일반기술
생명과학 > 미생물자원
미생물을 배양한 후 생산된 고분자응집제와 무기물을 이용하여 중금속흡착제를 제조한다. <구성>주글레아 라미제라를 회분식 혹은 연속식으로 배양하여 생물고분자의 생산을 극대화시킨 후 무기물을 첨가하여 망상형의 중금속흡착제를 제조한다.1. 포도당 25g/L, 인산수소이칼륨 2g/L, 인산이수소칼륨 1g/L, 질산나트륨 0.5-1.0g/L, 황산마그네슘칠수화물 0.2g/L 및 이스트 추출물 0.01g/L로 이루어진 것이 특징인 주그뢰아 라미제라 115(Zoogloea ramigera 115, ATCC 25935)의 배양용 베지.2. 제1항에 있어서, 상기 배지가 황산제일철 0.1-0.4g/L를 더 함유하는 것이 특징인 배지.3. 포도당 25g/L, 인산수소이칼륨 2g/L, 인산이수소칼륨 1g/L, 질산나트륨 0.5-1.0g/L, 황산마그네슘칠수화물 0.2g/L, 이스트 추출물 0.01g/L 및 황산제일철 0.1-0.4g/L로 구성된 배지 중에서 배양시킨 주그뢰아 라미제라 115를 포도당, 유당, 당밀 및 치즈훼이 중에서 선택되고, C/N비가 30-120이 되도록 공급되는 탄소원, 인산수소이칼륨 2g/L, 인산이수소칼륨 1g/L, 질산나트륨 0.5-1.0g/L, 황산마그네슘 철수화물 0.2g/L 및 이스트 추출물 0.01g/L로 구성되는 발효 배지 중에서 pH 4-8 및 온도 24-32℃에서 발효시키는 것이 특징인 주그뢰아 라미제라 115의 회분식 발효 방법에 의한 생물 고분자의 생산 방법.4. 제3항에 있어서, 탄소원이 포도당이고, C/N비가 90인 것이 특징인 방법.5. 제3항에 있어서, 탄소원이 유당이고, C/N비가 30인 것이 특징인 방법.6. 제3항에 있어서, 탄소원이 당밀이고, C/N비가 60인 것이 특징인 방법.7. 제3항에 있어서, 탄소원이 치즈훼이이고, C/N비가 60인 것이 특징인 방법.8. 포도당 25g/L, 인산수소이칼륨 2g/L, 인산이수소칼륨 1g/L, 질산나트륨 0.5-1.0g/L, 황산마그네슘칠수화물 0.2g/L, 이스트 추출물 0.01g/L 및 황산제일철 0.1-0.4g/L로 이루어진 배지 중에서 주그뢰아 라미제라 115를 일정 시간 배양한 후, 당밀 11.35g/L, 질산나트륨 1.0g/L, 인산수소이칼륨1g/L, 인산이수소칼륨 0.5g/L, 황산마그네슘 철수화물 0.1g/L 및 이스트 추출물 0.01g/L로 구성된 제1발효 배지 중에서 회분식 발효 방법으로 1차 발효시키고, 이어서 질소원이 배제된 배지를 외부로부터 공급해주면서 2차 발효시키는 것이 특징인 주그뢰아 라미제라 115의 유가 배양식 발효 방법에 의한 생물 고분자의 생산 방법.9. 세표 성장용 발효조, 생물 고분자 생산용 발효조와 동일하게 당밀 11.35g/L, 질산나트륨 1.01g/L, 인산수소이칼륨 1g/L, 인산이수소칼륨 0.5g/L, 황산마그네슘 철수화물 0.1g/L로 이루어진 배지를 사용하여 일정시간 주그뢰아 라미제라 115를 배양시킨 후, 외부로부터 세포 성장용 발효조에는 당밀 45.5g/L, 질산나트륨 1.91g/L, 인산수소이칼륨 2g/L, 인산이수소칼륨 1g/L, 황산마그네슘 철수화물 0.2g/L의 조성을 갖는 배지를 공급해 주고, 생물 고분자 생산용 발효조에는 세포 성장용 발효조에 공급해 주는 배지 조성 중 질소원만을 제거한 공급액과 세포 성장용 발효조에서의 발효된 액을 희석속도 0.024/h 내지 0.168/h로 조절하면서 공급하여 발효시키는 것이 특징인 주그뢰아 라미제라 115의 2단계 연속 발효 방법에 의한 생물 고분자의 생산 방법.10. 제8항에 있어서, 상기 희석 속도가 0.048/h 내지 0.402/h인 것이 특징인 방법.
- 보유기관
- 한국과학기술연구원
- 등록일
- 2000-12-15
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일반기술
생명과학 > 미생물자원
본 발명은 감자 잎말림병에 이병된 감자잎을 마쇄하고, pH 7로 조절한 후 원심분리하고 상층액에 PEG와 염화나트륨을 가한 후 다시 원심분리하고 10-40% 슈크로스 밀도 원심분리를 하여 감자 잎말림 바이러스 항원을 정제한다. 이 항원에 자극된 BALB/C 마우스의 잎파구와 NS-1 종양세포를 PEG로 융합하여 감자 잎말림 바이러스에 대한 특이항체를 분비하는 융합세포주(IC7-F12)를 간접 ELISA법으로 선별하고 이 융합세포주의 배양액으로부터 염석법, 투석법, 음이온교환수지법 등을 이용하여 감자 잎말림 바이러스 진단용 단클론 항체를 제조한다.감자 잎말림병에 이병된 감자엽을 마쇄하고, pH 7.0으로 조절한 후 원심분리하고, 상층액에 PEG와 소듐 클로라이드를 가한 후 다시 원심분리를 2회 행하고, 10-40% 서당 밀도 원심분리를 행함을 특징으로 하는 감자 잎말림 바이러스 항원의 정제방법.
- 등록일
- 2001-02-19
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생명과학 > 미생물자원
본 발명은 농가에서 두과작물을 재배할 때 우수근류균을 효율적으로 이용함으로써, 다년간 질소질 화학비료의 사용량을 크게 줄일 수 있을 뿐만 아니라 작물 생산량을 획기적으로 향상시킬 수 있는 두과 작물 증수를 위한 근류균 접종제에 관한 것이다. 종래의 근류균 접종제는 아라비아껌이나 탄산껌 등의 점착 물질을 이용하였으나 이들은 사용전에 수용액으로 만들어야 하는 작업상의 불편이 따르고 많은 양의 근류균제를 사용해야 하는 단점이 있다. 따라서 생존 능력 및 질소 고정능력이 높은 근류균 접종제가 필요하다. 토양에서 분리한 라이조비움 메리로티 YCKA 500, 라이조비움 메리로티 YCKA 622, 라이조비움속 YCK 15 또는 라이조비움 자포니컴 YCK 213 균의 배양액중 1종 또는 2종 이상의 담체와 함께 혼합한 후 배양하여 얻은 배양물로 두과 작물 증수를 위한 근류균 접종제를 제조하였다. 점착물질로는 아라비아껌이나 탄산껌 대신에 땅콩기름, 대두기름, 광물기름을 사용하였다.토양에서 분리한 라이조비움 메리로티(Rhizobium meliloti) YCKa 500(KFCC-10725), 라이조비움 메리로티(Rhizobium meliloti) YCKa 622(KFCC-10726), 라이조비움 스페시스(Rhizobium spp.) YCK 15(KFCC-10727) 또는 라이조비움자포니컴(Rhizobium japonicum) YCK 213(KFCC-10728)균의 배양액중 1종 또는 2종 이상을 담체(Carrier)와 함께 혼합한 후 배양하여 얻은 배양물로 이루어짐을 특징으로 하는 두과작물 증수를 위한 근류균 접종제.
