들이 도입된 형질전환주의 선별 및 고효율 발현주의 선별을 통해 인간 혈청알부민을 제조하는 방법을 제공하자 하였다..따라서 본 기술은 메탄올 자화효모 한세눌라 폴리모르파를 숙주세포로 하여 인간 혈청 알부민을 발현시키는 데 적합한 발현벡터들을 조립하는 과정과 상기 발현벡터를 함유한 효모 형질전환체 선별, 이로부터 고효율 발현주를 선별하는 과정 및 고효율 발현주로부터 인간 혈청 알부민을 제조하는 방법으로 구성된다. 본 기술에 따르면 조립된 HSA 발현벡터로 형질전환시킨 고효율 생산 변이주에서 선별된 재조합 한세눌라 폴리모르파 변이주를 메탄올이 함유된 배지에서 배양시켜, 발현분비된 재조합 인간 혈청알부민을 대량으로 생산할 수 있으므로, 알부민의 수요가 급증하고 있는 의약산업상 매우 유용한 기술이 될 것이다인간 혈청알부민 (HSA)은 585개의 아미노산으로 이루어진 분자량 66.6 kDa 크기의 단백질이다. 혈장 단백질 함량의 약 60%를 차지하는 알부민은 혈장의 삼투압을 유지하는 역할과 더불어 지방산, 담즙 색소, 아미노산, 스테로이드 호르몬, 금속 이온들을 운반하는 역할을 한다. 알부민은 혈장확장액의 대체용액으로 또는 출혈시 혈액보충액으로 사용되고 있어 의료학적으로 그 수요량이 크게 증가하고 있다. 현재까지 인간 혈청알부민은 혈액으로부터 분리 정제한 것을 주로 사용하고 있으나, 병원균이나 바이러스의 오염에 의한 안정성 문제가 최근 크게 대두되고 있어서 재조합 알부민의 대량생산이 절실히 필요하게 되었다. 재조합 단백질 생산시 숙주 세포로서 효모 사카로마이세스 세레비시에가 갖는 단점들의 보완을 위하여 최근에 여러 효모 시스템이 대체숙주로서 개발되었다. 이들 중 효모 한세눌라 폴리모르파는 값 싼 원료물질인 메탄올을 에너지원과 탄소원으로 이용할 수 있어 경제성이 높고, 메탄올 대사에 관련되는 메탄올 옥시다제(MOX) 또는 알코올 옥시다제(AOX) 유전자의 프로모터와 같이 비교적 조절이 용이하면서도 매우 강력한 프로모터를 갖고 있어 산업적 응용 측면에서 응용성이 매우 높다. 또한 고농도 배양이 용이하고 형질 전환시 발현 목표유전자가 숙주의 염색체상으로 다수 도입되어 비선택 배지에서 도입된 발현벡터의 안정성이 뛰어난 장점이 있다. 본 기술은 효모 한세눌라 폴리모르파 DL-1 유래의 MOX 프로모터와 알부민 자체의 분비 시그날을 포함하는 알부민 cDNA를 이용하여 발현벡터를 조립하고, 이를 효모 한세눌라 폴리모르파에 도입하여 조립된 발현벡터가 염색체에 삽입된 형질 전환 효모를 선별, 발효 배양시켜 인간 혈청알부민을 고효율로 발현시켜 인간 혈청알부민을 대량 생산할 수 있는 방법이다
- 보유기관
- 특허법인충정
- 등록일
- 2001-05-18
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생명과학 > 기타 유전자 공학
129/sv종 생쥐의 포배아로부터 유래된 새로운 배아 간세포주인 H3 배아 간세포주 및 이를 이용하여 유전자이식 생쥐를 제조하는 방법으로서, H3 배아 간세포주는 교미후 3.5일된 129/sv종 생쥐 암컷의 자궁을 절취하여 이로부터 포배아를 회수하여 배양하여 확보한다. 즉, 호르몬으로 인공배란을 유도한 FVB/N 종 암컷으로부터 포배아를 수거하고, 이어서 H3 배아 간세포를 각 포배아의 배강내에 주입하며, 이렇게 처리된 포배아는 다시 교미후 2.5일된 가임신된 숙주 생쥐의 자궁내에 재이식하여 키메라 생쥐를 제조한다.따라서, 보다 우수한 혈통의 포배아에서 우수한 생식세포 분화 능력을 갖는 새로운 배아 간세포를 얻고, 이를 이용하여 보다 우수한 혈통의 유전자이식 생쥐를 제조할 수 있다.