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일반기술 생명과학 > 기타 생명과학

녹색 형광 단백질 유전자가 삽입된 재조합 베큘로바이러스를 이용한 형광누에 제조방법.

곤충 베큘로바이러스(Autographa californica nuclear polyhedrosis virus : AcNPV 이하 AcNPV이라 함)의 다각체 단백질 유전자 프로모터 조절하에 초록색 형광 단백질 유전자를 도입한 재조합 AcNPV(한국과학기술원 생명공학연구소균주탁번호 KCTC 0418BP)를 누에(Bombyx mori)에 주사하여 만든 초록색 형광누에 및 그 제조방법에 관한 것으로서, 베큘로바이러스 전이벡터 pBacPAK8의 제한효소 BamHl와 Pstl 위치에 pGFP로부터 절단된 약 720bp의 초록색형광 단백질 유전자를 삽입하고 재조합 전이벡터(pAc-GFP) 500ng과 Bsu361)으로 절단한 BacPAK6 바이러스 DNA를 혼합하고 리포펙틴을 첨가하여 반응시켜 곤충세포주(Sf9)를 접종하여 트렌스펙션하고, 배양하여 선발한 재조합 바이러스를 Sf9 곤충세포주에서 증식시키며, 재조합 베큘로바이러스의 유전자는 AcNPV의 다각체 단백질 유전자 프로모터의 조절하에 삽입시킨 녹색 형광 단백질유전자를 삽입시켜서 재조합 베큘로바이러스(KCTC 0418BP)를 이용한 초록색 형광누에를 제조한다 곤충 베큘로바이러스 발현계를 이용하여 초록색 형광 단백질 유전자가 다각체 단백질 유전자 프로모터의 조절하에 포함된 재조합 AcNPV (균주기탁번호 KCTC 0418BP, 이하 유전자재조합 바이러스라함)를 제조하고, 이를 숙주범위가 다른 누에에 주사함으로서 누에는 죽지 않으면서도 그 재조합 바이러스가 소량 증식되어 다각체 단백질 유전자 프로모터의 조절에 의해 초록색 형광 단백질을 발현하는 것을 자외선 조사에 의해 쉽게 확인할 수 있으며 그 유전자는 차세대로 전이되어 세계 최초로 살아있는 상태에서 외래유전자 도입과 발현을 확인할 수 있는 종래의 문제점을 해결하는 기술이다.

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한국산업은행
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2001-05-18
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일반기술 생명과학 > 식물자원

느타리 버섯으로부터 분리된 신규한 GPD유전자를 형질전환시킨 오스모틱 스트레스 내성 효모

느타리 버섯에서 내염성 관련 유전자인 GPD를 분리하여 이들의 염기서열을 밝히고, 효모의 발현 벡터에 상기 유전자를 클로닝하는 방법에 의해 효모에 전이시켜 환경스트레스에 대한 저항성이 부여된 효모를 제조하는 것이다.이렇게 제조된 효모는 내염, 내한발성 특성이 크게 개선된다.여러가지 환경적 스트레스는 미생물 뿐만 아니라 식물의 생육이나 수량에 크게 영향을 미치며 이를 극복하기 위하여 식물에서는 Osmoprotectants를 합성하는 여러 종류의 유전자를 전이시켜 트레할로스, 만니톨, 베타인 그리고 프럭탄등의 함량을 높여줌으로써 내염, 내한발성을 증진시킨 연구결과가 보고되고 있다. 그러나 이들 유전자는 식물의 경우 환경스트레스에 대한 내성을 증진시키기는 하나 식물의 생육에 영향을 미쳐 키가 작아지거나 개화가 되지않는 경우가 발생하는 등의 문제가 있어 왔다. 본 기술에 의하여 느타리 버섯으로부터 Osmotic stress 관련 유전자인 GPD유전자를 분리하고, 상기 유전자를 함유한 재조합 벡타 및 이를 이용하여 내염, 내한발성 특성이 크게 개선된 효모를 얻을 수 있다.

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한국산업은행
등록일
2001-05-18
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일반기술 생명과학 > 기타 생명과학

고추 세균성 점무늬병 저항성 개체의 신속 선발을 위한 PCR기법 및 PCR프라이머

고추의 세균성 점무늬병 저항성 개체의 선발을 위한 PCR프라이머의 제작을 위하여, 고추의 세균성 점무늬병 저항성 개체와 이병성 개체의 DNA 풀(pool)을 검색하여 저항성과 연관된 RAPD(무작위 증폭된 다형성 DNA) 마커를 선발하며, 이들의 염기서열을 분석한다. 또한 RAPD 마커의 선발과정 및 PCR 프라이머의 작성은 저항성 개체와 이병성 개체의 DNA 풀 작성, 고추의 세균성 점무늬병 저항성과 연관된 RAPD 마커의 선발, RAPD 마커의 저항성 연관 분석, RAPD 마커의 염기서열 분석 및 PCR 프라이머의 제작으로 이루어진다.고추의 세균성 점무늬병 저항성 개체를 외부의 선발 조건에 영향받지 않고 안정적으로 선발할 수 있게 하는 PCR기법 및 PCR프라이머에 관한 것으로서, 고추의 세균성 점무늬병은 일명 반점세균병 또는 더뎅이병으로 불리며, 고추의 잎, 줄기, 과실들에 반점을 형성하는데, 특히 잎에 생긴 반점은 조기 낙엽을 유발하여 수확량을 감소시킨다.이에 본 기술은 고추의 세균성 점무늬병 저항성 육종 과정에서 저항성 개체의 판별과정에 사용되는 DNA 마커를 개발한 것으로서, 이러한 마커에 의한 저항성 개체의 선발방법은 종래의 직접접종방법 보다 시간과 비용을 절약하고, 외부의 선발조건에 영향받지 않고 안정적으로 저항성 개체를 선발할 수 있다.