- 등록일
- 2001-02-19
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일반기술
생명과학 > 미생물자원
본 발명은 다년생 논잡초인 올방게를 방제하기 위한 미생물 제초제인 에피코코소라스속 균주 및 이 균주의 포자 대량 생산 방법과 이 균주를 이용한 올방개의 방제 방법을 제공한다. 수크로스 1.0%를 함유하는 오크밀 배지에서 26 내지 30도씨, pH 약 6.0에서 약 5일간 배양후 기증 균사를 제거하고 약 40W 형광등 조사 아래 45 내지 50시간 논잡초인 올방개에 대해 특이적인 강병원성을 나타내는 에피코코소라스(EPICOCCOSORUS) YCSJ-112(KFCC-10788)를 배양하여 분생 포자를 대량 생산하고, 이 균사체 또는 포자 현탁액을 묘령 20 내지 30일의 올방개에 분무하여 선택적으로 올방개를 방제한다. 본 발명의 균주는 올방개를 선택적이고, 지속적으로 방제하므로 타 작물에는 피해가 없으며, 지하수의 오염을 감소시키고 토양내 미생물상의 파괴없이 보존시킨다.수크로스 1.0%를 함유하는 오트밀 배지에서 온도 26∼30℃, pH 약 6.0의 조건에서 약 5일간 배양후 기증 균사를 제거하고 약 40W 형광등 조사아래 45∼50시간동안 에피코코소라스(Epicoccosorus) YCSJ-112(KFCC-10788)를 배양함을 특징으로 하는 균주의 분생포자를 대량 생산하는 방법.
- 등록일
- 2001-02-19
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일반기술
생명과학 > 미생물자원
본 기술은 L-로이신, L-시스테인 요구성을 갖고 동시에 설파구아니딘 내성을 가지며 알라닌에 의해 생육이 촉진되는 미생물을 이용한 발효법에 의한 L-글루타민 제조방법에 관한 것이다.L-글루타민은 아미노산의 일종으로써 영양제 및 소화기 궤양 치료제, 알콜중독 치료제, 뇌기능 개선제 등의 약용은 물론 최근에는 화장품의 기초원료로서 각광을 받고있는 물질이다.지금까지 발효법에 의한 L-글루타민 제조방법은 상당수 공지되어 있는데, 본 기술의 목적은 종래보다 L-글루타민의 생산능력이 뛰어난 미생물을 선별하는 것이다.본 기술에서는 생육에 로이신을 요구하고 L-알라닌에 의해 생육이 촉진되는 코리네박테리움 MWM-791012를 친주로 변이 처리하여 설파구아니딘 내성 및 L-시스테인 요구성이 부가된 코리네박테리움 MWM-891020 가 친주에 비해 L-글루타민 생성능이 우수한 것을 밝혀내었다.본 기술에 있어서 새로운 균주의 분리방법은 코리네박테리움 MWM-79l012를 통상의 변이처리, 즉 자외선 조사나 화학변이 유기제인 NTG(N-메틸-N-메틸-N-니트로소구아니딘), DES(디에틸설페이트)를 처리하고 최소 한천 평판배지에서 1차 변이주(MWM-890821)인 설파구아니딘 내성균주를 분리하였다. 이와 같은 방법으로 선별 분리한 본 기술의 1차 변이주인 설파구아니딘 내성주 MWM-890821은 친주인 MWM-791012에 비해 강한 설파구아니딘 내성을 보였다.선별된 1차 변이주를 친주로 다시 자외선 조사나 NTG 등의 화학변이 유기제를 처리하고 통상의 아미노산 요구성 균주의 분리방법에 따라 2차 변이주인 L-시스테인요구성 균주, 코리네박테리움 MWM-891020을 분리하였다. 2차 변이주인 MWM.-891020의 균화적 성질은 변이처리전 친주인 MWM-791012와 비교해본 결과 설파구아니딘 내성 및 L-시스테인 요구성만이 명확한 차이를 나타냄을 알 수 있다.또한 2차 변이주인 MWM-891020과 친주인 MWM-791012의 L-시스테인첨가농도별 생육도 및 L-글루타민 생성량을 비교분석 해본 결과는 L-시스테인이 첨가된 경우 신균주는 친주에 비해 생육은 약간 저조하였으나 L-글루타민의 축적량이 크게 향상 된 것으로 나타났다
- 보유기관
- 특허법인충정
- 등록일
- 2001-04-07
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일반기술
생명과학 > 미생물자원
본 기술은 발효법에 의해 L-글루타민을 제조함에 있어 생육에 L-시스틴을 필요로 하는 L-시스틴 요구성 균주인 코리네박테리움 MMM-891129를 당질을 주원료로 하는 영양 배지에 호기적으로 배양하는 방법에 의해 L-글루타민을 제조하는 방법에 관한 것이다.L-글루타민은 아미노산의 일종으로써 영양제 및 소화기 궤양 치료제, 알콜중독치료제, 뇌기능개선제 등의 약용은 물론 최근에는 화장품의 보습을 위한 원료로서 각광을 받고있는 물질이다.지금까지 발효법에 의한 L-글루타민 제조방법은 상당수 공지되어 있는데, 본 기술의 목적은 종래보다 L-글루타민의 생산능력이 뛰어난 미생물을 선별하는 것이다.즉, 본 기술에서는 토양에서 분리한 코리네박테리움의 균주를 자외선 및 NTG(N-메틸-N-메틸-N-니트로소구아니딘) 처리에 의하여 획득한 변이주중에서 최소배지에서 생육이 불가능한 균주의 아미노산 영양 요구성을 조사한 결과, L-시스틴의 첨가에 의하여 생육이 가능한 변이균주를 당을 주원료로 한 호기적으로 배양할 수 있었으며, 이 발효법에 의해 다량의 L-글루타민의 생산이 가능해진 것이본 기술에 이용한 신균주의 분리방법은 토양에서 분리한 L-글루타민산을 생산하는 코리네박테리움속의 균주 NO 462를 친주로 하여 통상의 변이처리, 즉 자외선 조사나 화학변이 유기제인 NTG (N-메틸-N-메틸-N-니트로소구아니딘), DES(디에틸설페이트)를 처리하여 일정농도 이상의 L-시스틴을 첨가한 배지에 배양한 후 이를 분석 L-시스틴에 요구성을 갖는 균주가 친주균인 코리네박테리움 NO 462보다 다량의 L-글루타민을 배양액내에 축적시키는 것으로 나타나 본 균주를 분리 이용하였다.본 기술에서 이용한 균주 MMM-891129에서 L-시스틴이 L-글루타민의 생합성을 촉진시키는 대사작용 기작은 정확히 알 수 없으나 L-시스틴 생합성되는 대사과정이 없어지므로 L-글루타민의 축적이 다소 향상될 것으로 예상된다