배아간세포는 생쥐의 포배아로부터 유래된 세포주로서, 정상적인 염색체 구성을 가지며 생쥐 발생과정 중의 모든 종류의 세포 형태로 분화할 수 있는 잠재 능력, 즉 전분화능(totipotency)을 갖는다는 특성 때문에 포유류 유전학 연구에 있어 중요한 의미를 지닌다. 새로운 배아 간세포주 H3는 간세포 형태를 나타내며 10회 이상의 계대배양에서도 핵형이 일정하게 유지된다. 또한, 기존의 배아간세포는 키메라 제조시 주로 C57BL/6J 혈통의 포배아내에서만 생식세포 분화가 효과적이라고 보고된 반면, 본 기술의 H3 배아간세포는 FVB/N 혈통의 포배 배아와 섞어주어도 우수한 생식세포 분화능력을 나타낸다는 특징이 있다.FVB/N 혈통은 C57BL/6J 혈통에 비해 번식 및 새끼관리 능력이 뛰어나 실험 재료의 손실을 줄일 수 있으며, 인공배란 유도가 C57BL/6J 혈통보다 기술적으로 용이하므로 마리당 4-5배 더 많은 포배아를 얻을 수 있을 뿐 아니라, 이렇게 인공적으로 얻어진 포배아는 배아간세포 숙주로서 질적으로도 우수하다. 게다가 FVB/N 혈통은 백변종으로 배아간세포의 털색 표현형인 쥐색과 쉽게 대비되기 때문에, 출산 직후 안구 색소의 유무로써 키메라 생쥐를 선별할 수 있다는 장점도 있다. 또한, H3 배아 간세포주는 키메라 제조에 있어 보다 우수한 혈통의 숙주 포배아내에서 생식세포 분화 능력이 뛰어나 유전자이식 기술에 유용하게 이용될 수 있으며, 종래의 방법에 비해 물자, 노력, 시간, 비용 등을 절감시킬 수 있어 기술적 경쟁력을 확보할 수 있다.
- 보유기관
- 포항공과대학교
- 등록일
- 2001-05-11
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생명과학 > 기타 유전자 공학
본 기술의 ARS 단편은 유채의 엽록체로부터 통상의 엽록체 DNA 분리방법에 따라 분리한다. 본 기술에 따라 제공되는 ARS 단편은 효모의 형질전환율을 증강시킴과 동시에 ARS 단편을 보유하며 기타 유용성 구조 유전자를 보유하는 벡터에 의해 형질전환시킨 식물 세포에 있어서, 그 유용 유전자의 발현을 안정화시키고 발현율을 증가시키는 역할을 한다. ARS를 보유하는 벡터는 통상의 방법에 따라, 적절한 선발 인자, 프로모터 서열 등과 함께 ARS를 결합시켜 제조할 수 있다. 본 기술에서는 대장균의 플라스미드로서 대장균의 복제 오리진, 선발 인자로서 암피실린 내성 유전자를 갖는 pUC19에 식물 세포에서의 선발 인자로서 하이드로마이신 유전자, 식물 미소기관에서의 발현을 위한 프로모터로서 PrbcLp(Rubisco 유전자의 큰 서브유니트) 및 PatpB(ATPase의 β-서브유니트)를 재조합시켜 세균 및 식물의 형질발현에 사용될 수 있는 벡터 pECTRHG 제작한다.본 기술은 식물체 형질 전환시 세포질내 형질전환을 위하여 사용할 수 있는 벡터를 제작하는데 사용할 수 있는 유전자 단편 및 이를 보유하는 식물의 세포질내 형질전환용 벡터에 관한 것이다.식물체내에 유용한 유전자를 도입시키기 위해서는 벡터(vector)가 사용되는데 이 벡터에 삽입된 유용 유전자들을 여러가지 형질전환 방법에 의해 식물 세포내로 들어가서 핵내로 삽입되어 재분화시켜 형질전환 식물체가 완성된다. 그러나 지금까지의 식물의 형질전환은 핵내 염색체에 대한 형질전환에 머무르고 있는 실정이다.따라서 본 기술의 목적은 ARS 단편과 엽록체의 프로머터 서열을 갖는 셔틀 벡터 pECTRHG를 제공하는 것이다.본 기술에 따른 ARS 단편은, 효모의 형질전환율을 증강시킴과 동시에 ARS 단편을 보유하며 기타 유용성 구조 유전자를 보유하는 벡터에 의해 형질전환시킨 식물 세포에 있어서, 그 유용 유전자의 발현을 안정화시키고 발현율을 증가시키는 역할을 한다.