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한국산업은행
등록일
2001-05-18
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일반기술 생명과학 > 기타 생물자원 보존·생산·이용 기술

저콜레스테롤 동결액란의 제조방법과 이를 이용한 마요네즈의 제조방법과 그 마요네즈

물 55-65%, 소금 10-6% 및 설탕 35-29%를 혼합한 혼합수용액 15-30%와 추출된 난황액 85-70%를 혼합하는 난황혼합물을 제조하는 공정, 통상의 저온살균법에 의해 3분간 살균을 시행한 다음, 50。C로 냉각한 난황혼합물 60g당 β-cyclodextrin 2-8g을 첨가하고 4。C로 냉각하여 원심분리공정을 취한후 콜레스테롤을 제거한 난황액을 얻어 동결시키는 공정으로 이루어진다.계란은 콜레스테롤이 많이 함유되어 있기 때문에 일반소비자들로부터 그 사용이 기피되는 경향이 있다.이에 본 기술은 잉여계란의 난황에 함유된 콜레스테롤을 효과적으로 낮추어 이를 동결시켜 보관할 수 있으므로 필요시에 선택적으로 사용할 수 있고, 저콜레스테롤의 가공식품을 제조할 수 있으므로 계란의 소비를 높여 축산농가의 소득을 한층 증진시킬 수 있다.

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한국산업은행
등록일
2001-05-18
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일반기술 생명과학 > 기타 생물자원 보존·생산·이용 기술

메밀나물 및 그의 제조방법

메밀을 콩나물 형태의 채소로 재배하여 기능성 물질인 루틴(Rutin), 단당류의 유리당, 필수 아미노산, 각종 무기질 및 섬유소를 풍부하게 함유하도록 하기위한 메밀나물의 제조방법에 따르면 물에 담궈둔 메밀종자를 흡수한 종이 또는 면타올 위의 망사에 치상하고 25 내지 30℃의 어두운 곳에서 매일 2 내지 3회 살수하여, 약2 내지 4일이 경과하면 발아하여 메밀 싹의 뿌리가 신장하면서 망사에 조밀하게 엉켜있는 매트(mat)상태를 형성하도록 한 다음, 살수하면 메밀의 하배축이 신장된 메밀나물(buckwheat sprout)을 재배할 수 있다.메밀을 발아시키고 그의 하배축을 신장시키는 방법으로 재배된 메밀나물은 메밀종실 자체보다 기능성 물질인 루틴, 필수 아미노산 및 각종 무기질을 풍부하게 함유할 뿐만 아니라, 단당류의 유리당과 섬유소를 다량 함유하고 있어 식품학적 및 약리학적 가치를 가지는 메밀을 저렴한 비용과 간편한 방법으로 이용하는 기능성 식품으로의 새로운 수요를 창출하고, 메밀의 부가가치를 향상시킴과 더불어 국민건강에 기여하고 메밀 재배농가의 소득을 증대시킨다.

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한국산업은행
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2001-05-18
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일반기술 생명과학 > 기타 생물자원 보존·생산·이용 기술

아마란스 종자로부터 콜레스테롤 저하능을 갖는 식물성 스쿠알렌의 제조방법

동물성 스쿠알렌과 분자구조식이 동일하여 스쿠알렌 고유의 기능을 가지면서, 그와는 반대로 혈청 콜레스테롤의 수치를 유의하게 저하시키는 효과를 지닌 식물성 스쿠알렌을 아마란스 종자로부터 제조하기 위하여 아마란스의 건조 종자를 분쇄하고, n-헥산으로 상온에서 추출, 바람직하게는 4 내지 8일씩 1 내지 5회, 가장 바람직하게는 6일씩 3회 추출한 다음, n-헥산, 혹은 n-헥산과 극성 유기용매, 가장 바람직하게는 에틸 에테르가 99:1 내지 96:4(v/v)로 혼합된 용액을 용출용매로 사용하여 실리카겔 컬럼 크로마토그래피를 수행하였으며 이 기술을 통해 99% 이상의 고순도의 식물성 스쿠알렌이 간단하게 제조되었다.아마란스 식물성 스쿠알렌은 스쿠알렌 고유의 기능을 가지면서 혈청 콜레스테롤의 수치를 낮추는 건강보조식품 및 화장품 개발로 상업화시킬 수 있으며 동물성 스쿠알렌의 원료인 심해상어와 같은 원료 수급의 한계성이 없으므로 아마란스 종자로부터 대량 제조될 수 있다.