- 보유기관
- 특허법인충정
- 등록일
- 2001-04-07
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일반기술
생명과학 > 미생물자원
본 기술은 미생물발효에 의해 L-로이신을 생산할 때, 대수 증식기가 친주에 비하여 현저하게 길어지는 변이균주를 이용하여 L-로이신의 생산수율을 향상시키는 방법에 관한 것이다.L-로이신은 필수 아미노산으로서 의약품, 식품첨가제 등으로 이용되고 있으며, 최근에는 액정 또는 폐유분해제의 원료 및 첨가제로도 각광을 받고 있는 물질이다.본 기술의 목적은 미생물 발효에 의한 L-로이신 생산에 있어서, L-로이신을 배양액내에 현저하게 축적시킬 수 있는 새로운 미생물을 선별하는 것이다.본 기술에서는 종래 대부분의 미생물발효법에 의한 L-로이신 생산은 발효전기에 일정 농도의 균체를 확보하고 일반적인 균체 증식곡선에 따라 1싸이클의 배양을 하게 되나 본 기술은 대수증식기를 지속시켜 균체 분열 및 체적증가를 직선화시킨 균체증식이 직선적으로 나타나는 균주를 이용하는 혁신적인 방법을 도입하였다.본 기술에 의하면, 미생물발효에 의해 L-로이신을 생산할 때, 생산배지에 균을 접종시킨 이후 10시간 이후부터 발효 종료시까지 균의 비증식 속도가 일정하게 생육을 유지하는 균을 분리 이용함으로써 생산성을 현저하게 향상시킬 수 있다본 기술은 미생물에 의한 L-로이신을 생산함에 있어서 비증식속도 및 비생산속도가 가장 활발한 대수증식기가 친주보다 길어지는 균주인 코리네박테리움속 동아 MS-03301을 당질을 주원료로 하는 영양배지에 호기적으로 배양함으로써 L-로이신의 생산축적을 현저히 증가시킬 수 있는, 미생물에 의한 L-로이신의 제조방법에 관한 것이다.즉, L-로이신 생산균주 코리네박테리움속 동아 MS-03178 균주와 이의 변이주 등을 이용하여 L-로이신을 생산할 때 균이 생산을 위해서 최대능력 즉, 비생산속도가 최대인 대수증식기가 친주에 비해 연장되는 균주나 방법을 이용할 경우 L-로이신의 배양액내 축적을 최대화 할 수 있다는 것에 착안하여 균의 증식을 종균접종 10시간 이후부터 종료시까지 비증식속도 3.5-5.5 g/L/H로 일정하게 유지하는 균주 코리네박테움속 동아 MS-03301을 분리 이용함으로써 종래의 방법에 의한 L-로이신의 생산을 현저하게 높일 수 있다
- 보유기관
- 특허법인충정
- 등록일
- 2001-04-07
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일반기술
생명과학 > 미생물자원
본 기술은 퇴비로부터 분리한 말토테트라오즈 생산 아밀라제 효소를 생산하는 새로운 균주인 스트렙토마이세스속 KFCC-10846을 분리하고 전분류를 주원료로 하는 배지에서 호기적으로 배양하여 말토테트라오즈생산 아밀라제를 제조하는 방법에 관한 것이다.본 기술의 목적은 상기 종래의 균주외에 말토테라오즈를 주생산물로 생산하며 공업화에 적합한 아밀라제 생성 균주를 분리하여 공업화에 적용시키기 위한 것이다.본 기술에서 밝혀진 새로운 미생물 스트렙토마이세스속 KSM35 (KFCC-10846)이 생산하는 말토테트라오즈 생산성 아밀라제는 액화시킨 전분에 일정한 조건에서 작용하여 말토테트라오즈를 주생산물로 생산하며 그 외 말토트리오즈 및 말토즈를 생산하며, 탄소원으로 다른 G4-아밀라제 생산 미생물이 용성전분을 주로 이용하는 것에 비해 용성전분뿐만 아니라 가격이 저렴하고 구입이 용이한 양성전분 및 산화전분을 이용할 수 있으며 이들을 주탄소원으로 이용할 때 효소역가가 크게 증가하는 특성이 있어 공업화에 매우 유용한 방법이다말토테트라오즈 생산 아밀라제(G4-아밀라제)는 말토올리고당의 주성분인 말토테트라오즈를 생산하는데, 말토올리고당은 식품 첨가물로써 주로 사용되어 식품의 점도와 보습성을 증가시키며 빙점강하 혹은 삼투압같은 물리적 성질의 조절뿐만 아니라 감미의 조절이나 갈변의 방지 등에 효과가 있으며 정제된 상태로는 혈청 아밀라제의 분석용 기질로도 이용되고 있다.본 기술의 목적에 따라 분리한 미생물은 G4-아밀라제를 생산하는 것으로는 특이하게 방선균의 일종인 스트렙토마이세스속의 균주로 경기도 북부지역의 퇴비에서 분리 동정하였다. 분리한 균주들에서 선별한 KSM-35를 배양하여 광학현미경으로 관찰한 결과 균사를 형성하여 포자의 사슬이 길게 나타났으며, 부분적으로 나선형사슬이 뚜렷하고 한 포자사슬은 대체로 12-15개의 포자로 이루어져 있는 것으로 확인되었다. 또한, 이 미생물이 지나는 전균체 성분의 디아미노피멜릭산의 종류를 알아보기 위하여 균체를 산가수분해하여 TLC로 분석한 결과 LL-DAP(Rf : 0.3)와 글리신(Rf : 0.47)이 검출되었으며, 그밖에도 알라닌(Rf : 0.67), 글루타민산(Rf : 0.58)등이 검출되었다. 특별한 당의 검출은 나타나지 않았다.이러한 결과들은 이 균주가 레체발리에와 레체발리에에 의한 분류법에 따라 스트렙토마이세스속으로 분류됨을 나타낸다. 나아가 형태학적, 배양학적, 생리학적 특성을 비교 검토한 결과 종은 알부스(albus)의 근연종으로 동정되었으나 추가적인 연구가 요구된다