- 보유기관
- 한국산업은행
- 등록일
- 2001-05-17
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PAL5 유전자 조절부위와 결합된 내병성 유전자에 의해 형질전환된 식물은 평소에는 내병성 유전자가 발현되지 않고 있다가 병원균이 침입할 때에만 내병성 유전자의 발현이 유도되는 특징을 갖게 된다. 따라서, 내병성 유전자의 무분별한 발현에 의해 식물이 파괴될 우려가 없이 안전하고 효율적으로 병원균에 대처할 수 있다.본 기술에 따른 토마토 유전자의 분리방법은 토마토 유전자의 은행 작성, PAL 유전자 탐색, 분리한 클론들의 분석 단계로 이루어진다.본 기술은 병원균이 침입하였을 때에만 발현하는 토마토의 페닐알라닌 암모니아 라이아제(Phenylalanine ammonia lyase)의 조절부위(promoter)에 관한 것이다.현재 유전자 재조합기술에 의한 내병성 작물과 같은 신작물을 개발함에 있어서 가장 어려운 것은 형질전환된 유전자가 항상 식물체에서 발현하는 것이 아니라 원하는 특정 시기에만 발현을 유도할 수 있게 하여 식물의 생체리듬의 파괴를 최소화하는 작업이다.따라서 본 기술의 목적은 병원균의 침입이 있는 경우에만 유전자의 발현을 유도하는 조절부위, 즉 프로모터를 제공하기 위한 것이다.본 기술에 의해 제공되는 PAL5 유전자의 조절부위는 통상의 유전자 재조합 기술을 이용하여 다른 내병성 유전자의 구조 유전자와 재조합시켜 식물의 형질 전환용 벡터에 연결하여 식물을 형질전환시키는데 이용할 수 있다.
