일반기술
생명과학 > 효소공학 (H73)
실크(견사)를 효소분해하여 견단백질인 피브로인을 얻고 이를 염화칼슘과 에탄올에 반응시켜 투석하여 얻은 용액에 단백질 분해효소인 플라보자임 및 액티나제로 분해하여 동결건조한 후 분발상의 피브로인 펩타이드를 제조하는 기술종래 기술은 강산 혹은 중성염 만을 사용한 분말로서 불규칙한 분자량의 분포로 인하여 기능성의 극대화를 기대할 수 없고, 산 혹은 염을 사용함으로써 분자량의 조절이 매우 어려울 뿐아니라 중화를 하고 난 뒤에도 고분자량 혹은 가혹한 조건을 사용함으로써 특정 수소이온농도에서의 단백질 분자들 사이의 인력 및 반발로 인한 겔화, 침전물 그리고 저분자화로 인한 필요성분의 급속한 유출 등이 생기는 등 제품 공정상의 제한성을 불러일으키고 있는 문제점이 있었다. 이에 본 기술은 실크 피브로인을 단백질 분해효소로 분해하여 펩타이드를 제조하여 체내 흡수율이 높고 항산화 작용과 알코올 분해능력이 탁월하여 기능성 식품 또는 의약품으로 사용되는 활성물질의 개발에 기여한다. 기능성의 극대화를 기하기 위해 실크를 단백질분해효소를 이용하여 분해하여, 실크분말을 펩타이드화하여 실크 펩타이드를 제조하는 것으로, 흡수율을 높이고 기존의 방법에 비해 규칙적인 펩타이드를 얻을 수 있는 특징이 있다.
- 보유기관
- 한국산업은행
- 등록일
- 2001-05-18
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일반기술
생명과학 > 미생물자원
본 기술은 내산성 및 항균성이 우수한 유산균주에 관한 것으로, 특히 항균성을 이용하여 항생제 대체 및 생육에 이용할 방부제 등에 이용될 수 있으며 위에서 강산성 위액에 사멸되지 않고 활력을 유지하고 위와 소장 내에 상존하는 각종 병원균에 대한 항균성을 가진 유산균의 증식배양방법에 관한 것으로서, 리보플라빈과 니코틴산 및 발육자극제로서 엽산과 피리독살을 첨가한 배지에서 돼지 위 점막으로부터 분리한 유산균을 증식시키는 기술이다.본 기술에 따라 돼지 위의 점막으로 부터 분리하여 필수 영양소와 발육촉진을 증진시키는 발육자극자를 포함한 배지에서 증식된 유산균은 항균성 및 내산성이 우수하여 강산성의 위액에서 활력을 잃지 않고 위 점막에서 생존할 수 있어 건위작용과 정장효과를 크게 향상시킬 수 있으며 항생제를 대체할 수 있는 물질 및 생육에 이용할 방부제로서 개발할 수 있다.
- 보유기관
- 한국산업은행
- 등록일
- 2001-05-18
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일반기술
생명과학 > 기타 생명과학
본 기술은 국내산 누에 핵다각체병 바이러스 브이비2(KCTC8873P)의 p10 단백질 유전자를 클로닝하고 그 유전자 구조를 분석하였으며 이를 이용하여 외래유전자 발현용 전이벡터 피비엠10을 제작하고, 그 전이벡터에 표지유전자로 베타-갈락토시다아제 유전자를 삽입하여 누에 세포주에서 발현 여부를 분석한 결과, 그 전이벡터에 의한 재조합 바이러스는 다각체를 형성하면서 베타-갈락토시다아제를 발현하여 전이벡터로서 기능을 가지고 있음을 확인하였다. 따라서 본 기술은 국내산 누에 핵다각체형 바이러스 브이비2의 p10 단백질 유전자를 이용한 전이벡터 피비엠10과 이에 의한 재조합바이러스 제작과 외래유전자 발현 및 유용물질 생산에 적용할 수 있다. 본 기술은 유용물질의 대량 생산시 경구접종에 적합한 다각체를 형성하는 재조합 바이러스를 제작할 수 있는 새로운 전이벡터를 국내산 누에 핵다각체병 바이러스 브이비2의 p10 유전자를 이용하여 제작하였으며, 이를 이용하여 효율적으로 외래유전자 발현 및 물질생산에 응용하는 방법을 제공하는데 그 목적이 있다.본 기술의 누에 핵다각체병 바이러스 브이비2의 피10 유전자 발현 벡터는 생물공학과 곤충 바이오텍에 있어서 유용물질 대량생산 수단으로 활용할 수 있으며, 특히 발현효율을 고려하여 누에 생체를 이용할 경우에 유용하다.
