일반기술
보건·의료 > 의약품 제제 개발 기술
C형 간염바이러스(HCV) 단백질 분해효소의 활성에 의하여 리포터 단백질이 절단되어 활성을 갖도록 만들어진 벡터를 이용한 C형 간염 치료제의 탐색방법 기술이다. 단백질 분해효소의 활성을 저해함으로써, 바이러스에 기인하는 질병중의 하나인 C형 간염을 치료하고, 바이러스의 복제 시스템이나 정제된 단백질 분해효소의 분석시스템을 이용하여 C형 간염 치료제로서 응용될 수 있는 바이러스의 단백질 분해효소 저해제를 탐색하는 방법이다.HCV 단백질 분해효소의 유전자와 리포터 유전자인 분비성의 알칼리성 인산가수분해효소(SEAP) 유전자가 동일한 벡터에 위치하며, HCV 단백질 분해효소의 활성에 의존하여 리포터 단백질이 절단되어 그의 활성을 나타내도록 발현벡터를 제조하고, 이를 포유동물 세포에 전이시켜 배양함으로써 HCV 단백질 분해효소의 저해제를 탐색한다HCV는 비A형, 비B형 간염의 주요 원인으로 , 약 60% 정도의 높은 빈도로 만성간염으로 전이되며, 이 중 20%의 환자에서 간경변증과 간암으로 진전되는 것으로 알려져 있다. HCV에는 두 가지 단백질 분해효소가 존재하는 것으로 알려졌으며, 이 바이러스의 단백질 분해효소는 다단백질의 프로세싱, 바이러스 입자의 성숙 및 바이러스의 숙주 감염에 중요한 역할을 한다.현재 HCV 단백질 분해효소의 저해제 탐색을 위한 효과적인 HCV 복제 시스템이나 정제된 단백질 분해효소의 분석시스템은 아직까지 개발되어 있지 않은 상태이다. 본 기술은 HCV 단백질 분해효소를 코딩하고있는 NS3/NS4A 유전자 부위와 SEAP 유전자를 포함한 발현벡터를 제공하고 있다. 이 발현벡터에서 SEAP 유전자는 HCV의 NS4A/NS4B 절단부위에서 HCV 단백질 분해효소 유전자와 연결되어 있어, 단백질분해효소의 활성이 있을 때만 SEAP의 N-말단 신호서열이 노출되어 SEAP가 분비된다. 따라서, 이 발현벡터로 전이된 포유 동물세포의 배양액에 포함된 SEAP의 활성을 측정함으로써, HCV 단백질 분해효소의 활성을 평가할 수 있다. 본 HCV 단백질 분해효소의 저해제 탐색방법은 민감하고 정량적이며, 간단하고 신속하기 때문에, 이러한 방법으로 선별된 저해제는 HCV의 복제에 필수적인 HCV 단백질 분해효소의 활성을 저해하므로 C형 간염의 치료제로 이용될 수 있
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- 포항공과대학교
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- 2001-06-20
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보건·의료 > 의약품 제제 개발 기술
초임계 유체 추출법으로서, 목적 물질을 포함하는 추출물중 목적 물질에 비해 극성인 성분들을 초임계 유체인 이산화탄소에 비교적 잘 용해되지 않은 성질을 이용하여 선택적으로 제거해주고, 비극성 물질인 지질 계열의 화합물들은 전처리 공정인 흡착 공정을 통해 흡착제에 상대적으로 친수성인 물질들을 흡착시키고 지질 물질과 같은 소수성 물질들만의 접촉 기회를 증가시켜, 소수성 친화력에 의해 서로 응집되어 석출되도록 함으로써, 흡착 공정을 통해 지질 계열의 화합물을 미리 제거하여 식물체 대사 물질을 추출한다.식물체 대사 물질의 초임계 유체 추출시 전처리 공정으로 흡착 공정을 추가하여 대상물질 외에 다른 물질들을 미리 제거함으로써 수율 및 선택도를 향상시켜 목적하는 식물체 대사 물질을 보다 효과적으로 추출할 수 있다.유용하게 사용되는 대표적인 식물체의 대사 물질로는 주목에서 추출되는 항암제인 탁솔, 은행나무에서 추출되는 혈액순환제인 캠페롤 등이 있는데, 현재까지 이들 물질들은 전통적인 용매 추출법에 의해 생산되고 있다. 그러나, 이러한 용매 추출법은 불필요한 물질들까지 모두 추출해 내어 여기에서 미량의 목적물질만을 정제하여야 하기 때문에 많은 시간과 비용이 소요될 뿐만 아니라, 인체에 해로운 유기 용매가 최종 생산물에까지 잔존하는 문제점이 있다.이러한 단점을 개선하기 위한 방법으로 초임계 이산화탄소 및 보조 용매로 에탄올을 사용하여 목적물질을 추출하는 초임계 유체 추출법이 보고되었는데, 종래의 용매 추출법에서의 과다한 유기용매의 사용으로 인한 환경오염 문제는 배제할 수 있었으나 용매 추출법에 비해 수율이 크게 낮은 단점을 나타내었다. 이에 비해 본 기술은 초임계 유체 이산화탄소를 이용한 추출공정에서 문제가 되는 식물체 내의 비극성 물질을 미리 제거해 주기 위해 전처리공정의 일환으로 흡착제를 이용하여 대상물질의 선택적 추출을 도모할 수 있는 신기술로서, 흡착제를 이용한 전처리 공정에서 식물체 내의 지질 계열의 비극성 물질들을 제거해 주고 초임계 유체 추출공정을 통해 극성 물질들을 제외한 대상 물질들만을 선택적으로 추출함으로써 최종 생산물의 선택도와 순도의 향상을 가져올 수 있으며, 경비를 크게 격감시킬 수 있다. 또한 후속의 분리에 소요되는 시간 및 비용을 절감할 수 있어 공정의 경제성을 증대시킬 수 있다
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- 포항공과대학교