- 보유기관
- 특허법인충정
- 등록일
- 2001-04-17
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일반기술
생명과학 > 미생물자원
본 기술은 미생물의 발효에 의한 L-쓰레오닌의 제조방법에 관한 것으로, L-시스테인을 요구하고, 동시에S-2-아미노에틸-L-시스테인과 마크로락탐계 항생물질인 리팜피신에 대한 내성을 가지는 변이주를 분리하여 슈크로스 등의 당류를 탄소원으로 이용, 호기적으로 배양하여 L-쓰레오닌을 제조하는 방법에 관한 것이다.본 기술의 목적은 발효에 의한 L-쓰레오닌의 제조에 있어서 보다 높은 수율로 L-쓰레오닌을 생산하는 방법을 모색하기 위한 것이다.본 기술에서 이용한 균주는 L-쓰레오닌 생산에 이용되고 있는 L-시스테인 요구주이며, 그 분리 방법은 S-2-아미노에틸-L-시스테인에 내성을 가지는 세라티아속 SW9410을 친주로 하여 통상의 변이처리방법에 의해 얻은 변이주중 L-시스테인에 대한 요구성과 S-2-아미노에틸-L-시스테인과 리팜피신에 대한 내성을 동시에 가지는 변이주 SW9506을 유도하였다.본 기술에 의해 분리된 균주를 이용하여 동일 조건에서 배양할 때, 친주에 비하여 다량의 L-쓰레오닌을 배양액내에 축적된다는 것을 알 수 있었다본 기술상의 균주분리 방법을 자세히 설명하면 다음과 같다.본 기술의 친주인 세리티아속 SW9410 균주를 통상적인 변이처리 방법 즉 자외선 조사나 화학변이 유기제인 NTG(N-메틸-N-니트로-N-니트로소구아니딘), DES(디에틸설페이트)로 처리하여 리팜피신이 50㎍/㎖첨가되어 있는 완전한 평판배지에 도말하고 30℃에서 2~3일간 배양하였다. 그리고, 이 평판배지상에서 생육하는 콜로니들을 분리하여 S-2-아미노에틸-L-시스테인, L-시스테인을 첨가한 배지와 첨가하지 않은 2 종류의 최소한 천평판배지에 각각 레플리카하여 친주의 균주 특성 변화를 확인하였다.이와 같은 방법으로 리팜피신과 S-2-아미노에틸-L-시스테인에 내성을 가진 동시에 L-시스테인 요구성을 가진 변이주중 특성이 명확한 신균주 SW9506을 분리하였으며, 이 새로운 균주는 배양액내에 많은 L-쓰레오닌을 축적시키는 것을 특징으로 한다
- 보유기관
- 특허법인충정
- 등록일
- 2001-04-07
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일반기술
생명과학 > 미생물자원
본 기술은 미생물의 발효에 의한 L-쓰레오닌의 제조방법에 관한 것으로서, L-시스테인을 요구하고 동시에 S-2-아미노에틸-L-시스테인과 아스파라긴 산의 대사길항물질인 DL-아스파라긴산 하이드록사메이트에 대한 내성을 가지는 변이주를 분리하고 슈크로스 등의 당류를 탄소원으로 이용, 호기적으로 배양하여 L-쓰레오닌을 제조하는 방법에 관한 것이다.본 기술의 목적은 발효에 의한 L-쓰레오닌의 제조에 있어서, 종래의 방법보다 높은 수율로 L-쓰레오닌을 생산할 수 있는 방법을 모색하기 위한 것이다.본 기술에서 이용한 균주는 L-쓰레오닌 생산에 이용되고 있는 L-시스테인 요구주이며, 그 분리 방법은 S-2-아미노에틸-L-시스테인에 내성을 가지는 세라티아속 SW9410을 친주로 하여 통상의 변이처리 방법에 의해 얻은 변이주중 L-시스테인에 대한 요구성과 S-2-아미노에틸-L-시스테인와 DL-아스파라긴산 하이드록사메이트에 대한 내성을 동시에 가지는 변이주 SW9511을 유도하였다.본 기술에 의해 분리된 균주를 이용하여 동일 조건에서 배양할 때, 친주에 비하여 다량의 L-쓰레오닌을 배양액내에 축적된다는 것을 알 수 있었다L-쓰레오닌은 필수아미노산의 일종으로서 쌀의 제 2 제한 아미노산이다. 지금까지 알려진 바로는 아미노산 수액제제, 종합아미노산제제의 의약용도와 식품의 영양 강화제나 건강음료 등의 식품용도를 사용되고 있다. 최근에는 L-라이신과 함께 사료첨가제로도 수요가 급증하고 있는 아미노산이다. 본 기술에서는 DL-아스파라긴산 하이드록사메이트와 S-2-아미노에틸-L-시스테인에 내성을 가진 동시에 L-시스테인 요구성을 가진 변이주중 특성이 명확한 신균주 SW9511을 분리하였으며, 이 새로운 균주는 배양액 내에 많은 L-쓰레오닌을 축적시키는 것을 특징으로 한다.본 기술에서는 신균주가 친주에 비하여 현저하게 L-쓰레오닌을 배양액내에 축적시키는 원인에 대하여는 확실하게 밝혀지지 않았으나, 본 기술에서 DL-아스파라긴산 하이드록사메이트에 대한 내성주를 유도하여 피드백 조절이 제거된 돌연변이주를 유도한 결과 L-쓰레오닌의 축적량이 증가되었다고 판단된다
- 보유기관
- 특허법인충정
- 등록일
- 2001-04-07
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일반기술
생명과학 > 미생물자원