- 보유기관
- 한국산업은행
- 등록일
- 2001-05-18
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일반기술
생명과학 > 미생물자원
비오틴이 다량 함유된 폐당밀 등의 배지에서 브레비박테리움속이나 코리네박테리움속의 균주를 이용하여 회분식 당첨가 방법에 의한 발효 방법으로 L-글루타민산을 생산함에 있어서, 발효도중 발생하는 거품을 제거하기 위해 사용하는 소포제로서 L-글루타민산 투과성에 영향을 미치는 소포제와 미생물 활성에 영향을 미치는 소포제를 배양시기에 따라 달리 첨가함으로써 소포제의 사용량을 현저히 감소시키면서 L-글루타민산을 고농도, 고수율로 생산할 수 있다.즉, 미생물 생육기에는 폴리에텔계 소포제를 사용하여 투과성을 증가시켜주고, 미생물생육이 정지되고 L-글루타민산을 생성하는 시기에는 지방산계 소포제를 사용함으로써 미생물 활성이 높게 유지되었으며, 종래의 발효법에 비해 L-글루타민산의 생산성이 향상되게 하는 기술이다.일반적으로 L-글루타민산 생산에 사용되는 미생물은 호기성 미생물로서, L-글루타민산 발효시 다량의 산소 공급을 필요로 한다. 또 미생물을 이용한 L-글루타민산 제조방법에서 비오틴이 과량으로 존재하는 페당밀 등을 원료로 사용하는 경우 미생물 생육을 억제하고, L-글루타민산 생산을 촉진하기 위해 배양초기 또는 배양 도중에 계면활성제를 첨가하게 되는데, 이 계면활성제는 기포제로 작용하여 발효기안에 다량의 거품이 발생하게 된다.L-글루타민산 발효는 미생물 생육면에서 볼 때, L-글루타민산을 생성하는 균체는 분열증식이 없으며, 역으로 분열 증식하는 균체는 L-글루타민산을 축적하지 않는다. 즉, 미생물 생육기와 L-글루타민산 생성기가 구별되어 있어서 일정량의 균체를 증식시킨 후 계면활성제 등으로 처리하여 세포막내 지방산조성을 바꿈으로써 세포막의 투과성을 증가시키고 미생물의 증식을 정지하게 된다.그러므로, 미생물 생육기에는 폴리에텔계 소포제를 사용함으로써, 세포막에 계면활성제의 치환이 용이하도록 하여 투과성을 증가시켜 L-글루타민산 생성을 촉진시키고, 미생물 증식이 정지된 후 글루타민산 생성기에는 지방산계 소포를 사용함으로써, 화학적인 미생물 활성저해를 최소화하여 고농도 고수율의 글루타민산을 생성할 수 있었으며, 아울러 소포제 사용량을 현저히 감소시켜 제조원가를 절감할 수 있게 되었
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- 특허법인충정
- 등록일
- 2001-05-20
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일반기술
생명과학 > 미생물자원
발효액에 고농도의 5-크산틸산이 존재하는 경우에도 전환손실을 최소화하고 5-크산틸산을 5-구아닐산으로 전환시키는 능력이 강한 변이주를 얻기 위해, 브레비박테리움 암모니아게네스 ATCC 6872를 변이처리하여 얻은, 데코이닌 및 폴리옥시에틸렌 알킬아민에 대해 내성을 갖는 브레비박테리움 암모니아게네스 MW-6643을 친주로 이용하였으며, 삼투압에 내성을 갖고 5-크산틸산을 5-구아닐산으로 전환시키는 능력이 우수한 변이주를 얻는 기 발효법에 의해 5-구아닐산을 제조하는기술로서, 5-구아닐산은 정미성을 갖는 핵산계 조미료로 널리 알려져 있으며, 5-크산틸산을 전환시켜 제조할 수 있다. 본 기술은 삼투압 내성을 가지며 5-크산틸산을 5-구아닐산으로 전환시키는 능력을 갖는 브레비박테리움 암모니아게네스 변이주를 고농도의 5-크산틸산을 함유하는 배지 또는 5-크산틸산 배양액에서 배양함으로써 종래의 방법들보다 그 전환율을 향상시키는 것이다. 본 기술은 데코이닌 및 폴리옥시에틸렌 알킬아민에 대해 내성을 갖고, 삼투압을 내성을 가지면서 5-크산틸산을 5-구아닐산으로 전환시키는 능력이 우수한 브레비박테리움 암모니아게네스 변이주 및 변이주를 제공하고 있다.
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- 특허법인충정
- 등록일
- 2001-05-20
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일반기술
생명과학 > 미생물자원
에쉐리시아 콜리의 돌연변이주중 L-페닐알라닌 생산균주를 배양 배지에서 배양하여 배지내에 고농도의 L-페닐알라닌을 생산 및 축적시키고 배지로부터 L-페닐알라닌을 회수하는 발효법에 의한 L-페닐알라닌의 공업적인 제조방법에 관한 것으로서, L-페닐알라닌은 미생물의 생합성 경로가 복잡하고 방향족환을 갖는 구조식의 영향 등으로 생산수율은 일반적으로 대단히 낮으며, 생육이 불량하여 발효지연 등의 문제점이 있는데, 이를 극복한 에쉐리시아 콜리MWWJ 304가 개발된 바 있다. 그러나 이 균주는 37℃에서 L-타이로신을 첨가하지 않으면 생육이 극히 저조하여 배양액 내에 L-페닐알라닌이 거의 생산, 축적되지 않고, L-타이로신을 과량으로 첨가하면 생육은 크게 향상되나 L-페닐알라닌의 생산성이 극히 저조한 단점이 있었다. 이에 본 기술은 이러한 MWWJ 304를 모주로 하여, L-타이로신을 고농도로 함유한 배지에서 L-페닐알라닌 생산성이 우수한 변이주 에쉐리시아 콜리를 선별하는 방법을 개발하였으며, MWWJ 304의 단점들을 보완할 수 있다. 