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- 2001-05-11
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보건·의료 > 의약품 제제 개발 기술
피코르나바이러스를 코딩하는 바이러스 유전자와 피코르나바이러스의 전사 해독프레임내에 위치하는 C형 간염바이러스(HCV) 프로테아제 NS3를 코딩하는 프로테아제 유전자와 HCV 프로테아제 NS3의 타겟 부위를 코딩하는 타겟 유전자를 포함하는 C형 간염 대체 바이러스를 코딩하는 재조합 유전자와 이 재조합 유전자에 의하여 발현되는 대체 바이러스의 증식을 억제하는 물질을 검출하는 공정을 포함하는 항C형 간염 바이러스제의 스크리닝 방법 및 이 대체 바이러스를 항C형 간염 바이러스제의 존재하에 증식시키고 증식 능력을 측정하는 공정을 포함하는 항C형 간염 바이러스제의 활성 측정방법이다. 따라서 종래 항C형 간염 바이러스제 개발에 있어서의 문제점을 해결하기 위하여, 조직 배양시스템에서 증식이 잘 일어나며 항C형 간염 바이러스제의 효능을 효과적으로 검정할 수 있는 HCV의 대체바이러스를 제공한다.비A형 간염, 비B형 간염의 주요한 병인자는 HCV로 알려져 있으며 이 바이러스는 간염, 간경변 및 간암 등의 간질환을 일으킨다고 보고되고 있다. HCV에 대한 항바이러스제를 개발하기 위해서는 항바이러스 효과를 나타내는 물질을 찾아내거나, 항바이러스제의 효능을 검정할 수 있는 시스템이 필요한데, HCV를 직접 사용하여 항C형 간염 바이러스제를 스크리닝하거나 항바이러스 효능을 검정하는 것은 매우 어렵기 때문에, 항바이러스제의 효능을 테스트하기 위해서는 HCV의 특징적인 면을 나타내는 대체 바이러스의 개발이 시급하다.본 기술에서는 HCV와 소아마비 바이러스의 특성에 기초하여 HCV 프로테아제의 활성이 있을 때에만 살 수 있는 유전자 재조합 소아마비 바이러스를 생산하였다. 재조합 바이러스에 있어서 증식 및 다른 세포의 감염에 필요한 단백질들은 소아마비 바이러스의 유전자에 의하여 만들어지며 여기에 HCV의 프로테아제와 그 프로테아제가 자르는 부위를 소아마비 바이러스의 유전자 앞에 첨가하여, HCV 프로테아제의 활성이 있을 때에만 이 재조합 바이러스가 증식할 수 있게 구성하였다. 재조합 바이러스를 이용하면 프로테아제 저해제를 기초로 하는 항C형 간염 바이러스제의 개발을 쉽고 정확하게 수행할 수 있다. 본 재조합 바이러스는 항C형 간염 바이러스제의 개발과 효과적인 효능검정에 유용하게 이용될 수 있다
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- 포항공과대학교
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- 2001-06-19
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그레이브스 질환에 특이적 자가면역항체에 억제작용이 있는 펩티드로서, 갑상선 자극 호르몬 수용체에 결합하는 펩티드를 라이브러리로부터 선별하고 이 펩티드가 그레이브스 질환 환자에서 갑상선 자극 호르몬에 의한 갑상선 호르몬의 합성에는 영향을 미치지 않으면서 갑상선 자극 호르몬 수용체에 대한 자가면역항체가 갑상선 자극 호르몬 수용체에 결합하는 것을 경쟁적으로 억제하여 결국 자가면역항체에 의한 갑상선 호르몬 합성을 억제하는 펩티드EXFDDA이다.본 기술의 펩티드는 그레이브스 환자 50%에 대하여 효과가 있는 것으로 나타났으며, 갑상선 자극 호르몬에 의한 갑상선 호르몬의 합성에는 영향을 미치지 않으면서, 자가면역항체에 의한 갑상선 호르몬의 합성을 억제할 수 있으므로, 그레이브스 질환의 진단시약 및 치료제 개발에 매우 유용할 것으로 판단된다정상적인 인간의 갑상선 호르몬은 자극 호르몬에 의하여 그 합성이 조절되는데, 그레이브스 질환은 이러한 조절없이 계속적으로 갑상선 호르몬을 합성하여 계속적으로 갑상선 기능이 항진되는 질환으로, 이는 그레이브스 질환의 환자가 갑상선 자극 호르몬 수용체에 대하여 자가면역항체를 가지고 있어 갑상선 자극 호르몬의 작용없이도 일련의 신호전달과정을 거쳐 계속적으로 갑상선 호르몬을 합성하는데서 기인한다.그레이브스 질환의 치료를 위하여 비선별적인 갑상선 기능저하제나 갑상선 조직제거 등의 외과 시술이 병행되고 있으나, 비선별적 갑상선 기능저하제를 사용할 경우 재발의 우려가 높으며 갑상선 조직을 제거할 경우는 지속적으로 갑상선 호르몬을 투여하여야 하고 비정상적인 신체 항상성을 가진다는 문제가 있다.이에 그레이브스 질환의 원인인 자가면역성 항체의 한 종류 기능을 억제하는 짧은 단백질 서열을 발견하여 이를 자가면역항체의 억제 펩티드로 이용함으로써, 기존의 방법들의 문제점을 극복하면서 보다 근본적으로 그레이브스 질환을 치료제를 개발하였다. 갑상선 자극 호르몬 수용체의 세포바깥부분인 1번에서 413번까지의 아미노산 서열을 대량으로 발현하고, 이를 항원으로 사용하고, 그레이브스 질환 환자의 면역글로블린 G를 첫번째 항체로 사용하여 그레이브스 질환 환자의 자가면역항체를 확인하는 ELISA 방법을 확립하였으며, 생화학적인 측면 및 임상실험을 통해 자가면역항체의 억제 효능을 검정하여 그레이브스 질환에 효과가 있음을 확인하였