본 기술은 아밀라제 생산 유전자 재조합균주 및 이를 이용한 말토올리고당 생산 아밀라제의 제조방법에 관한 것으로서, 스트렙토마이세스의 말토테트라오즈를 생산하는 아밀라제 발현 유전자를 바실러스에 옮겨 아밀라제를 제조하는 방법에 관한 것이다.말토올리고당은 보습성 강화, 점도의 증가, 빙점 강하, 결정 형성방지와 같은 식품의 물리적 성질을 개선할 수 있으며 특히 지나친 감미나 갈변과 같은 변화가 없는 특징 때문에 식품 첨가물로서 가치가 있다. 아밀라아제를 생산하는 균주로는 스트렙토마이세스 KSM-35가 있으나 이 균주는 효소의 생산능이 낮을 뿐만 아니라 원하지 않는 물질의 생산 가능성 때문에 사용에 어려움이 있었다.따라서, 본 기술의 목적은 말토올리고당생산 아밀라제 효소를 고수율로 생산하며 부산물을 생산하지 않는 균주를 개발하기 위한 것이다.본 기술에서는 유전자 재조합 방법에 의하여 아밀라제 생산능력이 크게 향상된 형질전환체 바실러스 섭틸리스 KFCC-10880 균주를 생산하였는데, 이 형질 전환주에 의해서 생산되는 아밀라제는 모균주보다 20배 이상, 대장균 pSJ1 형질 전환주보다도 10배 이상 생산성을 향상시켰다본 기술은 말토테트라오즈 생산 아밀라제를 생산하는 균주 스트렙토마이세스속 KSM-35균주에서 아밀라제 유전자를 클로닝하여 플라스미드를 만든 후 제한효소를 이용하여 발현과 분비에 관계된 유전자 서열이 결실된 플라스미드를 다시 제조하고, 바실러스 섭틸리스에서의 발현 및 분비능력이 강한 플라스미드와 재조합하여 아밀라제 유전자를 포함하면서 동시에 아밀라제의 분비능력이 강한 새로운 플라스미드를 만들어 숙주세포인 바실러스 섭틸리스 LKS88에 주입하여 아밀라제 생산능력이 크게 향상된 형질전환체 바실러스 섭틸리스 KFCC-10880 균주와 이 형질전환체를 사용하여 발효에 의해 아밀라제를 생산하는 방법에 관한 것으로 아밀라제를 고수율로 수득할 수 있는 유용한 방법이다
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- 특허법인충정
- 등록일
- 2001-04-07
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일반기술
생명과학 > 미생물자원
본 기술은 발효에 의한 L-글루타민의 제조방법에 관한 것으로서, 배지중에 이노시톨 또는 피틴산을 첨가하여 다량의 L-글루타민을 배양액내에 축적시킨 후 분리, 정제함을 특징으로 하는 발효에 의한 L-글루타민의 제조방법에 관한 것이다.L-글루타민은 아미노산의 일종으로 영양제, 소화기궤양치료제, 알콜중독치료제, 뇌기능향상제 등 의약품원료로 각광받고 있는 물질이며, 최근에는 세포 재생능력에 특별한 효과가 있는 것으로 밝혀져 화장품의 원료로서도 그 수요가 증가되고 있는 물질이다.본 기술의 목적은 미생물을 이용한 발효법에 의해 L-글루타민을 제조함에 있어서, 배지중에 천연의 유기질소원 대신 이노시톨 또는 피틴산을 첨가하여 배양함으로써 기존의 방법에 비해 생산성의 향상 및 공정상의 문제점을 해결한 새로운 L-글루타민의 제조방법을 제공함에 있다.본 기술은, 일정농도의 피틴산과 이노시톨을 배지에 첨가함으로써 균의 생육이나 L-글루타민 축적이 일정한 재현성이 있었으며, 균의 생육과 발효시간을 일정하게 유지 관리할 수 있었을 뿐만 아니라 천연의 영양물질내에 존재하는 불순물에 의한 오염 등의 영향도 줄일 수 있다.지금까지 발효법에 의한 L-글루타민의 제조방법은 많이 알려져 있는데, 종래의 발효법들은 배양액내로의 분비능 저하, 균생육의 지연, 품질의 불균일성, 잡균의 오염 등으로 상업적 생산규모에서 생산성을 낮추는 원인이 되어 제조원가를 상승시키는 문제점이 있었다.본 기술에서는 천연의 물질 첨가에 의한 공정의 안정화를 구축할 목적으로, 배지로 사용하던 천연 유기영양원내에 함유된 생산성 향상의 역할을 하는 미지의 물질이 비타민류의 일종인 피틴산과 이의 관련물질인 이노시톨임을 밝혀내었으며, 배지로 사용하던 천연 유기영양원인 옥수수 침지액과 육즙을 피틴산이나 비타민의 일종인 이노시톨로 대체함으로써 발효공정의 안정화뿐만 아니라, L-글루타민을 배지내에 다량 축적시키며 옥수수침지액과 육즙속에 존재하는 불순물을 제거할 수 있어 분리정제공정의 안정화와 폐수 발생량의 현저한 감소를 이룰 수 있었다.이러한 본 기술의 피틴산과 이노시톨의 첨가가 균의 생리적인 대사작용에 미치는 영향에 대해서 알 수는 없으나, 포스포티딜 이노시톨 4,-5-비스포스파테이트가 세포벽의 포스포리피드의 중요한 구성인자 역할을 하고 있기 때문에 균체내에서 생합성된 L-글루타민이 균체 외부로의 막투과성을 향상시켜줌으로써 생산성에 기여할 수 있다고 판단되어 진다
- 보유기관
- 특허법인충정
- 등록일
- 2001-04-07
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일반기술
생명과학 > 미생물자원
본 기술은 발효법에 의해 L-글루타민을 제조함에 있어서, 균체의 생육도를 조절하면서 L-글루타민의 균체외 분비능을 증가시키고, 다량의 L-글루타민을 배양액내에 축적시키는 발효에 의한 L-글루타민의 새로운 제조방법에 관한 것이다.L-글루타민은 L-글루타민산 계열 아미노산의 일종으로, 최근 들어 세포재생능력에 효과가 있는 것으로 확인되면서 화장품원료로 수요가 늘고 있으며 노화방지에 대한 연구도 계속되고 있다. 그밖에도 L-글루타민은 영양제, 소화기궤양 치료제, 알콜중독 치료제, 뇌기능 향상제 등 의약용으로 꾸준히 이용되어 오고 있다. 본 기술에서는 L-글루타민을 배양액내에 다량 축적시키는 코리네박테리움 글루타미쿰 (KFCC-10694) 균주를 이용하여 발효법에 의해 L-글루타민을 제조함에 있어서, 배지중의 인산농도를 조절하여 균체의 생육도를 조절하면서 L-글루타민의 균체외 분비능을 증가시키고, 베타인을 배지에 첨가하여 인산농도의 저하로 인해 균체가 받는 삼투압작용에 저항력을 갖게 하여 균체가 다량의 L-글루타민을 배양액에 축적될 수 있도록 하였다본 기술에서는 글루타민 생산성을 향상시키기 위해 인지질의 구성 초기물질이 배지에 첨가되는 인산이라는 점에 착안하여 인산의 초기 첨가농도를 조절함으로써, 균체내에서 생합성된 인지질의 세포막 형성을 줄여주고 세포막 형성 부족으로 나타나는 내삼투압의 저하영향을 보완해주기 위한 삼투압 내성제를 배지에 첨가함으로써 목적생산물인 L-글루타민의 체외 분비능을 향상시킬 수 있는 방법을 알아내었다.즉, 인산농도의 절대량이 부족하면 세포막의 구성성분인 인지질의 생합성이 저해되고 이에 따라 균의 삼투압저항 능력이 상실되나, 세포막 구성에는 영향이 없으면서 삼투압 내성을 갖게 하는 물질로 베타인을 선정하여 이를 인산농도가 감소한 배지에 일정량 첨가하여 배양한 결과, L-글루타민의 생산량이 상당히 증가됨을 알 수 있었다