변이처리된 균주는 L-타이로신을 고농도로 함유한 배지에서도 L-페닐알라닌을 생산하는 변이균주 주변에 검정균주의 생육환이 나타나게 된다. 이러한 변이균주중 검정균의 생육환을 빠르고 크게 생성시키는 균주를 선별하여 그중 L-페닐알라닌 생산성이 가장 우수한 균주를 최종적으로 선별하였다. 선별된 에쉐리시아 콜리 MWTR 42는 모주인 MWWJ 304와 비교하였을 때 다음과 같이 생리학적 성질에 있어서 상이하게 나타났다.1. 고농도의 L-타이로신 함유 배지에서도 L-페닐알라닌 생산성이 우수하다.2. 온도 변화에 따라 생육을 위해 L-타이로신의 보충을 요구하는 온도 감수성 타이로신 우수성이 약화되었다.3. L-페닐알라닌 아날로그와 L-타이로신 아날로그를 함께 포함한 배지에서도 생육이 우수하다
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- 특허법인충정
- 등록일
- 2001-05-20
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일반기술
생명과학 > 미생물자원
5-이노신산-함유 발효액에 대하여 내성을 갖는 변이주중 친주에 비하여 5-이노신산의 생산성이 향상된 균주, 변이주 브레비박테리움 암모니아게네스 MW-5520을 개발하였으며, 이 새로운 변이주는 그 친주와 유사한 형태학적 및 배양학적 특성을 나타낸다. 즉, 그람양성균이며, 포자를 형성하지 않고, 불규칙한 형태를 갖고 있다. 그러나, 이 새로운 변이주는 친주와 비교하여 5-이노신산을 함유하는 발효액에 대하여 높은 내성을 갖기 때문에 배지에 고농도의 5-이노신산을 축적할 수 있다5-이노신산은 정미성을 가지고 있는 핵산계 조미료로 널리 알려져 있는 물질이다. 종래에 미생물적인 방법을 사용하여 5-이노신산을 제조하는 방법은 아데닌 요구성 균주를 이용하는 방법 망간 비감수성주를 이용하는 방법 등이 있으나, 상기한 방법을 포함하는 대부분의 방법들은 5-이노신산 축적량이 적거나 하이포크산틴이 부생산되고 발효배지중의 망간이온 농도 혹은 아데닌 농도를 제한하여 주어야 하는 어려움이 있다.본 기술은 기존에 개발된 변이주 MW-2369를 보다 더 개량하여 5-이노신산의 생산성을 향상시키고자 하였으며, 그 결과로서 5-이노신산-함유 발효액에 대하여 내성을 갖는 변이주중 친주에 비하여 생산성이 향상된 균주, 변이주 브레비박테리움 암모니아게네스 MW-5520을 선별할 수 있었으며, 이 변이주는 5-이노신산을 고농도로 생산할 수 있다
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- 특허법인충정
- 등록일
- 2001-05-20
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일반기술
생명과학 > 미생물자원
스트렙토키나제 및 스트렙토도르나제를 고역가로 생산하는 신규 미생물 및 이 미생물을 배양하여 상기 화합물을 제조하는 방법에 관한 것으로서, 값싼 배지, 특히 아르기닌 이용성이 증가하고 카제인 분해능이 우수하여 아르기닌과 미분해 카제인을 함유하는 배지에서 스트렙토키나제와 스트렙토도르나제를 동시에 생산할 수 있는 스트렙토코커스 속의 새로운 변이주를 제공하는 것을 목적으로한다. 본 기술에서는 미생물 기탁기관인 유전자은행(KCTC)으로부터의 스트렙토코커스속(sp. KCTC 3098) 균주를 모주로 하여 자외선(UV)과 유기변이제인 NTG를 이용하여 돌연변이 처리함으로써 아르기닌 이용성이 증가된 변이주를 선별하였으며 이를 이용하여 계속 변이처리한 후, 카제인 분해능이 우수하면서 스트렙토키나제 및 스트렙토도르나제의 역가가 매우 향상된 변이주를 선별하였다본 기술의 균주를 배양하여 스트렙토키나제와 스트렙토도르나제를 생산하는 방법에서는 균주를 아르기닌 및 미분해 카제인을 함유하는 저렴한 배지에서 배양하는 것이 가능하고 고역가의 효소를 생산하기 때문에 종래의 분해 카제인을 함유하는 배지를 이용한 방법에 비해 경제성이 우수하여 산업적인 규모의 실시가 가능하다스트렙토키나제는 용혈성 스트렙토코커스에 의하여 생산되는 균체의 단백질의 일종으로 분자량이 46-50 kDa 정도인 폴리펩타이드이며 혈액성분인 플라스미노겐을 플라스민으로 활성화시키는 혈전 용해인자로 작용한다. 또한 스트렙토도르나제는 스트렙토키나제와 함께 생성되는 균체의 단백질의 일종으로 핵단백 용해인자로 작용하며 이들 두 효소는 적절한 비율로 혼합되어 복합소염 효소제로 널리 이용되고 있다.스트렙토키나제와 스트렙토도르나제를 제조하는 종래의 대부분의 방법들은, 스트렙토키나제의 생성역가가 너무 낮아 산업화가 어려운 단점이 있었으며, 또한 시스테인 이용성이 증가된 미생물 변이주를 이용하여 스트렙토키나제 역가를 크게 증가시킨 방법도 있으나, 배지성분 중 효소처리하지 않은 카제인을 사용하였을 경우 효소 처리한 카제인을 사용하였을 경우에 비해 생성된 스트렙토키나제의 역가가 낮아진다고 하고 있어서, 효소 처리한 카제인의 가격이 효소 처리하지 않은 카제인의 가격보다 2-3배 정도 비싼 점을 감안할 때 이 방법 역시 생산원가가 높아지는 단점이 있었다.본 기술의 균주 스트렙토코커스 sp. MSK-1209는 스트렙토코커스 sp. KCTC 3098을 모주로 하여 변이처리를 통해 선별되었으며 아르기닌 이용성이 증가하고 카제인 분해능이 우수하기 때문에 아르기닌 및 미분해 카제인을 함유하는 배지에서 고역가의 스트렙토키나제와 스트렙토도르나제를 동시에 생산하는 장점을 갖는다