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- 포항공과대학교
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- 2001-05-11
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보건·의료 > 의약품 제제 개발 기술
인간 엔지오제닌의 58번부터 70번까지의 아미노산을 암호화하는 염기서열에 대응하는 코돈에 의해 암호화되는 펩티드를 설계 및 화학합성하여 개발한 혈관신생 저해제이다.엔지오제닌과 액틴과의 결합이 엔지오제닌의 58번부터 70번까지의 아미노산들을 통해 이루어지며, 또 대응 유전자코돈(anticodon)에 의해 암호화되는 펩티드는 원래의 코돈에 의해 암호화되는 펩티드나 단백질과 높은 친화력을 갖고서 특이적으로 결합한다는 사실에 착안하여 개발하였다. 본 펩티드들은 인간 엔지오제닌과 그 수용체인 액틴간의 결합을 저해하면서도 인간 엔지오제닌에 의해 유도되는 혈관신생을 기존 혈관에는 어떠한 영향을 미치지 않고서 억제함으로써, 혈관신생이 필수적으로 요구되는 류머티스 관절염 및 당뇨성 실명증 등과 같은 질병의 치료제 또는 항암제 치료제로서 부작용없이 효과적으로 이용될 수 있다암세포의 성장과 전이, 류머티스 관절염 및 당뇨성 실명증 등의 여러 질병에서는 혈관신생이 필수적으로 요구되는데, 이때 혈관신생이 정교하게 조절되지 못하고 지속적으로 일어나게 된다. 한편 엔지오제닌은 생체내 존재하는 강력한 혈관형성 유도단백질로서, 이를 분비하는 인간 암세포들이 생체내에서의 성장 및 전이에 필수적으로 요구된다는 것이 밝혀졌다. 혈관형성에 있어서, 엔지오제닌과 혈관을 생성하는 내피세포의 표면에 존재하는 액틴이라는 수용체와의 결합은 필수적인 것으로 알려져 있다. 따라서, 엔지오제닌과 액틴간의 결합을 저해하는 물질은 엔지오제닌에 의해 유도되는 혈관형성을 저해할 수 있을 뿐만 아니라, 엔지오제닌을 분비하는 암세포의 성장과 전이도 저해할 수 있을 것으로 예측된다.본 펩티드들은 전립선암 세포인 PC-3를 이용하여 실험한 결과, 전립선 암세포의 성장에 직접적인 영향을 주지 않고서, 전립선암세포에 의해 유도되는 혈관형성을 특이적으로 저해하는 것으로 나타났다. 즉, 높은 친화력을 갖고서 특이적으로 인간 엔지오제닌과 직접 결합하며, 이러한 펩티드들과 엔지오제닌간의 결합이 엔지오제닌과 그 수용체인 액틴간의 결합을 저해하고, 결국 인간 엔지오제닌에 의해 유도되는 혈관신생을 억제하게 된다. 이때, 펩티드는 엔지오제닌과 액틴간의 결합을 농도의존적으로 저해한다. 따라서 종래 항암제에 있어서의 암세포 종류의 다양화, 항암제에 대한 내성획득, 암세포의 전이 등의 문제를 극복할 수 있는 새로운 개념의 항암제로서의 사용가능성을 가진 혈관신생 저해제로 이용될 수 있
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- 포항공과대학교
- 등록일
- 2001-06-18
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보건·의료 > 의약품 제제 개발 기술
황체형성호르몬 방출호르몬(LHRH; luteinizing hormone releasing hormone)과 리보뉴클레아제(RNase)의 결합체를 이용하여 황체형성호르몬 방출호르몬 수용체를 발현하는 세포의 성장을 저해시켜 암세포를 치료한다. 성호르몬 의존성 혹은 비의존성의 인간 전립선암과 유방암 세포, 인간 난소암 세포, 신암 세포들이 LHRH수용체를 발현하고 있다는 사실에 착안하고, 종래 독소들의 문제점인 강한 면역원성과 간에 대한 독성의 염려 없이 그리고 성호르몬 의존성 여부에 관계없이, LHRH수용체를 발현하는 각종 암세포를 선택적으로 사멸시킬 수 있는 LHRH와 혈청 RNase 혹은 다른 RNase계통의 독소를 연결시킨 LHRH-RNase결합체를 제조하고, 이를 LHRH의 수용체를 발현하는 세포에 주입하여 세포의 성장을 저해시킨다.본 LHRH-RNase 결합체는 LHRH 수용체를 발현하는 암세포에만 선택적으로 작용하여 그의 성장을 억제시키고, 그 억제능 또한 장시간 지속되므로 LHRH 수용체를 발현하는 암세포의 치료제로서 효과적으로 이용될 수 있다현재 호르몬 의존성 전립선암과 유방암의 치료는 외과적인 종양제거와 더불어 호르몬치료의 병행에 의해 수행되고 있으며, 호르몬 비의존성 전립선암과 유방암에 대해서는 일반적인 암 치료법인 화학요법 등이 사용되고 있으나, 암세포들이 항암제에 대해 빠른 내성을 획득하고, 항암제에 의한 부작용으로 인해, 새로운 암 치료제의 개발이 절실히 요구되고 있다.한편, 새로운 항암제로서 호르몬 또는 항체를 통해 특정 암세포에 선택적으로 결합하고, 세포내 이입과정을 통해 세포내로 전달된 독소가 암세포를 사멸시키는 호르몬독소 또는 면역독소가 제안되었으나, 이들 독소 물질들이 강한 면역원성과 간에 대한 독성을 갖고 있는 문제점이 발견되었다. 본 기술은 LHRH의 카르복시 종단이 카르복실기를 갖도록 하고, 화학물질을 이용하여 카르복실기를 활성화시킨 다음, 활성화된 카르복실기와 RNase A의 리신 아미노산 곁사슬에 위치한 1차 아민과 반응시켜, 두 물질간의 화학적 결합체이자 호르몬 독소인 LHRH-RNase A를 제조하였다. 