- 보유기관
- 특허법인충정
- 등록일
- 2001-06-20
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생명과학 > 미생물자원
본 기술은 브레비 박테리움 암모니아 게네스의 특수한 변이주에 의해서 탄소원 및 질소원, 기타 미생물에 유용한 유기 및 무기영양원을 함유하는 배지에서 호기적인 배양을 하여 5-크산틸산을 공업적으로 제조하는 방법에 관한 것이다.본 기술의 목적은 5-크산틸산의 생산능이 우수한 균주를 검색하는 것이며, 이미 브레비박테리움 암모니아게네스의 특수한 변이주 MW-4768-8이 개발된 바 있는데, MW-4768-8주는 발효진행중 복귀변이주가 발생한다는 것이 발견되어, 복귀변이주가 발생하지 않는 유전적으로 안정된 균주의 개발에 의해서 생산성을 더욱 향상시키고자 하였다.본 기술에서의 변이주 브레비박테리움 암모니아게네스 MW-4768-2471주가 친주 및 종래의 여러 변이주와 특별히 다른 생리학적 특성은 아데닌 생육촉진, 구아닌 요구성, 라이소자임 감수성, 슬파구아니딘 내성을 가지고 있다는 점, 장시간의 액체배양에 의해서도 복귀 변이주가 전혀 발생하지 않는 유전적으로 안정된 균주로서 5-크산틸산의 생산성이 대단히 높다는 점으로 요약될 수 있다5-크산틸산은 핵산 생합성 대사과정의 중간물질로 정미성을 가지고 있으며, 특히 핵산조미료로 많이 사용되는 5-구아닐산의 제조에 전구물질로 사용된다. 종래 5-크산틸산의 미생물에 의한 제조 방법은 대부분의 미생물 변이주들이 5-크산틸산이외의 핵산물질 5-이노신산, 히포크산틴, 구아노신, 크산틴, 크산토신 등을 다량 부생시키거나 생산능이 낮았다. 본 기술의 특수한 변이주 MW-4768-2471을 효과적으로 분리한 변이처리 및 선별방법은 다음과 같다. MW-4768-871주를 30℃, 12시간 배양한 균체를 인산 완충액에 잘 현탁시킨 후 자외선 등으로 조사하고, 배지에 30℃에서 7일간 배양한다. 생육한 균집락을 취하여 각각 배지에 식균한 후 30℃에서 5일간 진탕 배양후 흡광도 조사에 의해서 생육도를 조사한다. 이중 생육이 가장 적은 균주만을 선발하여 다시 슬파구아니딘 내성 및 변이복귀 발생여부를 조사한 후 생산능 시험에 의해서 생산능이 가장 우수한 본 기술의 변이주 MW-4768-2471이 최종 분리되었다.배양 종료후 이미 알려진 이온교환 수지처리 혹은 활성 탄소에 흡착, 용리하므로 배약액에서 5-크산틸산을 회수할 수 있다
- 보유기관
- 특허법인충정
- 등록일
- 2001-04-07
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일반기술
생명과학 > 미생물자원
본 기술은 에쉐리시아콜리(Escherichia coli)의 특수한 변이주를 탄소원, 질소원, 기타 미생물에 유용한 유기 및 영양원을 배지에서 호기적인 배양을 하여 L-페닐알라닌을 배지중에 고농도로 축적시키는 L-페닐알라닌의 공업적 제조방법에 관한 것이다.L-페닐알라닌은 필수아미노산의 일종으로 의약품원료, 혹은 저칼로리 감미료인 아스파탐의 합성원료로 사용되는 물질이다. L-페닐알라닌은 미생물의 생합성 경로가 복잡하고, 구조식중 방향족환을 가지고 있어 생성수율은 일반적으로 대단히 낮다. 또한 배지중에 고가의 L-타이로신 등을 첨가하여 주거나 생육이 불량하여 발효가 지연되는 등 많은 단점이 있었다.따라서, 본 기술의 목적은 종래의 이러한 단점을 해결하여, L-페닐알라닌의 생산성이 우수한 균주를 제공하는 것이다.본 기술에서는 에쉐리시아 콜리 K-12주로부터 변이된 L-타이로신, L-트립토판 동시 요구성 및 L-페닐알라닌 아날로그 물질에 대한 내성 변이주, MWEC-101주를 모주로 하여 L-페닐알라닌 생산성이 향상된 특별한 생리적 성질을 가지는 균주를 개발하였다본 기술에서는 본원균주의 모주 MWEC-101주가 생육에 L-타이로신 및 L-트립토판을 필요로 하여 생산배지에 고가의 이들 물질을 다량 첨가하여 주어야 하는 점, 생육이 불량하여 장시간의 발효시간이 필요한 점, 발효액중에 생산된 L-페닐알라닌에 의해 생육이 저해되어 생산성이 낮아지는 점 등의 결점을 해결하기 위하여 모주 MWEO-101주를 여러 단계의 변이 처리를 하여 생육에 L-타이로신 및 L-트립토판을 요구하지 않는 영양요구성 복귀 변이주를 만든 후 L-페닐알라닌, L-타이로신, L-트립토판 아날로그 물질에 대한 내성을 한층 강화시킨 균주중에서 L-페닐알라닌 생산성이 우수한 균주를 선별하였다.본 기술의 균주 에쉐리시아 콜리 MWEC 101-5주가 나타내는 종래의 L-페닐알라닌 생산균주와 다른 특이한 생리적 성질은 생육에 L-타이로신 및 L-트립토판을 요구하지 않는 영양 요구성 복귀 변이주인 점, 기초배지중에 첨가된 L-바린에 의해서 생육이 저해되는 L-바린 감수성인 점, L-쓰레오닌 및 L-메티오닌에 의해서 생육이 촉진되는 점, L-페닐알라닌, L-타이로신, L-트립토판의 아날로그 물질들에 대한 고농도의 내성을 가지고 있는 점으로 요약될 수 있다