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- 특허법인충정
- 등록일
- 2001-05-20
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일반기술
생명과학 > 미생물자원
균주는 ß-갈락토시다제를 생산하는 미생물인 바실러스 속 A1 균주를 친주로 하여 변이처리를 통해 선별된, 고전이 활성의 ß-갈락토시다제를 생산하는 바실러스 속 MWG 4442 균주이며, 이 균주를 발효배지에서 배양하여 ß-갈락토시다제를 축적하고 배양액으로부터 상기 효소를 회수함으로써 고전이 활성을 갖고 대사물질 리프레션이 어느 정도 해제된 ß-갈락토시다제를 생산할 수 있는 기ß-갈락토시다제는 유당(lactose)을 가수분해하여 포도당과 갈락토스로 분해하는 기능을 갖는 효소로, 동식물 및 미생물에 존재한다. 이 효소는 기원에 따라 가수분해활성과 동시에 갈락토스의 전이활성을 갖기도 한다. 본 기술에서는 ß-갈락토시다제의 기원에 다라 그 가수분해 활성과 갈락토스 전이활성이 다름에 착안하여 전이활성이 높은 균주를 선별할 수 있었다.본 기술에 의해 개발된 변이주 MWG 4442는 친주에 비해 15배 이상 높은 ß-갈락토시다제 생성능을 나타내고 있다
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- 특허법인충정
- 등록일
- 2001-05-20
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일반기술
생명과학 > 미생물자원
미생물을 배양하여 스트렙토키나제와 스트렙토도르나제를 동시에 제조하는 방법이다. 배양후의 배양액으로부터 두 효소의 회수공정을 간단히 하고 제조원가를 낮추기 위해 발효 배양액내에 생성되는 스트렙토키나제 및 스트렙토도르나제의 역가비율이 특정비율로 조절되는 조건을 확립하는 것으로, 미생물을 발효조에서 배양할 때 배양조건, 특히 교환기의 팁스피드(tip speed)를 적절히 조절함으로서 배양액 중에 생성된 상기 두 화합물의 역가 비율이 회수공정이 용이한 4:1의 비율의 범위에 들도록 함으로써 스트렙토키나제와 스트렙토도르나제를 동시에 제조하는 방법이다.본 기술에 따르면, 발효 완료 후에 별도로 스트렙토키나제의 역가와 스트렙토도르나제의 역가를 약 4:1의 범위로 조절하기 위한 설비나 그에 따른 작업 없이 목적하는 최종 산물을 얻을 수 있다 스트렙토키나제와 스트렙토도르나제 생산능을 갖는 미생물을 배양하여 스트렙토키나제와 스트렙토도르나제를 동시에 생산하는 방법에 있어서, 배양시에 팁스피드를 적절히 조절함으로써 배양액중에 생성되는 스트렙토키나제와 스트렙토도르나제의 역가 비율을 3.8-4.2:1로 조절하는 기술로서, 스트렙토키나제는 용혈성 스트렙토코커스 균주에 의하여 생산되는 균체외 단백질의 일종으로 분자량이 46-50kDa 정도인 폴리펩타이드이며 혈액성분인 플라스미노겐을 플라스민으로 활성화시키는 혈전용해 인자로 작용한다. 또, 스트렙토도르나제는 스트렙토키나제와 함께 생성되는 균체외 단백질의 일종으로 핵단백 용해 인자로 작용하며, 이들 두 효소는 적절한 비율로 혼합되어 복합소염 효소제제로 널리 이용되고 있다. 시중에 시판되고 있는 복합소염 효소제제들의 최종 완제품내의 스트렙토키나제와 스트렙토도르나제의 함량비는 일반적으로 4:1이다. 그러나 미생물을 배양하여 상기의 화합물을 제조할 때 발효액으로부터 효소를 분리 정제하는 과정에서 두 효소의 역가비율을 4:1로 맞추기 위해서는 잉여의 스트렙토키나제를 분리해내어 제거해야 하는데 이에 따라 회수설비의 증가 및 제조원가가 상승하게 된다이에 본 기술에서는 배양조건중 교반속도가 빨라지면 배양되는 미생물의 생육형태에 영향을 주어 생육을 높게 하고 이에 따라 스트렙토키나제 역가는 유지되는 반면 스트렙토도르나제 역가가 향상됨을 밝혀내어 기술에 적용하였다.
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- 특허법인충정
- 등록일
- 2001-06-21
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일반기술
생명과학 > 미생물자원