따라서 종래 내성, 부작용 등의 많은 문제점을 안고 있는 항암제들의 문제점을 극복한, 호르몬독소를 이용하여 암세포를 사멸시키는 새로운 개념의 항암제로서, LHRH-RNase 결합체를 이용하여 LHRH 수용체를 발현하는 세포의 성장 저해방법을 제공한다. LHRH-RNase A 결합체는 LHRH에 의해 암세포 표면에 존재하는 LHRH 수용체와 결합하고, 세포내이입 과정을 통해 RNase A가 세포내로 전달되어 단백질 합성을 억제하여 암세포의 성장을 농도의존적으로 저해하는 바, LHRH-RNase A 결합체를 LHRH수용체를 발현하는 인간 전립선암세포와 유방암세포에 처리한 결과, 이 암세포들의 성장이 결합체의 처리농도에 비례하여 저해되는 것으로 나타났으며, 그의 저해능 또한 장시간(9일) 지속되었다
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- 포항공과대학교
- 등록일
- 2001-06-20
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보건·의료 > 의약품 제제 개발 기술
멜라토닌 합성 관련 효소인 세로토닌 아세틸화 효소의 촉진제 또는 저해제를 개발하는데 쓰이는 검색 기술이다. 미지의 시료에 의한 세로토닌 아세틸화 효소의 활성의 변화를 측정하는 방법을 개발하고, 이 방법을 이용하여 멜라토닌의 합성 촉진제 또는 저해제의 검출방법을 제공한다. 세로토닌 아세틸화 효소 유전자를 포함하는 발현 벡터로 형질감염된 세포 또는 송과선을 미지의 시료가 첨가된 배지에서 배양한 후 세포 또는 송과선을 파쇄하고 원심분리하여 세포 또는 송과선 추출액을 얻고 이 세포 또는 송과선 추출액을 방사능 표지된 아세틸 코에이 및 아세틸트립트아민 기질과 반응시킨 후 반응액을 수용액 및 수용액과 혼합되지 않는 신틸레이션 용액으로 구성되는 두 개의 액상계에서 분배한 후 신틸레이션 용액층의 방사능을 정량한다. 세로토닌 아세틸화 효소는 멜라토닌 생합성에 있어 속도결정 단계이므로, 검출된 세로토닌아세틸화 효소의 촉진제 또는 저해제는, 멜라토닌의 합성을 증가 또는 저해함으로써 수면장애 극복, 시차적용, 노화억제, 항암효과, 면역기능증대 또는 우울증의 치료에 매우 유용하다멜라토닌(N-acetyl-5-methoxytryptamine)은 동물의 송과선 및 눈의 망막에서 합성 분비되는 호르몬으로, 특히 장거리 비행 및 주야 교대근무 등으로 인한 수면장애 극복, 시차적응, 자유기 제거에 의한 노화억제, 항암효과, 면역기능증대 및 우울증 치료에 매우 유용한 것으로 알려지고 있다. 멜라토닌 생합성에 관련하는 대표적인 효소인 세로토닌 아세틸화 효소는 멜라토닌 생합성 과정의 속도 결정 단계인 세로토닌의 N-아세틸세로토닌으로의 전환을 촉매한다. 따라서 세로토닌 아세틸화 효소의 활성이 증가되면 결국 멜라토닌의 합성도 증가된다. 효소 활성 측정방법은 아세틸트립트아민과 아세틸 코에이의 유기용매에 대한 용해도 차이를 이용한 것으로, 두 개의 액상계에서 분배한 후 신틸레이션 용액층의 방사능을 직접 액체 신틸레이션 계수기를 사용하여 측정함으로써 반응산물인 아세틸트립트아민을 정량할 수 있다. 따라서 반응산물의 분리를 위한 별도의 과정이 필요하지 않으며 기존의 방법보다 간단,신속하고 저렴하게 세로토닌 아세틸화 효소의 활성을 정량적으로 측정할 수 있다. 또한 미량의 세로토닌 아세틸화 효소의 활성도 측정할 수 있는 방법이며, 세로토닌 아세틸화 효소를 생산하는 생체조직뿐 아니라 세로토닌 아세틸화 효소 유전자의 발현벡터로 형질전환된 동물세포에 대하여도 적용될 수 있는 장점이 있다
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- 등록일
- 2001-06-19
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보건·의료 > 의약품 제제 개발 기술
HIV-1에 특이적인 항체를 생성하는 플라스미드 DNA 및 그를 이용하여 HIV-1에 대한 면역반응을 증가시키는 방법으로 HIV-1의 gag, env 및 rev 유전자를 포함하고 그들을 발현시킬 수 있는 플라스미드 DNA와 면역시킬 포유동물의 인터루킨-2 유전자를 포함하면서 그들을 발현시킬 수 있는 플라스미드 DNA를 제조하여 AIDS 바이러스의 면역원으로 이용한다.지금까지 HIV-1 DNA 백신연구에 동물모델로서 적용된 적이 없는 쥐에 주입하여, HIV-1에 특이적인 항체의 생성 정도를 측정함으로써, AIDS 바이러스 백신으로서 효율을 검정하였다.플라스미드 DNA는 안전성, 제조,보관,운송의 편리성 측면뿐만 아니라, 백신으로서의 효과 측면에서 종래의 사백신이나 서브유닛 백신보다 매우 바람직하다. 종래의 AIDS 바이러스 백신은 다른 항원을 발현하는 플라스미드로 접종된 표준 그룹에 비해 약 10배 정도에 해당하는 항체 생성량을 나타낼 뿐이므로, 이보다 더 많은 양의 항체를 제공할 수 있는 새로운 플라스미드 DNA가 절실히 요구되는 실정이다.