- 보유기관
- 특허법인충정
- 등록일
- 2001-04-07
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일반기술
생명과학 > 미생물자원
본 기술은 에쉐리시아 콜리(Escherichia coli)의 특수한 변이주를 탄소원, 질소원, 기타 미생물에 유용한 유기 및 영양원을 배지에서 호기적인 배양을 하여 L-페닐알라닌을 배지중에 고농도로 축적시키는 L-페닐알라닌의 공업적 제조방법에 관한 것이다. L-페닐알라닌은 필수아미노산의 일종으로 의약품원료, 혹은 저칼로리 감미료인 아스파탐의 합성원료로 사용되는 물질이다. L-페닐알라닌은 미생물의 생합성 경로가 복잡하고, 구조식중 방향족환을 가지고 있어 생성수율은 일반적으로 대단히 낮다. 또한 배지중에 고가의 L-타이로신 등을 첨가하여 주거나 생육이 불량하여 발효가 지연되는 등 많은 단점이 있었다.따라서, 본 기술의 목적은 종래의 이러한 단점을 해결하여, L-페닐알라닌의 생산성이 우수한 균주를 제공하는 것이다.본 기술의 균주는 에쉐리시아 콜리 K-12주로부터 변이된 L-타이로신, L-트립토판 동시 요구성 및 L-페닐알라닌 아날로그물질에 대한 내성변이주 MWEC-101주를 모주로 하여 본 기술상의 방법에 의해서 개발된 L-페닐알라닌 생산성이 향상된 특별한 생리적 성질을 가지는 균주이다본 기술에서는 본원 균주의 모주 MWEC-101주가 생육에 L-타이로신 및 L-트립토판을 필요로 하여 생산 배지에 고가의 이들 물질을 다량 첨가하여 주어야하는 점, 생육이 불량하여 장시간의 발효시간이 필요한 점, 발효액중에 생산된 L-페닐알라닌에 의해 생육이 저해되어 생산성이 낮아지는 점 등의 결점을 해결하기 위하여 모주 MWEC-101주를 여러 단계의 변이처리를 하여 L-타이로신 및 L-트립토판을 요구하지 않는 영양요구성 복귀변이주를 만든 후 L-페닐알라닌, L-타이로신, L-트립토판아날로그 물질에 대한 내성을 한층 강화시킨 균주중에서 L-페닐알라닌 생산성이 우수한 균주를 선별한 후 다시 변이처리하므로 L-페닐알라닌의 생산균주로서 보다 우수한 효과적인 균주를 개발하였다.본 기술의 균주 에쉐리시아 콜리 MWEC 101-5주가 나타내는 종래의 L-페닐알라닌 생산균주와 다른 특이한 생리적 성질은 생육에 L-타이로신 및 L-트립토판을 요구하지 않는 영양 요구성 복귀 변이주인 점, L-바린 내성주인 점, L-페닐알라닌, L-타이로신, L-트립토판의 아날로그 물질들에 대한 고농도의 내성을 가지고 있는 점, 배양온도에 대한 감수성을 가지며 니코틴산에 생육이 현저히 촉진되는 점으로 요약될 수 있다.
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- 특허법인충정
- 등록일
- 2001-04-07
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일반기술
생명과학 > 미생물자원
본 기술은 L-페닐알라닌의 생합성에 관여하는 유전자가 재조합된 새로운 미생물에 의해서 통상의 배양방법으로 L-페닐알라닌을 제조하는 방법에 관한 것이다. L-페닐알라닌은 필수 아미노산의 일종으로 의약품 혹은 저칼로리 감미료인 아스파탐의 합성원료로 사용되는 물질이다. 종래 L-페닐알라닌 제조방법으로는 브레비박테리움 혹은 코리네박테리움속 미생물의 타이로신 요구성 변이주에 의한 방법과 에쉐리시아 콜리의 타이로신 요구성에 트립토판 아날로그 내성 변이주에 의한 방법 등이 있다. 그러나 이들 방법은 대부분 L-페닐알라닌 생산수율이 대단히 낮다.따라서, 본 기술의 목적은 최근 균주 개량에 많이 사용되는 유전자 재조합 기술을 이용하여 종래 이들 미생물보다 생산성이 우수한 균주를 개발하는 것이다.본 기술은 L-페닐알라닌 생합성에 중요한 유전자를 페닐알라닌 생합성 대사조절이 잘 해제된 변이주 MSEC 101-5주로부터 분리한 후, 다시 유전자 수용균주에서 안정적으로 재조합 유전형질을 발현시킬 수 있는 플라스미드에 삽입하여 형질전환시킴으로써 새로운 군주 MWPEC 12-45를 개발하였다.본 기술의 균주 MWPEC 12-45주의 생리적 성질을 조사한 결과 수용균주로 사용한 MWEC 101-5 주와 거의 동일하였으나, L-페닐알라닌 생산성을 현저히 증가하는 결과를 보였다본 기술에서 사용한 유전자 조작 방법은 다음과 같다.L-페닐알라닌의 생산은 대장균세포내에서 2개의효소반응에 의해서 엄밀한 제어를 받는 것으로 알려져 있다. 그 하나는 pheA유전자로 코드되는 코리스메이트 뮤타아제 P-프리페네이트 디하이드라타아제가 촉매하는 반응이고, 다른 하나는 argG유전자로 코드되는 3-디옥시-D-아라비노-햅툴로소네이트-7-포스페이트 신타아제가 촉매하는 반응이다.이 DAHP 신타아제는 3가지 동종효소로 구성되고 aroF 및 aroH 유전자로 코드된다. 본 기술은 L-페닐알라닌 생합성에 중요한 aroF-tyrA 및 pheA 유전자를 페닐알라닌 생합성 대사조절이 잘 해제된 변이주 MWEC 101-5주로부터 산탄식 방법으로 분리한 후 다시 본 기술에서 사용한 유전자 수용균주에서 안정적으로 재조합 유전형질을 발현시킬 수 있는 플라스미드에 삽입하여 형질전환시킴으로써 L-페닐알라닌의 생산성이 증가된 새로운 군주 MWPEC 12-45를 개발할 수 있었다.