세팔로스포린계 항생제 제조에 필수적 전구체인 세팔로스포린C와 7-aminocephalosporanic acid(7-ACA)의 탈아세틸화 반응을 촉진하는 효소와 이의 유전자에 관한 것으로서, 토양으로부터 순수 분리한 신균주가 생산하는 신규한 효소를 세팔로스포린계 항생제 제조 공정에 이용하여, 세팔로스포린계 항생제의 생산성을 향상시키는 새로운 방법을 제공하는데 그 목적이 있다. 본 기술자들은 토양에서 강력한 세팔로스포린C 디아세틸레이즈 활성을 가지는 바실루스종(DS1152)을 분리하였으며, 이 균주로부터 활성효소를 코딩하는 신규 유전자를 분리하였다. 분리된 유전자를 유전자 재조합법에 의해 대장균하에서 여러 가지 벡터시스템으로 대량 증폭하였다. 그 증폭된 효소단백질의 생화학적 특성을 분석한 결과, 기보고된 것과 효소의 생화학적 특성이 상이하게 구분되며, 특히 세팔로스포린C에 대한 기질 친화력과 반응성이 우수하였다세팔로스포린C와 7-ACA 같은 세팔로스포린계 화합물은 아세틸기가 제거됨으로써, 고부가가치 세팔로스포린계 항생제 제조에 반합성 중간체로 이용된다.본 기술에서는 토양에서 신규 세팔로스포린 디아세틸레이즈를 분비하는 신균주를 순수 분리하여, 그 신균주를 동정한 결과 바실루스종으로 확인하고 이 균주를 바실루스 DS1152로 명명하였으며, 이 신균주로부터 디아세틸 세팔로스포린 C, 디아세틸 7-ACA 및 디아세틸 2-메톡시미노-2-푸릴-아세틱 세팔로스포린산 생산에 관여하는, 신규 세팔로스포린 디아세틸레이즈 유전자를 분리하여, 유전자 서열 및 아미노산 배열을 분석하여 신규 효소임을 밝혔다.또, 이 신규 유전자에 의해 코딩된 신규 효소를 분리, 정제하여 생화학적 성질을 조사하였고 분리된 신규 효소의 유전자를 유전자 재조합 기술로 조작하여, 대장균에서 대량으로 증폭, 발현을 하였다. 이 때 발현된 효소는 분자량 24kDa으로, 구조 형태는 이중체로 구성되어 있다.이 신규 재조합효소는 다양한 세팔로스포린계 중간체에 우수한 기질 반응성을 보유하고 있음을 균체 및 효소를 고정화하여 확인하였다. 이러한 신규 기술을 이용하여 세팔로스포린계 반합성 중간체 제조에 응용함으로써, 기존의 합성법보다 산업적으로 매우 유리한 신규 기술을 확립하였다. 본 기술의 효소를 세팔로스포린C와 7-ACA의 탈아세틸화 반응에 이용함으로써, 기존의 다단계 화학합성 공정중 일부 공정의 제거 및 단축이 가능하며, 반응부산물 생성 및 중간체의 분해를 방지함으로서 산업적 생산수율의 향상에 기여할 수 있다
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- 특허법인충정
- 등록일
- 2001-06-26
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일반기술
생명과학 > 미생물자원
L-쓰레오닌은 필수 아미노산의 일종으로서 쌀의 제 2 제한 아미노산이다. 지금까지 알려진 바로는 아미노산 수액제제, 종합 아미노산 제제의 의약용도와 식품의 영양강화제나 건강음료 등의 용도로 사용되고 있다. 최근에는 L-라이신과 함께 사료에 첨가되므로 그 수요가 급증하고 있는 아미노산 중의 하나이다. 본 기술에서 분리된 신균주 에스케리차 DSM9806은 L-메치오닌과 L-이소로이신의 요구성을 갖고 있으며 친주 DSM454와 같이 알파메칠세린에 내성을 가지며, 플로로피루베이트에 감수성과 디아미노석신산에 내성을 가진 변이주임을 확인할 수 있었다. 본 기술의 신균주가 친주에 비하여 현저하게 L-쓰레오닌을 배양약내에 축적시키는 원인에 대하여 확실하게 밝혀지지는 않았으나 L-쓰레오닌의 유사물질인 알파 메칠세린의 내성에 의해 L-쓰레오닌의 생합성 경로에 있어서 L-쓰레오닌의 저해나 억제 등이 해제되었고, 플로로피루베이트 감수성부여에 의해 일반적인 미생물이 생합성하고 있는 구연산회로를 친주보다 적게 회전하고 있어 생육에 필요한 산소의 양이 적게 필요하게 되며 회전량의 감소로 포스포에놀피루베이트 카르복실레이즈에 의해 L-쓰레오닌 전구물질 공급이 충분하게 되는 것으로 판단되어 진다. 또한 디아미노석신산 내성에 의해 L-쓰레오닌 생합성 관련효소들의 저해나 억제 등의 간섭이 해제되어 배양액에 L-쓰레오닌이 다량 축적되는 것으로 판단된다미생물의 발효에 의한 L-쓰레오닌을 제조함에 있어서, L-메치오닌, L-이소로이신을 동시에 요구하는 에스케리차속의 균주를 이용하여 플루오로 피루베이트에 감수성을 나타내며 디아미노석신산과 알파메칠세린에 내성을 갖는 변이주를 분리하여 글루코오스 등의 당류를 탄소원으로 호기적 배양에 의한 고농도의 L-쓰레오닌을 발효액내에 축적시키는 방법에 관한 것으로서, 신균주 에스케리차 DSM9806은 쓰레오닌의 생합성 경로가 특이적으로 변형되어 통상의 에스케리차 콜리 균주배양시 배양중 통기교반의 한계에 의해 배양액내 용존산소 농도가 저하되고 용존산소 농도의 고갈로 혐기성 발효가 진행되어 아세트산이 축적되고 L-쓰레오닌의 생산성이 저하되던 기존의 문제를 해결하여, 통기교반이 저하된 상태에서도 배양액내에 다량의 L-쓰레오닌을 축적할 수 있는 방법을 개발하였다. 또한 균체 증식으로 인한 통기교반의 문제점인 미생물 배양시 배지조성의 양으로 제어하는 일반적인 방법과는 달리 미생물의 기본특성을 변화시켜 배양상 물리적 인자를 해결한데 그 의의가 크다고 하겠다
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- 특허법인충정
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- 2001-05-20
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일반기술
생명과학 > 미생물자원