이에 AIDS 바이러스의 면역원으로 이용될 수 있는 신규의 플라스미드pCD-HIV/GE와 pCD-HIV/GE-IL2를 제조하였는데, 특히 HIV-1의 gag, env 및 rev 유전자와 쥐의 인터루킨-2 유전자를 포함하는 플라스미드 pCD-HIV/GE-IL2를 접종한 쥐의 항체 생성량은 쥐의 인터루킨-2 유전자가 포함되지 않은 플라스미드 DNA보다 3배 이상의 높은 항체량을 나타내었다. 또한, HIV-1의 gag, env 및 rev 유전자와 쥐의 인터루킨-2 유전자를 포함하는 플라스미드 DNA는 적은 주입 회수로도 면역반응 및 면역반응의 개체 수를 증가시켰다. 따라서, 인터루킨-2를 함께 발현하는 플라스미드 DNA 사용은 AIDS 바이러스 백신으로서 효율을 증가시킴을 알 수 있다.따라서 본 플라스미드는 종래 AIDS DNA 백신보다 높은 항체 생성량을 나타내고, 적은 주입 회수로도 면역반응의 증가 및 면역반응의 개체 수를 월등히 증가시킬 수 있어 AIDS DNA 백신으로서의 효과를 증진시키는 장점이 있다
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- 등록일
- 2001-05-10
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인간 면역세포에서 포스포리파제 C(PLC)의 활성과 관련하여 세포내 칼슘이온을 증가시키는 테트라머 펩티드로서, 테트라머 펩티드 라이브러리를 합성, 정제한 다음, 면역세포인 CEM 세포내 칼슘이온의 증가를 조사하기 위하여, mid-log phase로 분열하는 면역세포를 얻은 후 칼슘이온과 결합하는 염색물질 Fura-2/AM을 첨가하여 배양하고, 칼슘이온이 첨가되지 않고 EGTA 등이 첨가된 용액에 재현탁하여 흡광도를 측정하고 다시 펩티드 라이브러리를 각각 처리하여 그 흡광도 차이를 조사하여, 그 결과를 Grynkiewicz의 방법에 따라 세포내로 유리된 칼슘이온의 농도로 환산하여 확인함으로써 세포내 칼슘이온을 증가시키는 테트라머 펩티드를 선별한다. 본 펩티드는 사람 T세포주에 특이적으로 작용하는 면역증강제 또는 본 펩티드에 특이적인 수용체를 탐색할 수 있는 프로브로 사용될 수 있으며 이는 T 세포의 생리활성 및 면역조절 연구의 수단 등으로 사용된다생체 면역시스템에서 가장 핵심적인 역할을 하는 T 세포 등의 면역세포들의 활성화 초기 과정에서 PLC의 활성화와 세포내 칼슘이온의 유리 등이 중요한 역할을 하는 것으로 알려져 왔다. 이 과정에는 세포막의 수용체 단백질과 다른 세포의 단백질 또는 펩티드 사이의 결합을 촉진하거나 이와 유사 결합을 이루어 면역 기능을 활성화시킬 수 있는 펩티드들이 작용하는데, 본 펩티드는 면역세포의 초기 활성화 과정에서 세포막의 수용체 단백질과 다른 단백질의 결합을 촉진하는 활성 펩티드로서, 면역세포에서 PLC를 활성화시켜 세포내 칼슘이온의 분비를 촉진한다. 한편 섬유아세포, 신경세포 그리고 다른 면역세포인 B 임파구 세포 등에서 펩티드에 의한 세포내 칼슘 이온증가 효과를 조사한 결과 사람의 T 세포가 아닌 다른 면역세포들에서는 세포 활성화 효과가 없는 것으로 나타나, 사람 T 세포인 CEM 세포를 특이적으로 활성화시키는 것을 알 수 있었다.신규 펩티드는 면역증강제 또는 본 펩티드에 특이적인 수용체를 탐색할 수 있는 프로브로서 사용이 가능하다
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- 2001-05-11
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독감 바이러스의 적혈구응집소(hemagglutinin, HA), 유전자의 발현 플라스미드 DNA, 독감 바이러스의 핵단백질(nucleoprotein, NP), 유전자의 발현 플라스미드 DNA 및 인터루킨-6(Interleukin-6, IL-6) 유전자의 발현 플라스미드 DNA를 포함하는 독감 바이러스에 대한 DNA 백신으로, HA 유전자와 NP유전자는 독감 바이러스의 RNA로부터 적절한 프라이머를 사용하여 역전사-중합효소 연쇄 반응을 수행하여 얻는다.백신으로부터 발현되는 HA는 목적하는 독감 바이러스에 대한 방어 면역을 유도하고, NP는 다양한 독감 바이러스에 대해 작용하는 교차방어를 유도한다. 또한 IL-6은 면역조절 단백질로서 독감 바이러스에 대한 면역체계 형성을 증가시키는 작용을 한다.따라서 본 백신은 HA, NP 및 IL-6가 동시에 작용함으로써 각각을 단독으로 사용하는 경우보다 면역 및 교차방어에 대해 상승작용을 가진다.독감 바이러스는 매년 전세계적으로 발생하여 호흡기 질환을 일으키며, 합병증으로 폐렴, 심폐질환 등의 기관지 질환들을 수반하는 경우 치사율이 높아져 국민 보건에 미치는 영향이 크다고 할 수 있다. 현재까지 개발되어온 독감 바이러스 백신은 크게 사백신, 약독화된 생백신 및 DNA 백신으로 구분된다. 사백신은 세포성 면역반응을 유도하지 못하여 급성기에 감염세포의 제거가 효과적이지 못한 단점이 있고, 약독화된 생백신은 방어면역을 유발하지만 독감 바이러스 균주간의 다양성을 극복할 수 있도록 교차방어 효과가 보완되어야 한다. 본 DNA 백신은 HA, NP, IL-6를 혼합하여 사용함으로써 각각을 단독으로 사용한 경우보다 현저하게 높은 면역 효과 및 방어 효과를 가지며 종래 사백신이나 생백신에 비해 독감바이러스에 대해 면역반응 효과를 유도하며, 다른 균주의 감염을 교차방어하는 효과가 우수하다.