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- 특허법인충정
- 등록일
- 2001-04-07
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일반기술
생명과학 > 미생물자원
본 기술은 L-페닐알라닌의 생합성에 관여하는 유전자가 재조합된 새로운 미생물에 의해서 통상의 배양방법으로 L-페닐알라닌을 제조하는 방법에 관한 것이다. L-페닐알라닌은 필수 아미노산의 일종으로 의약품 혹은 저칼로리 감미료인 아스파탐의 합성원료로 사용되는 물질이다.종래 L-페닐알라닌 제조방법으로는 브레비박테리움 혹은 코리네박테리움속 미생물의 타이로신 요구성 변이주에 의한 방법과 에쉐리시아 콜리의 타이로신 요구성에 트립토판 아날로그 내성 변이주에 의한 방법 등이 있다. 그러나 이들 방법은 대부분 L-페닐알라닌 생산수율이 대단히 낮다.따라서, 본 기술의 목적은 최근 균주 개량에 많이 사용되는 유전자 재조합 기술을 이용하여 종래 이들 미생물보다 생산성이 우수한 균주를 개발하는 것이다.본 기술은 숙주의 L-페닐알라닌 생산능력에 전혀 영향을 주지 않으면서 재조합 유전자의 발현을 배양 온도에 따라 조절 가능한 새로운 유전자 재조합균주 MWPEC 13-60을 제공하고 있다본 기술에서 사용한 유전자 조작 방법은 다음과 같다.L-페닐알라닌의 생산은 대장균세포내에서 2개의효소반응에 의해서 엄밀한 제어를 받는 것으로 알려져 있다. 그 하나는 pheA유전자로 코드되는 코리스메이트 뮤타아제 P-프리페네이트 디하이드라타아제가 촉매하는 반응이고, 다른 하나는 argG유전자로 코드되는 3-디옥시-D-아라비노-햅툴로소네이트-7-포스페이트 신타아제가 촉매하는 반응이다.이 DAHP 신타아제는 3가지 동종효소로 구성되고 aroF 및 aroH 유전자로 코드된다. 본 기술은 L-페닐알라닌 생합성에 중요한 aroF-tyrA 및 pheA 유전자를 페닐알라닌 생합성 대사조절이 잘 해제된 변이주 MWEC 101-5주로부터 산탄식 방법으로 분리하고, 유전자 발현을 최대로 증가시켜 주기 위하여 강력한 프로모터의 하나로 알려진 λ파아지의 PR-PL 프로모터와 연결시킨 후 이 프로모터의 발현을 조절하기 위하여 새로운 온도 감수성 억제체를 사용하였다.본 기술에서 사용된 억제체의 온도 감수성 범위는 31℃-34℃로 재조합된 유전자를 수용하는 에쉐리시아 콜리 MWEC 101-6주의 L-페닐알라닌 생산 최적온도인 31℃-32℃에 가장 적합하게 만들어진 것이다
- 보유기관
- 특허법인충정
- 등록일
- 2001-04-07
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일반기술
생명과학 > 미생물자원
본 기술은 에쉬리시아 콜리(Escherichia coli)의 돌연변이주중 L-페닐알라닌 생산균주를 탄소원, 질소원, 기타 유용한 유기 및 무기 영양원을 함유하는 배양배지에서 호기적인 배양을 하여 배지내에 고농도의 L-페닐알라닌을 생산, 축적시키는 발효법에 의해 L-페닐알라닌의 공업적 제조방법에 관한 것이다.본 기술은 종래 제조방법의 단점을 극복하고 저가의 생산원가로 대량생산을 위해서 보다 고수율의 생산능력을 갖춘 돌연변이체의 개발을 목적으로 하고 있다.본 기술에서의 균주 에쉬리시아 콜리 MWWJ304주는 MWEC101-6주를 모주로 하여 연속적인 변이처리를 행함으로써 고농도의 페닐알라닌 및 타이로신 아날로그 물질에 대한 내성 강화주이며 온도 감수성 타이로신 누수(leaky)주를 개발하고 이들 중 L-페닐알라닌 생산성이 우수한 균주를 선별하여서 얻을 수 있었으며, 이 새로운 균주를 이용하면, 저렴하게 L-페닐알라닌을 생산할 수 있게 된다L-페닐알라닌은 필수아미노산의 일종으로 의약품 원료, 혹은 저칼로리 감미료인 아스파탐의 합성원료로 사용되며, 일부식품의 첨가제로 사용되는 물질이다. L-페닐알라닌은 미생물의 생합성 경로가 복잡하고 방향족환을 갖는 구조식의 영향 등으로 생산수율은 일반적으로 대단히 낮으며, 생육이 불량하여 발효지연 등의 문제점이 있어왔다.본 기술에서 최종적으로 선별된 에쉬리시아 콜리 MWWJ304가 모주인 MWEC101-6주와 다른 생리학적 성질은, 온도변화에 따라 생육을 위해 L-타이로신의 보충을 요구하는 온도감수성 타이로신 누수주인 점, 자일로스, 리보스 등 5탄당 이용능이 저하된 균주인 점, L-페닐알라닌, L-타이로신 아날로그 물질들에 대한 완전내성을 가지고 있는 점으로 요약된다
- 보유기관
- 특허법인충정
- 등록일
- 2001-04-07
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본 기술은 유전자 재조합 기술에 의하여 L-페닐알라닌 생합성에 관여하는 유전자가 재조합된 플라스미드를 함유한 새로운 에쉬리시아 콜리(Escherichia coli)를 배양하여 L-페닐알라닌을 제조하는 방법에 관한 것이다.본 기술의 목적은 유전자 재조합 기술을 이용하여 세포안에서 생합성 관련 유전자들의 발현을 최적화하여 L-페닐알라닌의 생산성을 향상시킨 새로운 우수한 균주의 개발하는 것이다.본 기술은 유전자 재조합 기술에 의해 재조합된, 코리스메이트 뮤타아제 p-프리페네이트 디히드라타제를 코딩하는 pheA유전자, 3-데옥시-D-아리비노헵툴로소네이트-7-포스페이트 신타아제를 코딩하는 aroF, 이들 두 유전자의 발현을 위한 두개의 프로모터 및 온도 감수성 리프레서 유전자를 함유하는 새로운 플라스미드 pMW16을 개발하여, 플라스미드 pMW16에 의해 형질전환된 재조합 세포를 배양함으로써 L-페닐알라닌을 고수율로 생산하는 방법을 제공하고 있다L-페닐알라닌은 필수 아미노산의 일종으로 주로 의약품 원료 및 저칼로리 감미료인 아스파탐의 원료로 사용되고, 일부 식품의 첨가제로도 사용되는 물질이다.종래 L-페닐알라닌 제조방법으로는 브레비박테리움 혹은 코리네박테리움 속 미생물의 타이로신 요구성 변이주에 의한 방법과 에쉐리시아콜리의 타이로신 요구성에 트립토판 아날로그 내성 변이주에 의한 방법 등이 있으나, 이들 방법은 대부분 L-페닐알라닌 생산수율이 비교적 낮은 결점이 있다.본 기술에서 사용한 유전자 조작 방법은 다음과 같다.본 기술에서는 L-페닐알라닌 생합성에 중요한 유전자인 aroF와 pheA의 발현을 최대로 증가시키기 위해 강력한 프로모터의 하나로 알려진 λ파아지의 PL프로모터를 각각의 유전자에 연결시킨 후 유전자 발현을 조절하기 위해 온도감수성 리프레서를 사용하였다.이 재조합 플라스미드 pMW16은 온도 감수성 타이로신 누수주인 에쉬리시아 콜리 MWWJ304에 형질전환하여 한천배지에 도말후 배양하여 생육한 균주중 DAHP 신타아제 활성이 증가되고, L-페닐알라닌 생산성이 우수한 균주 MWPWJ304를 선별하였다
- 보유기관
- 특허법인충정
- 등록일
- 2001-06-20
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