L-쓰레오닌은 필수 아미노산의 일종으로서 쌀의 제 2 제한 아미노산이다. 지금까지 알려진 바로는 아미노산 수액제제, 종합아미노산제제의 의약용도와 식품의 영양강화제나 건강음료 등의 용도로 사용되고 있다. 최근에는 L-라이신과 함께 사료에 첨가되고 있으므로 그 수요가 급증하고 있는 아미노산중의 하나이다. 본 기술에서는 L-쓰레오닌 생산능이 있는 공시균주 에스케리차속의 미생물 KCCM 10133을 친주로 하여 통상의 변이처리방법에 의해 친주보다 L-쓰레오닌과 L-글루타민산의 첨가시 균의 생육이 양호한 즉, L-쓰레오닌과 L-글루타민산에 내성을 나타내는 균주 DSM9807을 유도하였다. 이 분리주를 이용하여 통상적인 방법으로 미생물을 배양할 때 친주에 비하여 다량의 L-쓰레오닌이 발효액내에 축적된다는 사실을 밝혀내었다 미생물의 발효에 의한 L-쓰레오닌을 제조함에 있어서, L-메치오닌, L-이소로이신을 동시에 요구하는 에스케리차속의 변이주 DSM 9806을 이용하여 L-쓰레오닌과 L-글루타민산에 대한 내성을 갖는 변이주를 분리하고 글루코오스 등의 당류를 탄소원으로 호기적 배양에 의한 고농도의 L-쓰레오닌을 발효액내에 축적시키는 방법에 관한 것으로서, 쓰레오닌을 생산하는 미생물의 생육적 특성을 변화시켜, 쓰레오닌 발효시 목적 생산물인 L-쓰레오닌 또는 미지의 발효 부산물인 유기산 및 타 아미노산에 대한 내삼투압을 강화하여 L-쓰레오닌 생산성을 향상시킬 수 있는 미생물과 이를 이용한 L-쓰레오닌 제조방법을 제공하는데 그 목적이 있다.본 기술은 에스케리차 DSM 9806을 변이 처리하여 L-쓰레오닌의 내성과 L-글루타민산에 내성을 갖는 신균주를 이용, L-쓰레오닌의 생산성을 크게 향상시킨 기술로서, L-쓰레오닌을 생산하는 일반적인 에스케리차속의 미생물 및 친주 DSM 9806의 경우 L-쓰레오닌 발효공정의 후반에 나타나는 유기산과 디아미노산 등의 발효 부산물 축적에 의해 L-쓰레오닌의 생산성을 저해하는 현상이 있었으나, 본 기술의 신균주는 L-쓰레오닌과 삼투보호제로 알려진 L-글루타민산에 대한 내성증가에 의해 생육 및 L-쓰레오닌의 생산성을 크게 향상시켰다
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- 특허법인충정
- 등록일
- 2001-05-20
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일반기술
생명과학 > 기타 생명과학
기초 펩티드보다 낮은 농도에서 포스포리파제 C(PLC)의 활성을 특이적으로 증가시킬 수 있는 펩티드 및 여기에 표지물질을 결합시킴으로써 면역 활성화를 일으키는 펩티드 수용체를 탐색할 수 있도록 제조된 면역활성 펩티드 수용체 탐색용 프로브에 관한 것으로서, 펩티드들을 체계적으로 탐색하는 펩티드 혼합물(peptide library) 시스템을 이용, 면역세포 활성화의 초기 신호를 간편하게 측정하여 면역 조절 물질을 탐색함으로써 새로운 면역세포 활성화 펩티드를 탐색하고, 이 탐색된 펩티드를 기초로 D-형 아미노산 치환을 통하여 면역세포 활성화 작용이 있는 여러 종류의 변이체 프로브를 제공하는 것이다. 본 기술은 사람 면역세포인 U266 세포와 사람 림프세포인 U937 세포에서 PLC의 활성을 증가시키는 것으로 알려진 펩티드를 변형시켜 개발된 것으로, 면역세포 PLC의 활성을 증가시키는 펩티드 MKYMPM 또는 WKYMVM 중 6번째 아미노산을 D-형으로 치환시킨 펩티드들과, 상기 펩티드에 동위원소, 바이오틴 또는 형광물질을 결합시켜 펩티드 수용체를 탐색할 수 있는 프로브로 구성되어 있다.면역세포인 T 및 B 임파구들의 활성화 및 분화과정은 생명체의 중요 방어 기능인 면역 체계의 초기 조절에 핵심적인 단계이다. 이들의 초기 활성화는 면역원이나 세포표면의 단백질들이 임파구 세포막의 수용체들과 일련의 적절한 결합을 통하여 세포내로 신호를 전달함으로써 개시되며, 이러한 면역세포들의 초기 활성화에 영향을 미치는 물질들을 찾음으로써 면역 조절제의 개발이 가능할 것으로 생각되고 있다.그러나 면역세포 활성화 신호 전달의 초기 현상에 대한 규명은 극히 최근에야 이루어진 연구들로서, 이를 대상으로 한 체계적인 면역 조절 물질의 탐색이나 개발은 아직 이루어지지 않고 있다.이에 본 기술에서는 수억 종류의 펩티드 서열을 포함하는 펩티드 혼합물을 합성하고, B 임파구의 초기 활성화에 수반되는 포스포이노시티드의 분해에 따른 이노시톨 포스페이트의 생성량을 측정하는 방법에 의해 면역세포 활성화 펩티드를 탐색할 수 있었다. 본 기술의 펩티드 프로브들은 기존의 펩티드와 같이 U266 세포 및 U937 세포에서 PLC를 특이적으로 활성화시키는 면역증강제의 역할을 하며, 세포의 생리활성 및 조절을 연구하는 수단으로 이용될 수 있을 뿐만 아니라, 펩티드에 대해 특이적인 수용체가 여러 세포주내에 존재하는지의 여부를 확인할 수 있고, 더 나아가서는 세포주가 아닌 여러 종류의 1차 세포나 조직에서 펩티드에 특이적인 수용체의 존재를 확인할 수 있어 펩티드가 실제 생체내에서 어떠한 의미를 가지며 어떠한 기능을 하는지에 관한 연구에 지대한 영향을 끼칠 것으로 사료된다.본 기술은 치환에 의해 PLC 활성을, 기본이 되는 펩티드에 비해 월등하게 증가시켜 면역증강제로 사용할 수 있으며, 또 탐색용 펩티드 프로브는 U266 세포와 U937세포의 세포표면 수용체에 결합함으로써 PLC를 활성화시킬 수 있을 뿐만 아니라, 펩티드에 대해 특이적인 수용체가 세포표면내에 존재하는지 여부를 확인할 수 있다.