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한국산업은행
등록일
2001-05-18
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일반기술 생명과학 > 효소공학 (H73)

엘라스타제의 정제방법

엘라스타제는 단백질의 분해 효소의 일종으로 생체내에서 생체 조직의 신진대사에 중요한 역할을 한다. 특히, 임파구의 일종인 호중구(neutrophil)에서 분비되는 엘라스타제는 감염증이나 염증조직에서 그 분비량이 증가하고, 감염방어나 상해조직의 분해재생에 밀접하게 관여하고 있다. 엘라스타제의 정제방법은 엘라스타제 함유수용액에 폴리에틸렌 글리콜-6000을 가하여 엘라스타제를 침전시킨 후 침전물을 세척하는 간단한 방법으로 고활성의 엘라스타제를 수득한다.종래의 정제방법은 돼지췌장에 함유되어있는 엘라스타제 전계물을 우선 분리하고, 활성화 시킨다음 황산암모늄 부분 분리법(염석)이나 유기 용제에의한 처리를 함으로써 조엘라스타제 함유 생성물을 얻은후, 조생성물 내의 엘라스타제를 인산염 완충액등으로 추출하고, 결정화하거나 투석을 거쳐서 엘라스타제를 침전시킨다. 그러나 이러한 방법은 다량의 황산암모늄을 사용하여야 하며, 이점은 다량의 불순물로 오염된 엘라스타제가 침전내에 그대로 잔류하게 되는 문제가 있으며, 결정화과정을 거쳐야 하므로 제조공정이 복잡하고 최종산물이 나올 때까지는 많은 시간이 소요되는 문제점이 있다. 엘라스타제 함유수용액을 청정여과하고 폴리에틸렌 글리콜을 가하여 얻은 침전물 을 물로 세척한 후 남아 있는 고활성의 엘라스타제 침전을 얻는 방법이다.아울러 더욱 정제된 엘라스타제가 요구되는 경우에는 엘라스타제 건조 생성물을 인산완충용액으로 추출한 후 한외여과하여 100,000 이상의 분자량을 갖는 성분을 제거한다.엘라스타제(Elastase)는 지질성분의 이행을 조절하고 혈청지질의 이상을 개선한

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한국지식평가컨설팅
등록일
2001-06-20
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일반기술 생명과학 > 기타 생물자원 보존·생산·이용 기술

애플페논을 유효성분으로 함유하는 조성물

사과에서 추출한 순수 식물성분인 애플페논을 유효성분으로 계면활성제, 방부제, 정제수를 함유하는 조성물을 제조하여 , 환경오염을 일으키지 않고 인체에 무해하면서도 냉장고 내부의 탈취효과 및 신선도 유지 효과가 우수하고, 도마의 오염물질, 냄새 및 세균을 제거하고, 냉장고 탈취제 및 도마용 세정 및 제균제로 사용한다. 애플페논은 사과에서 추출한 순수 식물성분으로서 사과의 감미성분인 폴리페놀로, 기존의 폴리페놀보다 항산화기능이 강화된 천연 성분이다. 폴리페놀은 야채, 과일, 녹차 등에 다량 함유되어 있는 일상식품의 성분으로서, 애플페논 제제는 여러 종류의 폴리페놀을 사과의 독특한 구성으로 보존하고 있으며, 특히 각종 카테킨류와 클로로겐산을 다량 함유하고 있고, 음식 보존기간을 향상시키며 충치 예방효과와 항산화작용, 비타민 C 열화방지작용을 가지고 있으며, 장기보존이 가능하며, 내열, 내산, 내광성이 우수하고, 물에 간단히 용해되며 맛에 영향이 거의 없는 특징을 가지고 있다종래의 악취 흡착제로 널리 사용되어온 활성탄은 광범위한 취기에 대하여 보편적인 흡착제거 효과를 나타낸다고 알려졌으나, 벤젠, 톨루엔등 비극성 탄화수소류의 흡착에는 효과가 있지만 복합적인 냄새를 나타내는 냉장고 및 도마의 김치 냄새 등을 포함하는 악취에는 충분한 효과를 나타내지 못하고 있다. 또한 근래에 들어 이산화염소를 순수 중에 안정화시킨 이산화염소액 탈취제의 경우, 염소산칼륨에 진한황산을 반응시켜 얻어지며 동황색의 자극성 기체로 산업상에서는 흔히 살균제 및 표백제로 사용되는 이산화염소로 공기중에서 주로 염소화, 산화 또는 염수소화(Chlorohydrination)에 의해 악취들과 반응하여 탈취작용을 일으키고, 통상 이산화염소는 순수 중에 안정화시킨 안정화 이산화염소액 상태로 사용되며, 액상으로 산포, 분무와 같은 방법으로 사용이 간편하나 화장실, 냉장고 등 지속적 탈취효과를 요구하는 곳이나 유동이 심한 곳에서의 취급상 불편함이 있고 또 분말상 안전화 이산화염소도 시판되고 있으나 흡습성이 있고 가격이 너무 높다는 단점이 있다. 시판중인 각종 제균제와 비교를 통해 각 종 고초균 (B. subtilis), 녹농균 (P. aeruginosa), 황색포도구균(S. aureus), 대장균 (E. coli)등의 미생물에 대한 제균효과가 나타났으며, 제조한 도마용 세정 및 제균제의 독성은 원숭이 신장 세포를 이용한 세포독성을 측정한 결과 본 세정제 조성물은 다른 조성물에 비해 세포생존율이 월등히 높아서 인체에 무해하고 환경오염을 유발하지 않음을 알 수 있다. 탈취제는 어취성분에 대한 제거 효과가 탁월하므로 냉장고 내부의 악취 제거 및 도마와 같은 주방용 식기의 오염물질 및 냄새등을 제거하는 능력이 우수하고 사용 후 닦아 내거나 다시 씻을 필요가 없으므로 편리하게 이용할 수 있고, 천연성분 및 식품 첨가물로 이루어져 있어서 인체에 무해하고, 환경오염을 유발하지 않는다.