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- 포항공과대학교
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- 2001-06-19
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보건·의료 > 의약품 제제 개발 기술
계피 추출물 또는 초두구 추출물을 이용하여 동맥경화증을 치료하는 것으로 계피 또는 초두구의 에탄올 추출물을 클로로포름으로 다시 추출하고, 수용액층을 에틸아세테이트로 추출한 추출물과 에틸아세테이트 추출후 남은 수용액층을 부탄올로 추출한 후 추출물을 각각 췌장 콜레스테롤 에스터레이즈(pCEH) 효소반응을 통해 그 저해 활성을 측정하고, 동물실험을 통해 혈청 인지질 및 중성지질 함량과 콜레스테롤 함량, 동맥경화지수에 미치는 영향을 조사한 결과 동맥경화증의 예방 및 치료에 효과가 있다.추출물은 소장에서 식이 콜레스테롤의 분해 및 흡수를 매개하는 pCEH 활성을 특이적으로 저해함으로써, 식이 콜레스테롤의 체내 흡수를 현저하게 감소시켜 혈중 콜레스테롤 농도 증가를 방지하고 최종적으로는 동맥경화증의 예방 및 치료에 유용하게 이용될 수 있다. 또한 추출물은 동맥경화증 치료외에도 혈중 중성지질 농도를 감소시키므로 고지혈증을 치료하는 효과도 가진다.고콜레스테롤 혈증은 동맥경화증의 주요 발병요인이 된다. 콜레스테롤은 음식물로부터 과다하게 섭취할 경우 혈액을 따라 떠돌다가 혈관내막에 흡착되어 거품세포로 전환되는 원인이 되고 결국 동맥을 막음으로써 심장마비를 유발하며, 혈관에 축적되어 동맥경화, 협심증 등의 심각한 심혈관질환을 초래한다. 음식물로부터 섭취된 콜레스테롤 에스테르는 소장에서 췌장 분비 효소액에 포함된 pCEH에 의해 유리 콜레스테롤과 지방산으로 가수분해되어 소장내로 흡수되며, 이때 유리 콜레스테롤의 흡수가 소장 점막에 있는 pCEH에 의해 촉진되는 것으로 알려졌다. 따라서 pCEH 저해제는 식이 콜레스테롤의 분해 및 흡수를 막음으로써 섭취된 콜레스테롤에 의한 동맥경화, 심혈관계 질환을 예방 및 치료할 수 있게 된다. 계피 추출물 또는 초두구의 추출물은 pCEH 저해 활성을 가지는 것으로 나타났으며, 그중 특히 클로로포름 추출물이 현저한 효과를 보였다.계피와 초두구의 클로로포름 추출물 투여군은 각각 추출물의 투여량이 증가함에 따라 중성지질 함량이 현저하게 감소하였고, 한편 인지질 함량은 정상군, 대조군, 계피 클로로포름 추출물 투여군 및 초두구 클로로포름 추출물 투여군간에 차이점이 없는 것으로 나타나, 인지질 함량과 식이성 고지혈증은 무관한 것임을 알 수 있었다. 또한 계피 클로로포름 추출물 투여군과 초두구 추출물 투여군에서는 식이성 고지혈증이 감소되는 경향도 나타내었다.따라서 본 추출물은 동맥경화증 및 고지혈증의 예방 및 치료제로서의 효과를 가진다
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- 포항공과대학교
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- 2001-05-11
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보건·의료 > 의약품 제제 개발 기술
혈관신생(angiogenesis) 유도물질인 혈관벽세포 성장호르몬(VEGF) 활성을 저해하는 새로운 펩티드 및 이를 항암제, 혈관신생과 관련된 질병의 치료제로 사용하는기술이다. 혈관신생과정에서 중심적인 역할을 할 것으로 알려진 VEGF와 그 수용체간의 결합을 저해하는 물질을 개발하여, VEGF가 유도하는 혈관신생을 억제하고, VEGF을 분비하는 암세포의 성장과 전이도 막을 수 있는 새로운 항암제이다. 화학적으로 펩티드 무작위 서열 혼합물을 합성하고, 이 혼합물로부터 VEGF가 혈관벽세포에 존재하는 자신의 수용체에 결합하는 활성을 가장 효과적으로 저해하는 펩티드 서열을 분리하는 방법을 반복하여, 최종 분리된 펩티드의 서열을 결정한 결과, 1, 4, 6 번째 위치의 아미노산은 아르기닌이고, 2 번째 아미노산은 아르기닌, 라이신, 히스티딘에서 선택되며, 3, 5 번째 위치의 아미노산은 아르기닌, 라이신에서 선택된 여섯 개의 아미노산으로 구성된 서열을 포함하는 VEGF 길항작용 펩티드를 제공한다. 본 펩티드는 VEGF가 그 수용체에 결합하는 것을 저해하는 효과가 우수하므로 효과적인 항암제 또는 당뇨성 실명증, 류머티스 관절염 등의 혈관신생과 관련된 질병의 치료제 등으로 사용될 수 있다암세포의 성장과 전이, 류머티스 관절염 및 당뇨성 실명증 등의 여러 질병에서는 혈관신생이 필수적으로 요구되는데, 이때 혈관신생이 정교하게 조절되지 못하고 지속적으로 일어나게 된다. 혈관신생의 저해를 통한 암치료법은 종래의 암치료법들의 한계로 지적되던 암세포의 다양성, 암세포의 내성획득, 부작용 등의 문제점들을 극복할 수 있을 것으로 판단된다.한편, VEGF는 강력한 혈관형성 유도 단백질로서 혈관신생에 중요한 역할을 할 것으로 알려져, VEGF와 그 수용체간의 결합을 저해하는 물질은 VEGF에 의해 유도되는 혈관신생을 막을 수 있고, 또한 VEGF를 분비하는 암세포의 성장과 전이도 저해할 수 있을 것으로 기대된다. 이에 VEGF와 그 수용체간의 결합을 저해하는 물질로서 여섯 개의 아미노산으로 구성된 펩티드를 개발하였고, VEGF에 의해 유도되는 혈관벽세포의 DNA 합성을 농도에 비례하여 저해하는 것으로 나타나, 혈관벽세포의 성장을 억제하는 활성이 있음을 알 수 있었고, 달걀CAM에 VEGF와 상기 펩티드를 처리한 결과 VEGF에 의해 유도되는 혈관신생을 저해하는 것도 확인하였다. 또한 본 펩티드가 인간 근육종 암세포의 성장에는 직접적인 영향을 주지 않지만 이 암세포에 의해 유도되는 혈관형성을 특이적으로 저해하는 것으로 나타나, 암세포에 의해 분비되는 VEGF와 혈관벽 세포막의 표면에 존재하는 수용체와 결합하는 것을 저해함으로써 암세포에 의해 유도되는 혈관신생을 억제하고 있음을 보여주고 있다