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- 포항공과대학교
- 등록일
- 2001-05-20
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일반기술
생명과학 > 기타 유전자 공학
결핍시 각기병 유발되는 비타민 B1인 티아민을 합성하는데 있어 중요한 효소인 유채 티아민 모노포스페이트 피로포스포릴레이즈(TMP-PPase) 유전자 및 그 분리방법에 관한 것이다본 기술의 목적은 티아민이 보강된 식물체를 개발하기 위해, 기존의 기능성 보상 방법을 변형하여 식물에 속하는 유채로부터 TMP-PPase 유전자를 분리하고, 그 분리방법을 제공하는 것이다. 본 기술은 유채 cDNA 라이브러리 플라스미드를 도입한 TMP-PPase 결손 대장균을 티아민이 결여된 액체 선택배지에서 배양한 후, 이 배양액을 동일한 액체 선택배지에 희석하여 배양하고, 다시 이 배양액을 아가로스 평판 선택배지위에 도말한 후 배양하여 콜로니를 얻고, 이 콜로니로부터 플라스미드를 얻은 다음 제한 효소로 절단하여 TMP-PPase cDNA 유전자를 분리하는 방법이다. 본 기술에 의하면, 상기 유채 TMP-PPase cDNA 유전자는 식물에서 최초로 확인된 것으로, 티아민이 보강된 식물체의 개발에 유용하게 사용될 수 있다. 또한 본 기술의 유전자 분리방법은 기존의 기능성 보상방법에서의 배양을 희석배양으로 변형함으로써 티아민과 같이 미량으로 기능하는 물질의 합성에 관련된 효소 유전자의 분리에 매우 유용하게 사용될 수 있다.티아민(비타민 B1)은 필수 영양소로, 세포 대사에 관여하는 다수 효소에서 조효소로 작용한다. 티아민은 보통 음식물을 통해 섭취되는데, 티아민이 보강된 식물체가 개발된다면 각기병의 예방 및 치료를 통해 인류의 건강증진에 기여할 것으로 기대되고 있다. 그러나 식물체내의 티아민은 극히 미량이어서, 연구의 어려움이 매우 크고 실제로 식물에서 티아민의 합성 및 조절 기작에 대하여도 거의 알려지지 않고 있으며 더 나아가 티아민 합성에 경로중에 가장 중요한 역할을 하는 효소인 TMP-PPase의 유전자에 대하여는 전혀 보고된 바가 없는 실정이다. 본 기술에 사용한 유전자 분리방법은 종래 잘 알려진 기능성 보상(functional complementation) 방법을 변형한 것으로, 종래의 방법에서는 기능성 유전자가 도입된 미생물로부터 회복된 기능에 관련된 물질의 일부가 세포외로 방출된 후 기능이 상실된 다른 미생물에 의해 다시 흡수되는 단점이 있어, 미량으로도 기능을 발휘하는 티아민 등의 합성에 관여하는 기능성 유전자에 이 방법이 직접 적용될 경우, 기능성 유전자가 도입된 미생물의 선별이 불가능해진다. 본 기술에서는 TMP-PPase cDNA 유전자가 도입된 대장균에서 이 유전자 산물에 의해 대장균 자신의 상실된 TMP-PPase 활성이 보상됨으로써 티아민이 합성되어 티아민이 없는 선택배지에서 생존할 수 있으며, 배양액을 다시 희석 배양함으로써 이 대장균으로부터 합성된 티아민의 일부가 세포밖으로 방출되더라도 인접한 대장균에 흡수되어 이용되는 문제점이 없다
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- 포항공과대학교
- 등록일
- 2001-05-20
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일반기술
생명과학 > 미생물자원
메비놀린산을 생산하는 균주인 아스퍼질러스 테리우스(Aspergillus terreus)를 토양에서 분리하고 자외선 또는 화학물질에 의한 돌연변이를 유발시켜, 지방산 및 폴리케타이드(polyketide) 항생제의 생합성 억제제인 세룰레닌에 내성을 갖는 변이주 및 메비놀린산 생합성 과정에서 메틸기 공여물질인 엘-메치오닌의 유사체에 대해 내성을 갖는 변이주를 각각 얻은 다음, 이들 변이주를 세포융합시켜 얻은, 세룰레닌과 엘-메치오닌 유사체에 대한 동시 내성, 메비놀린산의 고생산성 및 메비놀린산 유사체 생성의 최소화를 나타내는 변이주 CLS216-7 및 이 변이주 CLS216-7를 영양배지에서 호기적으로 배양하고 메비놀린산을 회수하는 공정을 포함하는 메비놀린산의 제조방법에 관한 것이다.본 기술의 변이주CLS216-7은 모균인 아스퍼질러스 테리우스 CKL031 및 친주 CKL043에 비해 메비놀린산의 생성능이 15배 이상 증가되었으며 부산물(메비놀린산 유사체)의 생산량이 약 90% 이상 적게 생산하는 장점을 갖고 있으며, 또한 모균과는 달리 탄소원인 글루코스 및 갈락토스에 의한 메지놀린산 생산의 저해가 현저히 완화되는 특징을 갖고 있다.
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- 특허법인충정
- 등록일
- 2001-05-31
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일반기술
생명과학 > 미생물자원
면역 억제물질인 사이크로스포린 A(Cyclosporin A)를 생산하는 균주인 톨리포크라디움 인풀라툼(Toypociadiuminflatum) 야생균주를 토양에서 분리하여 이 균주에 자외선을 돌이변이원으로 아미노산 요구성 균주를 개발하고 다른 2개의 영향 요구주를 세포융합시켜 아미노산 및 유기태 질소원의 이용성이 증가하면서 사이클로스포린 A를 많이 생산하는 고생산 세포융합변이균주 KD461을 만들고, 이들 세포융합변이균주에 적합한 배양조건 및 배양 방법을 확립하여 액침 발효법에 의한 사이클로스포린 A 생산방법에 관한 것이다.사이클로스포린 A는 11개의 아미노산으로 구성된 환형 펩타이드로서 5, 11 위치에 발린 및 4, 6, 9, 10위치에 루이신의 아미노산 및 그 유도체가 각각 위치한다. 사이클로스포린 A 생산균주인 톨리포클라디움 인풀라툼 NRRL 8044는 아미노산들중에서 L-발린과 L-루이신을 배지에 첨가하면 사이클로스포린 A를 선택적으로 생성함이 알려져 있다. 본 기술에서는 사이클로스포린 A 생성을 증폭시키는 방법으로 토양에서 체취한 사이클로스포린 A를 소량 생산하는 톨리포클라디움 인풀라툼 야생균주를 돌연변이시켜서, 목적산물의 구성물질로서 전구체의 가능성이 있는 아미노산인 L-발린과 L-루이신의 영양 요구주를 각각 만들어 그들의 영양 요구성을 증폭시킨 후, 두가지의 영양 요구주를 세포융합시켜 L-발린과 L-루이신의 요구성이 동시에 증가되어 목적산물인 사이클로스포린 A의 생성능력이 증폭된 세포융합변이균주 KD461을 만들었다.융합주 KD461은 맥아-효모 추출물의 고체 배지상에서 친균주에 비해 균증식이 다소 느리고 콜로니의 색깔이 연회색으로 더 짙고 콜로니 뒷면은 짙은 갈색을 띄는 특성을 갖고 있다. 또한 액체 배양에서는 균사가 다소 짧고 두꺼우며 분절 포자의 형성이 많다.아미노산으로 첨가해주는 L- 발린과 L-루이신 및 유기태 질소원의 요구량이 증대되어 사이클로스포린 A의 생성량이 크게증가되는 특징을 보여 친균주에 비해 약 50배의 사이클로스포린 A 생성능을 갖고 있어서 친균주와는 다른 새로운 변이주임을 보여준다.