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한국지식평가컨설팅
등록일
2001-05-30
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일반기술 생명과학 > 기타 생물자원 보존·생산·이용 기술

애플페논을 포함하는 세정제 조성물

사과에서 추출한 천연 식물성분인 애플페논에 구연산나트륨, 계면활성제, 재오염 방지제, 유기빌더, 방부제등을 첨가하여 만든 세정제 조성물로 과일이나 야채에 묻어 있는 농약, 세균 등의 이물질을 과일이나 야채의 신선도에 영향을 미치지 않으면서 제거시킬 뿐만 아니라, 잔류 세제에 의한 인체 독성이 거의 없고, 사용 후 폐기된 세정제가 환경오염을 거의 유발하지 않고, 과일이나 야채를 비롯한 식품, 식기류의 세정에 사용될 수 있다. 애플페논은 일본의 닛까 위스키사(NIKKA WHISKY)가 사과에서 추출하였으며, 기존의 폴리페놀보다 항산화작용이 강한 천연성분이다. 애플페논은 여러 종류의 폴리페놀을 사과의 독특한 구성으로 보존하고 있으며, 각종 카테킨류와 클로로겐산을 다량 함유하고 있는 것이 특징이다. 또한 애플페논은 음식 보존기간을 향상시키며 충치 예방효과와 항산화 작용, 비타민 C 열화방지 작용을 가지고 있으며,장기보존이 가능하며, 내열, 내산, 내광성이 우수하고, 물에 간단히 용해되며 맛에 영향이 거의 없는 특징을 가지고 있어 식품 첨가물로 사용되고 있다. 또한 애플페논은 사과에서 추출한 순수 식물성분이므로 안전성에 문제가 거의 없으며, 일본 닛까 위스키사가 변이원성, 잔류농약 분석, 중금속 시험을 통해 안전성이 확인 되었다.종래의 각종 중성세제는 세정 및 살균력에 있어서는 우수하나, 설폰산염 형태의 음이온계 계면활성제를 주성분으로 하고 있어, 이들 성분의 단백변성작용에 의해 피부염증 및 피부거침을 유발하는 등 인체독성이 심하고, 이러한 인체독성을 약화시키기 위하여 연화제 또는 피부보호제 등을 별도로 첨가해야 하고, 환경오염 문제를 해결하기 위해 개발된 생분해성 세제류는 세정 및 살균력이 약하다. 본 기술은 식품첨가제로 사용되고 있는 애플페논을 포함하는 조성물이 고초균 (B. subtilis), 녹농균 (P. aeruginosa), 황색포도구균(S. aureus),대장균 (E. coli)미생물에 대한 제균효과가 우수 했으며, 원숭이 신장 세포를 이용한 세포독성을 측정한 결과 다른 조성물에 비해 세포생존율이 월등히 높아서 인체에 무해하고 환경오염을 유발하지 않았다.

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한국지식평가컨설팅
등록일
2001-05-30
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일반기술 생명과학 > 기타 생물자원 보존·생산·이용 기술

사과로부터 추출한 폴리페놀을 포함하는 항진균성 힐패드

사과로부터 추출한 폴리페놀을 포함하는 항진균성 힐패드(신발용 보조중창)에 관한 것으로,폴리페놀은 야채, 과일, 녹차 등에 다량 함유되어 있는 일상식품의 성분이다. 이중 사과로부터 추출한 폴리페놀은 사과의 감미성분으로서 새로운 기능성 식품소재로 알려져 있다. 즉, 사과로부터 추출한 폴리페놀은 여러 종류의 폴리페놀을 사과의 독특한 구성으로 보존하고 있으며, 각종 카테킨류와 클로로겐산을 다량 함유하고 있다. 특히, 사과로부터 추출한 폴리페놀은 기존의 폴리페놀보다 항산화작용이 강한 천연성분이며, 음식 보존기간을 향상시키고, 충치 예방효과와 항산화 작용, 비타민 C 열화방지 작용을 가지고 있으며, 장기보존이 가능하며, 내열, 내산, 내광성이 우수하고, 물에 간단히 용해되며 맛에 대하여 영향을 거의 끼치지 않는다는 특징을 가지고 있고, 안전성에 문제가 거의 없다.힐패드는 인체에 거의 무해하고 편안한 쿠션감을 얻을 수 있기 때문에 실리콘 재질의 힐패드와 힐패드의 바닥 판부에 돌기를 추가하여 발바닥의 맛사지 효과를 극대화하고, 저면부에 미끄럼 방지용 홈을 새겨 착용의 편리함을 도모할 수 있게 하고, 아울러 자석의 배치를 넓게 하여 뒤꿈치 전체로 자석의 효과를 미치게 하도록 하는 것으로 폴리페놀이 진균을 억제 및 제거함으로써 효과적으로 발냄새를 제거 할 수 있다. 사과로부터 추출한 폴리페놀로서 애플페논(APPLE PHENON, 일본의 닛까 위스키사 )을 사용하고, 진균으로서 발냄새에 영향을 미치는 진균(Aspergillus niger, Aspergillus oryzae, Rhizopus nigaricans, Penicillium citrinum)을 선정하여 항진균 효과를 시험한 결과, 애플페논이 함유되지 않은 배지에서는 진균의 왕성한 성장을 볼 수 있었고, 애플페논이 함유된 배지에서는 Rhizopus nigaricans 외에는 뛰어난 항진균 효과가 있음을 확인할 수 있었으며, 그 중 가장 적절한 항진균 효과를 나타내는 애플페논의 최소 함량은 0.01%이었다. 본 기술의 항진균성 힐패드는 진균에 대한 억제 효과가 탁월하므로 발 냄새에 영향을 미치는 진균을 억제 및 제거하여 발 냄새에 대한 탈취 효과를 기대할 수 있다.