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- 포항공과대학교
- 등록일
- 2001-06-20
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보건·의료 > 의약품 제제 개발 기술
허혈심근/재관류 손상성 심장장애와 퀴논계 화합물에 의한 심장독성을 예방하거나 치료함에 있어 아스파트산, 그의 생리학적으로 허용되는 염(ASP) 또는 그 혼합물을 유효성분으로 함유하는 조성물을 이용하는 기술이다. 허혈심근 재관류 손상으로 대표되는 심장의 조직 손상 및 기능 저하와 심근독성 약물에 의한 심장 손상으로부터 심근을 보호하기 위하여 ASP를 유효성분으로 정맥내 투여제형의 조성물이다. 본 기술에서는 ASP을 투여하여 세포내 NAD/NADH 비율을 증가시킴으로서 허혈심근의 재관류시 크산틴 옥시다제를 통한 산소라디칼 발생을 감소시켜 허혈/재관류 손상을 방지하고 심근 미토콘드리아 내막에서의 아드리아마이신의 산화환원순환반응을 억제하여 아드리아마이신 심독성을 감소시킬 수 있음을 보여준다.본 기술에 의하면, 아스파트산 또는 그의 생리학적으로 허용되는 염의 공급에 의해 심장의 여러 가지 병적 상태인 관상동맥질환, 심근경색, 각종 심장수술, 심장이식 등의 경우에 초래되는 허혈심근/재관류손상 뿐만 아니라 아드리아마이신과 같은 퀴논계 약물에 의한 심장의 조직손상과 기능저하를 예방하고 치료를 도울 수 있다ASP는 발효, 추출 또는 합성방법에 의하여 얻어지며 여러 가지 형태로 존재할 수 있는 아미노산이다. ASP는 세포내 NAD/NADH의 비를 교정함으로써 알코올대사를 원활하게 촉진할 수 있으며, 또 조직내 이용과정에서 산소라디칼 생성계를 제어하여 산소 라디칼 의존성 조직손상을 예방할 수 있다. 그러나 이러한 ASP가 심장조직에서의 라디칼 의존성 조직 손상이나 기능의 부전을 효과적으로 방지 또는 경감할 수 있는가에 대한 사실은 지금까지 알려져 있지 않았다.본 기술에서는 각종 관상동맥질환, 각종 심장수술 또는 심장이식과정에서 초래되는 심근손상에 의한 심장기능 장애의 주요인이 허혈후 재관류에 따른 산소라디칼성 손상에 기인하고, 이러한 라디칼 생성원인이 크산틴 옥시다제(XO)의 활성화에 있음을 착안하여, 아스파트산 또는 그의 생리학적으로 허용되는 염의 공급에 의해 XO의 활성화를 억제하여, 결과적으로 심근에 미치는 라디칼 손상을 억제하고, 심장기능과 조직의 손상을 방지할 수 있다.본 기술의 조성물인 ASP는 물, 생리식염수, 아미노산류, 당류 등과 함께 함유하는 제형을 취할 수도 있다. 또, 본 기술의 ASP는 심장, 간 또는 신장 등의 기관 이식술을 시술함에 있어서, 이들 조직을 보존하기 위한 액내에 조직 보호제로서 첨가될 수 있다
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- 특허법인충정
- 등록일
- 2001-06-22
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한국의 만성간염 환자의 혈장으로부터 분리한 C형 간염 바이러스(이하 HCV) 전체 게놈과 각각의 유전자들 및 그로부터 번역되는 아미노산 및 전기 각 유전자를 발현시키는기술이다. 만성 간염환자들로부터 수득한 각각의 HCV 게놈의 염기서열, 이 게놈으로부터 번역된 아미노산 서열 및 각 HCV 유전자를 발현시키는 방법과 각 HCV 유전자 및 단백질로부터의 항체, 백신 및 진단시약을 제공한다. 본 기술에서는 한국의 만성 간염 환자의 혈청으로부터 분리한 한국형 C형 간염 바이러스의 뉴클레오티드 전체 게놈(HCV-K), E1, E2 및 E2/NS1의 각 서열을 증폭시킨 cDNA를 분석함으로써, 각각의 HCV의 염기서열 및 아미노산 서열을 결정하였다. 이중 HCV-K 의 cDNA는 3010개의 아미노산으로 구성된 당단백질을 코딩하는 9030개의 뉴클레오티드의 개방해독틀(ORF)과 340개의 뉴클레오티드의 번역되지 않은 5-부위 45개의 뉴클레오티드와 43개-87개의 뉴클레오티드의 부가적인 T-스트레치된 3말단으로 구성되어 있다. 