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- 특허법인충정
- 등록일
- 2001-05-30
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일반기술
생명과학 > 미생물자원
전분 및 이의 가수분해물등의 탄소원과 옥수수 침출액(corn steep liquor) 및 면실분(cottonseed meal)등의 유기태 질소원을 주원료로 한 영양배지에 스트렙토마이세스 오레오파시엔스(Streptomyces aureofaciens)의 새로운 세포 융합균주를 배양하여 배양액 중에 데메칠클로르테트라싸이클린[demeth-ylchlorteracycline(DMCT)의 축적을 최소로 하면서 목적산물인 데메칠테트라싸이클린(DMT)의 회수를 쉽게 할 뿐 아니라 미노싸이클린으로의 화학적 전환을 용이하게 한 데메칠테트라싸이클린의 제조방법에 관한 것으로, 오트밀 한천배지에서 회갈색의 포자를 형성하고 배양액중에 데메칠클로르테트라싸이크린(DMCT)은 소량 축적하지만 목적산물인 데메칠테트라싸이클린(DMT)을 상대적으로 많이 생산하는 스트렙토마이세스 오레오파시언스(Streptomyces aureofaciens) 세포융합변이주 CKD-3562 KCTC 8526P를 선발하고 이를 탄소원, 에너지원 및 질소원을 함유한 배지에서 배양하여 데메칠테트라싸이클린(DMT) 및 데메칠클로르테트라싸이클린(DMCT)을 생성, 축적시킨후, 데메칠테트라싸이클린을 분별채취함을 특징으로 한다.본 기술에 따른 고역가 세포융합변이주 스트렙토마이세스 오레오파시언스 CKD 3562(KCTC 8526P)는 공지의 친균주인스트렙토마이세스 오레오파시언스 ATCC 12551과 비교하여 다음과 같은 형태적 특성을 갖는다. 두 균주의 기균사(aerial mycelium) 말단은 방선균 특유의 나선형을 하고 있으나 세포융합주는 기균사의 길이가 다소 짧은 편이며 포자 형성능이 미약했던 친균주에 비하여 포자 형성능이 월등히 향상되었다. 특히, 세포융합주는 오트밀 한천배지에서 회갈색의 포자를 형성한다. 또한, 본 기술에 따라 선발된 세포융합주는 배양도중 알카리나 산의 첨가 없이도 생리적으로 목적산물의 생산최적 pH가 자동적으로 조절되어 발효 공정상의 불편한 점을 해소함과 동시에 pH조절시 야기될 수있는 사고를 근원적으로 방지할 수 있으며, 원료중 성분이 불균일한 옥수수 침출물(cornsteep liquor)의 농도에 따른 발효성적의 편차가 적고, 포자를 잘 형성하여 균주의 보존, 균주의 개발등에 유리한 점을 갖는 등의 장점을 갖는다.
- 보유기관
- 특허법인충정
- 등록일
- 2001-05-30
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일반기술
생명과학 > 미생물자원
미생물의 세포융합체로부터 클라불란산(clavulanic acid)를 제조하는 방법에 관한 기술로서, 클라불란산을 생성하는 미생물을 돌연변이시켜 아미노산 요구 변이주를 얻고 세포융합방법에 의해 클라불란산의 생산능이 크게 향상된 세포융합변이주의 제조 및 그 융합주를 이용하여 클라불란산을 고농도로 배양액 내에 축적시키는 기술이며, 사용된 균주는 클라불리저러스 세포융합변이주 CKD-1386 KCTC, 8522P 균주이다.세포융합 방법에 의하여 클라불란산의 생산능이 크게 향상된 신규의 고역가 세포융합 변이주를 제조할 수 있고, 이를 이용하여 목적산물인 클라불란산을 고농도로 얻을 수 있어 산업적으로 매우 유용한 기술이다. 독립적으로 항생제로 사용되거나 항생제의 효능을 높이기 위해 타 항생제와 병용투여 할 수 있다
- 보유기관
- 특허법인충정
- 등록일
- 2001-07-18
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일반기술
생명과학 > 기타 유전자 공학
생체시계 및 개화시기 조절에 관여하는 애기장대(Arabidopsis thaliana)의 자이겐티아(GI) 유전자 및 이의 분리에 관한 것으로, 애기장대의 티아민 리콰어링 1 유전자(TH1)를 이용한 지도-기초 클로닝 방법에 의하여 분리함으로써, 서열 1의 염기서열을 포함하는 GI 유전자 및 이의 돌연변이체를 제공함으로써, 타생물체의 개화시기 조절 유전자를 탐색하는데 탐침으로 사용될 수 있고 생체시계 관련 형질의 개선에 유용하게 이용될 수 있다.애기장대의 GI 유전자는 식물에서 최초로 클로닝된 개화조절 및 생체시계 관련 유전자로서, 하이포코틸의 길이, 당대사 조절, 지베렐린이나 에틸렌등의 호르몬 생산, 일장 감응성 식물의 개화기 결정 등의 생체시계 관련 생리 생화학적 현상들의 개선에 대한 유전공학적 방법 적용시 유용하게 이용될 수 있으며, 특히 인위적인 개화시기 조절은 경제적 파급효과가 매우 크며 거의 모든 농작물에 직접 적용 될 수 있다는 점에서 그 이용범위 및 유용성이 무한하다.
- 보유기관
- 포항공과대학교
- 등록일
- 2001-06-05
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