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한국산업기술진흥원
등록일
2001-05-31
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일반기술 생명과학 > 미생물자원

말토오스 아밀레이즈 또는 그것의 단편 결정

말토오스 생성 아밀레이즈의 결정 및 그결정의 3차원 구조를 이용하여 올리고당 생산 활성이 개선된 말토오스 생성 아밀레이즈를 제조한다. 또한 당전이(transglycosylation) 활성이 개선된 아밀레이즈를 제조 할 수 있다. 여기서 사용된 말토오스 생성 아밀레이즈는 미생물 (Bacillus stearothermophilus, Bacillus licheniformis, Bacillus subtilis)로부터 분리된 말토오스 생성 아밀레이즈 또는 그것의 컨센서스 서열 즉 말토오스 생성 아밀레이즈의 기능을 가지는 도메인을 포함하는 말토오스 생성 아밀레이즈의 단편 또는 그것의 컨센서스 서열이나 이들과 기능적으로 동일한 아미노산 변이체를 포함한다. 그리고 정제에 도움이 되도록 N-말단 또는 C-말단에 아미노산을 부가하였다.아밀레이즈는 전분을 가수분해하여 탄수화물 대사에 중요한 역할을 한다. 대부분의 아밀레이즈가 α-D-(1.4)-글리코시드 결합만 가수분해 할 수 있는 데 비하여 말토오스 생성 아밀레이즈(Maltogenic amylase)는 α-D-(1.4)-글리코시드 결합과 α-D-(1.6)-글리코시드 결합을 가수분해 할 수 있다. 그리고 α-D-(1.4)-글리코시드 결합을 당 수용체에 전이 시켜 α-D-(1.3)-글리코시드 결합, α-D-(1.4)-글리코시드 결합, α-D-(1.6)-글리코시드 결합을 생성 할 수 있다. 또한 전분을 말토오스 단위로 분해하고 풀루란 및 사이클로택스트란 분해 기능을 갖는다. 특유의 당전이 활성은 다양한 유효성을 가지고 있어 분자 올리고당(isomalto oligosaccharides)를 생성할 수 있다. 이 분자 올리고당은 식품의 저장성을 높이고 식품 부패균의 생육을 저해시키며 타 당류의 결정화를 방지 및 장내 유용균인 bifidus의 생육을 촉진하는 기능을 한다. 그 뿐 아니라 말토오스 생성 아밀레이즈는 종래의 아밀레이제 의해 가수분해되지 않는 아카보오스를 분해하고, 당전이를 통해 올리고당을 생성한다. 당전이 효소 활성이 증대된 말토오스 생성 아밀레이즈를 얻기 위해서는 아미노산 서열을 분석하고 무작위적인 돌연변이를 통하여 개선된 돌연변이체를 유도하기도 하나 방대한 인력, 자료, 시간이 들고 성공 가능성 역시 극희 희박하다. 따라서 효소와 같은 생체고분자들이 가진 기질 또는 다른 분자 인식 부위의 구조를 통해 생체 고분자의 기능을 저해시키거나 활성화시킴으로써 무작위로 인한 방법에서 오는 손실을 감소 시켰다.

보유기관
포항공과대학교
등록일
2001-06-04
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일반기술 생명과학 > 식물자원

페퍼 마일더 모틀 바이러스(pepper mild virus ; PMMV)의 외피 유전자

PMMV의 게놈 RNA로부터 클로닝된 PMMV의 외피 유전자의 염기 서열을 밝히고 이 유전자를 작물에 형질 전환 시켜 PMMV에 대한 저항성을 지닐 수 있는 벡터를 제조하였다. 국내에서 고추에 대해 질병를 유발하는 바이러스로는 TMV-OM(보통종), TMV-P(고추종), PMMV(토마토종)EMD 세 종류가 크게 알려져 있다. 이들은 대부분 오이 모자이크 바이러스(CMV)등의 바이러스와 복합 감염되어 작물에 질병을 유발한다. 그래서 이에 저항 할 수 있는 항 바이러스성 고추 품종을 개발하기 위하여 고추에 심각한 피해를 끼치는 바이러스인 TMV-P에서 외피 유전자를 클로닝하고 이들의 염기 서열을 결정하였다. 그 결과 이들이 PMMV라는 것을 알았다. 그래서 이들 PMMV에 대한 저항성을 지닌 고추를 개발을 위하여 이 PMMV의 외피 유전자를 고추에서 발현 가능하게 하는 벡터를 제조 하였다.다양한 작물의 재배 및 생산에 영향을 미치는 요소 중에 바이러스의 병해는 그 피해가 심각하다. 그러나 이들 바이러스병에 대한 고전적인 저항성 품종의 육종은 어렵고 간접적으로 바이러스 매개충을 방제하는 방법을 이용 해 왔다. 그러나 최근 식물 유전 공학의 발달로 항바이러스 작물의 제조가 연구되고 있다. 이에 이용되는 유전자는 바이러스의 복제효소 유전자, 외피 단백질 유전자, 위성 RNA유전자, 역전사 유전자, 라이보자임 유전자, 리보소옴 불활성화 단백질 유전자 등이 이용되고 있다. 그래서 한국의 주요 작물 중 바이러스에 큰 피해를 입고 있는 고추에 대한 바이러스 질병을 타개하기 위하여 새로운 형질 전환 기술을 이용한 저항 작물을 개발 하고자 하였다. 이에 대한 기초 단계로 고추에 심각한 피해를 주는 한국형 PMMV의 외피 유전자를 클로닝하고 그들의 염기 서열을 밝혔고 이들 유전자를 도입하여 저항성 작물을 생산 가능하게 하는 벡터를 제조하였다.