- 보유기관
- 한국산업은행
- 등록일
- 2001-05-17
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본 기술의 쌀식초 제조방법은 1단 담금법에 의한 것으로, (1) 팽화미에 효모와 조효소제를 혼합하고, 구연산 및 젖산으로 산도를 22-25로 조정하고, 급수율을 180-250%로 조정하여, 25-30。C에서 120-144시간 동안 정치 발효시켜, 팽화미 주정을 제조한 후, (2) (1)에서 얻은 팽화미 주정을 초산 발효 원료로 하여 정치배양 또는 통기배양하는 단계로 구성되어 있다.본 기술에 따른 다른 쌀식초 제조방법은 2단 담금법에 의한 것으로, (1) 팽화미를 단독 또는 팽화현미와 팽화백미를 일정비율로 혼합한 후, (2) (1)에 발효제인 입국과 효모 및 물 150-250%을 가하고, 구연산 또는 젖산등을 첨가하여 산도를 20-22정도로 조절한 후, 1단 담금하여 24-28。C에서 30-48시간 동안 유지시킨 후, (3) 팽화미, 조효소제 및 물을 가하는 것을 본 사입으로 하여 25-30。C에서, 산도 10-12인 조건하에서 72-110시간 발효시켜 팽화미 주정을 제조한 후, (4) (3)에서 얻은 팽화미 주정을 초산 발효 원료로 하여 정치배양 또는 회분배양하는 단계로 구성되어 있다.종래의 쌀식초 제조 방법은 쌀을 세척하고 수침시 다량의 폐수가 발생하고, 더우기 현미를 원료로 하는 경우에는 수침시 현미의 제일 외곽층에 지질과 단백질이 많아 수분의 침투가 잘 되지 않기 때문에 장시간 수침을 해야 한다. 이때 기온이 높은 하절기에는 수침도중 세균이 증식하여 쌀이 부패하게 되고, 현미에 있는 단백질 및 지방이 변패되어 품질이 저하되며, 증자를 한 후에는 주정발효 중 주질이 떨어지고 알코올 발효의 수율도 낮아지는 등의 단점이 있다. 따라서 본 기술은 그 자체의 α 화율이 95% 이상으로 우수하고 조직이 다공질성으로 되어 있는 팽화미를 이용하므로써 수분 침투가 신속하며 또한 곡장의 효소작용이 잘 이루어져 오염의 염려없이 1단 사입만으로 술덧의 알코올 발효가 잘 진행되는 쌀식초의 제조방법을 제공한다.
- 보유기관
- 한국산업은행
- 등록일
- 2001-05-17
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결핍시 각기병 유발되는 비타민 B1인 티아민을 합성하는데 있어 중요한 효소인 유채 티아민 모노포스페이트 피로포스포릴레이즈(TMP-PPase) 유전자 및 그 분리방법에 관한 것이다본 기술의 목적은 티아민이 보강된 식물체를 개발하기 위해, 기존의 기능성 보상 방법을 변형하여 식물에 속하는 유채로부터 TMP-PPase 유전자를 분리하고, 그 분리방법을 제공하는 것이다. 본 기술은 유채 cDNA 라이브러리 플라스미드를 도입한 TMP-PPase 결손 대장균을 티아민이 결여된 액체 선택배지에서 배양한 후, 이 배양액을 동일한 액체 선택배지에 희석하여 배양하고, 다시 이 배양액을 아가로스 평판 선택배지위에 도말한 후 배양하여 콜로니를 얻고, 이 콜로니로부터 플라스미드를 얻은 다음 제한 효소로 절단하여 TMP-PPase cDNA 유전자를 분리하는 방법이다. 본 기술에 의하면, 상기 유채 TMP-PPase cDNA 유전자는 식물에서 최초로 확인된 것으로, 티아민이 보강된 식물체의 개발에 유용하게 사용될 수 있다. 또한 본 기술의 유전자 분리방법은 기존의 기능성 보상방법에서의 배양을 희석배양으로 변형함으로써 티아민과 같이 미량으로 기능하는 물질의 합성에 관련된 효소 유전자의 분리에 매우 유용하게 사용될 수 있다.티아민(비타민 B1)은 필수 영양소로, 세포 대사에 관여하는 다수 효소에서 조효소로 작용한다. 티아민은 보통 음식물을 통해 섭취되는데, 티아민이 보강된 식물체가 개발된다면 각기병의 예방 및 치료를 통해 인류의 건강증진에 기여할 것으로 기대되고 있다. 