보유기관
포항공과대학교
등록일
2001-06-04
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일반기술 생명과학 > 기타 유전자 공학

한국산 재래용 산양의 베타카제인 프로모터를 이용한 유선조직 특이적 발현 시스템

한국산 재래종 산양의 베타카제인 프로모터 부위를 이용한 제조합 벡터 pGbc, pGbcL, pGbcS 및 이를 이용하여 생리활성 물질을 제조하는 방법이다. 베타카제인 프로모터를 한국산 재래종 산양으로부터 얻었으며(대량생산가능, 경제성), 프로모터와 구조유전자의 연결에 있어서 대개 프로모터와 구조유전자 사이에 인트론(intron)을 삽입하지만, 본 기술에서는 한국산 재래종 산양의 베타카제인 프로모터 다음에 위치한 엑손(exon)과 구조유전자의 맨 처음 엑손(exon)을 바로 연결하였고, 바람직한 전사종결을 이루기 위하여 구조유전자 뒤에 소 성장호르몬(bovine growth hormone)의 전사종결부위를 연결하였으며, 그 연결에 있어서 구조유전자의 폴리 에이 시그널(poly A signal) 존재 유무에 관계없이 하였다는 측면에서 특징을 갖는다. 유선조직유래 세포주나 형질전환동물의 유즙으로 부터 분비되도록 함으로써 생리활성물질의 활성유지를 모든 종류의 생리활성물질에 동일하게 적용시킬 수 있으며, 유선조직 특이적 발현시스템을 구축함으로써, 유선에서 분비되는 단백질의 종류의 단순함과 무해성에 기반을 둔 안정성을 얻을 수 있으며, 유선에서 발현되는 단백질들은 그 종류가 적기 때문에 분리정제가 용이한 특징을 갖는다.생리활성물질을 생산하기 위한 종래의 기술로, 대장균을 이용한 발현(한국공고 특허 제94-5585호) 동물세포를 이용한 발현방법은 대장균을 이용한 발현의 경우, 저렴한 비용으로 대량생산을 할 수 있으나, 대장균이 원핵생물이기 때문에 진핵생물에서 단백질 합성 이후에 이루어지는 post-translational modification 과정이 수행되지 않기 때문에 EPO 등의 인체생리활성물질에서는 그 활성이 유지되지 않는 경우가 발생하였다. 이의 해결책으로 동물세포에서 발현을 시키는 post-translational modification 과정이 수행되기 때문에 활성을 유지할 수 있는 시스템이 개발되었으나, 동물세포 배양에 있어 경제성과 활성의 유지 및 순수분리정제의 문제점을 갖고 있다. 따라서 동물의 유선조직으로부터 유래한 동물세포에서의 발현과 형질전환동물의 유즙을 통한 생산을 가능하게 함으로써, 활성의 유지, 비용의 문제점 및 순수분리정제 등을 해결하였다.

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한국지식평가컨설팅
등록일
2001-06-04
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사상체질 진단기

이 진단기는 손목이나 손바닥에 끼워서 사용하는 휴대용이고 . 유전자 변형식품등모든 음식물의 유무해를 즉석에서 감정해 볼수있어 건강수호에 필수적이고, 또 그외 모든 물질의 유무해 판단등 사용처가 방대함

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국립경찰병원
등록일
2001-07-02
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전기영동 겔상의 단백질 또는 DNA 염색법

전기영동 겔상의 단백질 또는 DNA 염색법으로 감도, 수월성 및 안전성에 있어 기존 방법에 대해 우수고유기술인 counter ion-dye staining technique을 이용하므로써 기존의 destaining 과정이 생략되므로써 감도 및 속도에서 우월

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(주)이지바이오 팩
등록일
2001-07-02
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병원체 미생물로부터 얻은 항원을 식별하기 위한 단백질학 접근

높은 분해능(resolution)의 2차원 겔 전기이동 (2D-PAGE)은 전신 칸디다증의 환자에게서 항체생산을 유발하는 칸디다 alvican 항원의 감지를 가능케 하는 강력한 도구로 판명된, 전신 칸디다증 환자로부터 얻은 혈청을 이용한 western-blotting으로 이끌어 낼 수 있다. 이 방법은 다른 병원체에도 쓰일 수 있다.2D-PAGE 는 1차원의 전자 수가 같은 시점에서의 차이와 2차원의 명백한 분자 질량에 기반하여 복잡한 단백질 혼합물의 분리를 인정한다. 이 단백질들은 면역항원을 감지하기 위해 전신 칸디다증의 환자들로부터 혈청을 이용하여 교배할 수 있다. 이 항원들의 식별은 특정한 항체를 통해서나, N-terminal 시퀀스에 의해, 또는 질량 분석 등과 같은 많은 방법으로 이루어질 수 있다. 이 최근의 공정으로 펩타이드 질량 지문 채취(MALDI-TOF) 가 가능하며 데이터베이스에서 찾을 수 있다. 그럼에도 불구하고, 만약 단백질 시퀀스가 데이터베이스 속에서 나타나지 않거나 펩타이드 맵으로부터 찾을 수 있는 정보가 충분치 않다면, 단백질 식별을 위해 팹타이트 시퀀스 태그를 만드는 것이 필요할 것이다(nanospray-MS/MS). 혁신적인 사항:두기술의 혼합: 2차원 전기이동과 western-blotting. 이 방법은 단일차원 전기이동보다 좀더 나은 분해능의 항원 단백질을 감지하는 것이 가능하다. 이와 함께 질량 분석의 중요한 발전과 더불어 미생물의 DNA와 단백질 데이터베이스의 이용은 항원 식별을 가능케 하고 있다. 주요장점:여기서 서술된 방법의 주된 장점은 칸디다 albicans 항원의 확인이 여기서 서술된 항원들의 일부를 사용하여 전신성 칸디다증의 진단을 위한 방법을 개발하는 것이다. 요즘 이용 가능한 면역 테스트들은 낮은 전문성, 민감성을 가지고 있으며 군체형성과 감염사이를 식별하는데 실패한다.

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특허법인충정
등록일
2004-11-26
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스킨케어 및 트리트먼트 제품들 조제시의 양모 내 지질

양모 내 지질이란 천연추출물로서 세라마이드와 인체 층 각질에서 발견되는 것과 유사한 성분이 상당량 포함되어 있다. 양모 내 지질 추출 방법과 스킨케어및 트리트먼트용 제품에 이를 이용하는 방법이 제시되어있다. 리포좀과 같은 구조의 이 지질은 피부의 거칠어짐을 예방하고 건강한 피부상태의 수분을 유지시켜주며 손상된 피부에 수분을 공급하여 회복을 촉진시켜준다.이 창안은 중량의 25% 이상이나 되는 세라마이드를 함유하고 있는 양모 내 지질을 추출하는 방법과 화장품 및 스킨케어용 약품에 이용하는 방법을 제시한다.층 각질은 가장 바깥쪽 표피층이다. 이층은 세라마이드나 다른지질이 풍부하게 함유되어 있는 지질 메트릭스 속의 죽은 각질세포로 구성되어 있다. 층 각질의 세포사이 지질은 외부손상에 대한 피부의 보호기능 유지에 중요한 역할을 하며 수분균형을 이루어 적정피부상태를 유지시켜준다.다양한 스킨케어와 트리트먼트 제품에 천연 또는 합성으로 세라마이드가 사용되고 있다. 콩 레시틴, 누에 유충, 뽕나무 잎에서 얻은 세라마이드가 많이 함유된 천연 추출물들에 대한 기술이 있었다. 하지만, 화장품이나 스킨케어 제품에 사용될 합성 세라마이드를 실제 보급함에 있어, 특성은 더 나으면서도 구하기 쉽고 저렴한 재료에서 세라마이드가 풍부하게 함유된 천연추출물을 새로이 찾을 필요가 있었다. 이 물질은 다양한 품종의 양의 섬유로부터 추출하며 잘 알려진 기술에 의해 세척과정을 통해 섬유 표면의 지질을 제거한다. 그 다음 CO2의 임계초과 추출이나 soxhlet를 통한 추출과정을 거치는데 예를들어 섬유제조와 같은 산업공정동안 물리적인 성질은 보존된다. 추출과정 동안 사용된 용매는 후에 제거된다. IWL 분석에 의하면 세라마이드가 인체의 각질층과 유사한 조직을 가지고 있다고 한다.얻어진 IWL은 생리학적으로 지방친화성 용매 또는 수용성 상태의 리포좀 구조에서 사용가능하며, 그 안정성과, 취급과 조제가 용이하고 뛰어난 피부 흡수력을 지녔기 때문에 스킨케어나 용 의약품이나 화장품으로 합성하기에 적합하다. 이 리포좀은 각질층의 지질구조와 유사하여 피부상태를 개선해주는 다른 지질 내용물들과 합성하기에 용이하다. 리포좀은 피부에 대한 IWL 효과를 평가하는데 종종 사용되어 왔다. 이것은 비침투성 생물리학적 기술로 측정가능하다. TEWL(표피 수분상실)은 피부 보호도에 있어 민감한 지수로서, Tewameter로 측정된다. 피부 습도는 피부 정전용량을 측정하는 Corneometer로 결정된다. IWL 효과는 손상되지않은 건강한 피부와 기계적/ 화학적으로 손상된 피부 모두에서 측정할 수 있다. 리포좀은 손상되지 않은 피부에 바를 때 피부 보호성을 강화시키며 수분유지력을 향상시킨다.혁신적인 사항:양모에서 추출한 지질은 상당량의 세라마이드를 함유하고 있으며 이것은 저렴하고 이용이 간편한 천연물질로서 스킨케어와 트리트먼트에 이용할 수 있다. 지질로 이루어진 리포좀 구조로 된 양모내 지질은 인체의 각질층과 유사하여 피부와 조화력이 뛰어나다. 주요장점:이 물질의 추출과 상업화에 관심있던 회사가 이 연구에 공동 출자했으며 합작사업을 할 화장품관련 회사들을 찾고있다. 양모는 구하기 쉬우며 가격이 저렴한 천연 물질로서 상당량의 세라마이드를 함유하고 있다. 위와 같은 분야에서 의약품이나 화장품으로 이용하기에 아주 좋은 재료이다.