그러나 식물체내의 티아민은 극히 미량이어서, 연구의 어려움이 매우 크고 실제로 식물에서 티아민의 합성 및 조절 기작에 대하여도 거의 알려지지 않고 있으며 더 나아가 티아민 합성에 경로중에 가장 중요한 역할을 하는 효소인 TMP-PPase의 유전자에 대하여는 전혀 보고된 바가 없는 실정이다. 본 기술에 사용한 유전자 분리방법은 종래 잘 알려진 기능성 보상(functional complementation) 방법을 변형한 것으로, 종래의 방법에서는 기능성 유전자가 도입된 미생물로부터 회복된 기능에 관련된 물질의 일부가 세포외로 방출된 후 기능이 상실된 다른 미생물에 의해 다시 흡수되는 단점이 있어, 미량으로도 기능을 발휘하는 티아민 등의 합성에 관여하는 기능성 유전자에 이 방법이 직접 적용될 경우, 기능성 유전자가 도입된 미생물의 선별이 불가능해진다. 본 기술에서는 TMP-PPase cDNA 유전자가 도입된 대장균에서 이 유전자 산물에 의해 대장균 자신의 상실된 TMP-PPase 활성이 보상됨으로써 티아민이 합성되어 티아민이 없는 선택배지에서 생존할 수 있으며, 배양액을 다시 희석 배양함으로써 이 대장균으로부터 합성된 티아민의 일부가 세포밖으로 방출되더라도 인접한 대장균에 흡수되어 이용되는 문제점이 없다
- 보유기관
- 포항공과대학교
- 등록일
- 2001-05-20
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생체시계 및 개화시기 조절에 관여하는 애기장대(Arabidopsis thaliana)의 자이겐티아(GI) 유전자 및 이의 분리에 관한 것으로, 애기장대의 티아민 리콰어링 1 유전자(TH1)를 이용한 지도-기초 클로닝 방법에 의하여 분리함으로써, 서열 1의 염기서열을 포함하는 GI 유전자 및 이의 돌연변이체를 제공함으로써, 타생물체의 개화시기 조절 유전자를 탐색하는데 탐침으로 사용될 수 있고 생체시계 관련 형질의 개선에 유용하게 이용될 수 있다.애기장대의 GI 유전자는 식물에서 최초로 클로닝된 개화조절 및 생체시계 관련 유전자로서, 하이포코틸의 길이, 당대사 조절, 지베렐린이나 에틸렌등의 호르몬 생산, 일장 감응성 식물의 개화기 결정 등의 생체시계 관련 생리 생화학적 현상들의 개선에 대한 유전공학적 방법 적용시 유용하게 이용될 수 있으며, 특히 인위적인 개화시기 조절은 경제적 파급효과가 매우 크며 거의 모든 농작물에 직접 적용 될 수 있다는 점에서 그 이용범위 및 유용성이 무한하다.
- 보유기관
- 포항공과대학교
- 등록일
- 2001-06-05
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생명과학 > 기타 유전자 공학
본 기술은 재조합 동물 세포주를 이용한 환경 오염 물질의 탐지 방법에 관한 것이다. 현재까지 환경 오염 물질을 탐지하기 위한 바이오 센서로는 취급 등이 편리한 미생물이 주로 사용되었다. 그러나 바이오 센서로서 미생물은 인간과의 먼 연관 관계로 인해 인간에 대한 유해성을 평가하는 직접적인 기준이 되지 못하는 단점이 있었다. 특히 인체내에서 호르몬처럼 작용하는 환경 오염 물질인 환경 호르몬의 경우, 미생물 센서로는 적절하게 탐지되지 않는 실정이었다. 이에 본 기술은 동물세포주 KFC-A10 또는 EFC-500를 이용하여 환경 호르몬을 포함한 다양한 환경 오염 물질을 고감도로 탐지하는 방법을 제공한다 본 기술은 시료를 c-fos 프로모터와 녹색 형광 단백질 유전자의 융합 또는 CMV 프로모터와 녹색 형광 단백질 유전자의 융합 유전자를 포함하는 발현백터로 형질감염된 재조합 동물 세포주와 접촉시킨 후 상기 세포주의 형광을 측정하는 단계로 이루어져 있으며, 농도 의존적으로 녹색 형광 단백질을 발현하는 동물 세포주 KFC-A10 또는 농도 의존적으로 녹색 형광 단백질의 발현이 감소되는 동물 세포주 EFC-500을 사용함으로써 환경 오염 물질을 고감도로 탐지하므로, 환경 오염 물질의 유해성을 평가하는데 유용하게 사용될 수 있다.
- 보유기관
- 특허법인충정
- 등록일
- 2001-05-18
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