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특허법인충정
등록일
2001-07-27
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동물 진균증 면역진단법

높은 수준의 IgG 항체를 진단할 수 있는 간접적인 ELISA 기법을 개발. 감염된 동물의 여러 곰팡이에 대한 항체를 파악할 수 있는 새로운 방법이 개발되어 개, 고양이, 양, 소 등의 체계적인 진균증 진단이 가능해짐.질환의 특성, 경제적 손실, 감염성 때문에 곰팡이 질병은 수의약학에서 중요한 위치를 차지하고 있음. 병원성 곰팡이의 대부분은 부생식물(saprophyte)이고 이를 격리한다고 하여 발병과정에서의 원인을 밝힐 수 있는 것은 아님. 새로운 방법들 중 혈청기법이 간편하고 경제적이며 신속함. Madrid 수의학교 임상균학 실험실이 감염된 동물의 높은 수준의 IgG 곰팡이 항체를 진단할 수 있는 간접적인 ELISA 기법을 개발. 혁신적인 사항:불특정한 증상으로 인해 진균증의 체계적 진단은 상당히 어려움. 그러한 이유로 초기 단계에서는 균류 병인을 의심하게 되나, 곰팡이를 차단하는 것이 적절한 진단방법은 못됨. 유용한 사후 진단으로는 조직병리학 기법이 사용됨.그러나, 높은 특이성과 실질적인 조숙성을 보여 초기에 효과적인 치료가 가능한 이러한 진행과정에는 면역진단법이 가장 유용한 기법이라 할 수 있음. 얻어진 측정결과를 질병의 발병정도와 연계하여 감염된 동물의 반응을 점검할 수 있음. 주요 장점:애완동물이나 가축의 건강상태를 파악할 수 있는 사용이 간편하고, 신속, 효율적인 진단법

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특허법인충정
등록일
2001-07-27
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난소암의 가능한 표시자로 쓰이는 도플러 유속 파형의 붕괴 상수

악성 골반 종양은, 전형적으로 증가된 혈관형성을 보이고 이로 인해 신혈관 형성을 나타낸다.; 이는 양성종양과 비교했을 때, 악성 난소 종양에서 더 낮아진 방해물로 나타난다. 이 혁신은, 종양을 특성화 할 수 있는 시점에 있는 대상 기관에서, 비침습적, 정성적, 정량적인 혈액순환의 측정을 가능하게 한다.도플러 유속 기술은 대상 기관에서 비침습적, 정성적, 정량적 혈액순환의 측정을 제공한다. 이 연구의 목적은, 심장수축 후 붕괴 커브의 묘사를 바탕으로 난소암에서의 유속 파형의 붕괴상수를 평가하고, 이 변수를 종양을 특성화 하는 것이다. 난소에서 양성과 악성 발견물 간의 구별을 개선하는 부가적인 기능적 지표도 따라서 얻어진다.혁신적인 사항:이 예비 연구는 도플러 유속파형의 붕괴상수가 악성과 양성 종양간의 구별을 가능케 한다는 것을 가리키며, 따라서 폐경 후 환자의 악성 난소종양을 진단함에 있어서 부가적인 지표로써 상당한 도움을 줄 수 있을 것이다.주요장점:이 방법은 다음과 같은 적용분야가 있다.- 난소종양의 차별화된 진단 (난소암의 조기 발견)- 다른 기관들의 손상에 대한 차별화된 진단(악성과 양성종양의 다른 흐름 특성에 근거하여)- 비침습적, 정성적, 정량적인 혈액순환 측정

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특허법인충정
등록일
2001-07-20
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인체 유두종바이러스(HPV: Human Papiloma Virus) 식별을 위한 진단 키트

생명공학 제품의 제조와 판매에 매우 특화된 이탈리아 SME는 인체 유두종바이러스 식별을 위한 혁신적인 진단 키트를 개발했다. 이 테스트의 목적은 다양한 병원의 식별을 필요로 하는 진단학적 수요를 충족시키고 동시에, 운영자에게 큰 스케일의 적용방법을 공급하기 위함이다.이 발명은 환자의 항문 성기조직 부분에서 채취한 세포샘플안의 인체 유두종바이러스를 식별하기 위한 방법과 도구들로 구성되어 있다. 이 방법은 세과정으로 이루어진다.: DNA 추출, 확대, DNA 시퀀스의 파악. 특히 이 테스트의 확대과정은, 바이러스 게놈의 보완적인 late(L)와 early(E) 부분인 변질된 시발체를 통한 다양한 HPV의 파악에 기반한다.이 발명의 주요 목적은 HPV 식별을 위한, 특히 게놈이 세포의 DNA안에 합성되어 있을 때의 바이러스 존재 위치를 밝혀내는 진단 테스트의 효율성을 개선하는 것이다. 이 발명은 각각의 감염과정에서 바이러스를 식별할 수 있게 해주는, HPV 게놈 뉴클레오티드 시퀀스의 식별에 기반을 두고 있다. 이 시퀀스들은 저위험과 중, 고위험의 바이러스를 구별할 수 있도록 해 준다.혁신적인 사항:구성의 독창적 부분:- L1 부분이 없을 경우일 지라도, 모든 샘플에 대한 바이러스 연구의 응용.- L1과 E6/E7 부분들에 대한 동시적 연구- 단일 확대 도표를 통한, 종양발생적 진행에 관련된 고/중 위험 HPV와 세포 변형의 낮은 위험 HPV의 구별- 잘못된 음성 샘플의 숫자 감소- HPV 양성 환자들의 쉬운 추적조사 주요장점:- 사용자 친화적 실행.- 빠른 진단 (추출, 확대, 식별을 포함 총 4시간). - 잘 보존된 게놈 부분(L1)과 바이러스(E6/E7)의 통합 경우를 위한 특정 시발체 - 필요한 샘플량의 감소: 5에서 1로. - 단인 확대 도표.- 아가로우스 겔에서의 전기 이동이 미리 투입된 ethidium 브롬화물로 2-4% 착색

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특허법인충정
등록일
2001-07-20
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