본 기술의 HCV-K는 일본에서 분리된 HCV-J나 HCV-BK와 밀접한 관계가 있는 특이적인 아형으로 분류될 수 있는 신규한 유전자로 확인되었으며, E1, E2 및 E2/NS1의 유전자도 특징적인 서열을 가지고 있음이 확인되었다.HCV는 흔히 간경변증이나 간암으로 진전되며, 비A, 비B 간염의 주요 원인으로, 약 50%정도의 높은 빈도로 만성간염과 연결되며, 이중 15%의 환자에서 간경변증이나 간암으로 발전하는 것으로 알려져 있다. HCV는 플라비비리대종에 속하는 것으로서, 길이 약 9500개의 뉴클레오티드로 구성된 양성가닥 RNA와, 3011개의 아미노산의 다단백질 전구체를 코딩하는 큰 개방해독틀을 가지고 있는 것으로 알려졌다.HCV는 여러 개의 유전자형이 다양한 지역에서 공존하며, HCV 서열이 미국, 일본 및 대만 등지에서 분리되어 보고되어 왔는데, 특히 한국에서의 HCV 뉴클레오티드 서열에 관한 정보는 그리 많지 않았으며, 본 기술에 의해 밝혀진 한국형 HCV의 유전자 및 아미노산 서열은 기존에 밝혀진 한국형 HCV 유전자 및 아미노산 서열과는 명백히 서로 상이한 것으로 확인되었다.본 기술에서는 한국의 만성 간염을 앓고 있는 1명의 환자의 혈장으로부터 분리한 HCV 게놈 전체 및 각각 여러 명의 다른 환자의 혈장으로부터 분리한 22가지 HCV E1, 7가지 HCV E2, 5가지HCV E2NS1 및 5가지 HCV E1/E2 유전자의 서열을 밝혀 이미 알려진 서열들과 비교한 결과, 이 서열들이 모두 신규한 것임을 밝혔다. 한편, 배큘로바이러스 발현체계 및 포유동물 세포인 CHO 세포를 이용하여 HCV의E1, E2, E1/E2 및 E2/NS1 단백질의 발현을 확인하였다. 제조된 재조합 바이러스로 곤충세포Sf9를 감염시키고 배양하여, 면역블럿 실험으로 발현된 단백질을 확인하였다.본 기술로 C형 간염 바이러스에 대한 한국형 백신 및 진단시약 등의 개발이 가능하다
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- 포항공과대학교
- 등록일
- 2001-06-22
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보건·의료 > 의약품 제제 개발 기술
인간 면역세포에서 포스포리파제 C(PLC)를 활성화시키는 펩티드로서 펩티드 라이브러리 시스템을 이용하여 제조된 수많은 펩티드로부터 인간 면역세포에서 PLC를 활성화시킬 수 있는 펩티드를 선별하는 효과적인 방법 및 선별된 PLC를 활성화시킬 수 있는 신규 펩티드에 관한 기술이다. 종래의 방법에 따라 수천만 종류의 펩티드들을 제조한 후, 면역세포(B임파구)의 초기 활성화에 수반되는 포스포이노시티드의 분해에 따른 이노시톨 1,4,5-트리스포스페이트의 생성량을 측정함으로써, 면역 조절 물질을 탐색할 수 있는 방법을 이용하여 새로운 PLC 활성화 펩티드를 선별하는 방법이다. 이들 선별된 신규 펩티드들은 인간 면역세포인 U266세포 및 사람 전골수성 백혈병 세포인 HL60의 PLC 활성을 특이적으로 증가시키므로 면역 증강제로서의 가능성을 가지고 있으며, 면역세포의 생리 활성 및 성장 조절을 연구하는 수단으로 이용될 수 있다면역세포, 즉 T및 B 임파구들의 활성화 및 분화과정은 생명체의 중요 방어 기능인 면역체계의 초기 조절에 핵심적인 단계이다. 이들의 초기 활성화는 면역원이나 세포 표면의 단백질들이 임파구 세포막의 수용체들과 일련의 적절한 결합을 통하여 세포내로 신호를 전달함으로써 개시된다. 최근 면역세포에서 초기 신호 전달 과정의 기작중 포스포이노시티드의 분화와 칼슘 이온 농도의 증가가 면역 세포들의 초기 활성화에 중요한 것으로 밝혀졌다. 이에 따라 면역세포들의 초기 활성화에 영향을 미치는 물질들을 찾음으로써 면역 조절제의 개발이 가능하리라 보고 있으나, 아직 이를 대상으로 체계적인 면역 조절 물질의 탐색이나 개발은 이루어지지 않고 있다. 본 기술의 활성 펩티드들은 면역세포 초기 활성화 신호를 조절할 수 있는 물질의 탐색을 위하여 현재까지 시도되지 않은 수백, 수천만 종류의 펩티드를 포함하는 펩티드 라이브러리 합성방식에 따른 체계적인 접근 방식으로 개발된 펩티드이다. 신규 펩티드들은 사람 면역세포에서 PLC의 활성을 특이적으로 증가시키므로 면역 증강제로 사용될 수 있는 펩티드로서, 펩티드에 의해 PLC의 활성이 증가될 수 있는 사람 면역세포로는 사람 골수종세포인 U266 또는 사람 전골수성 백혈병세포인 HL60이 있다. 따라서 면역세포의 생리 활성 및 성장 조절을 연구하는 데 이용된다
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- 포항공과대학교
- 등록일
- 2001-06-18
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보건·의료 > 의약품 제제 개발 기술
소화기암 특이 항원인 암태아성 항원(CEA; carcinoembryonic antigen)을 인식하는 단클론성 항체 및 그를 코드하는 DNA의 염기 서열에 관한 기술로서, CEA만을 특이적으로 인지하여 결합할 수 있는 항체를 개발하고, 이를 이용하여 CEA의 에피토프를 확인하고 CEA의 에피토프 및 그의 아미노산 서열이다.본 기술은 인체 대장암 세포주 LS 174T로부터 사람 CEA를 순수 분리 정제하고, 이를 생쥐에 주사하여 생쥐를 면역시킨 후, 면역된 생쥐로부터 비장 세포를 분리한 다음 생쥐의 골수종 세포, 예를 들어, Sp2/O-ag14 세포와 융합시켜 배양이 가능한 새로운 융합세포주를 제조한 다음 배양함으로써 소화기암 특이항원인 CEA를 특이적으로 인지하는 단클론성 항체를 제조하고, 이어서 상기 항체에 특이적으로 결합하는 펩티드를 이용하여 CEA의 에피토프 부분을 선별하고 이들의 아미노산 서열을 확인하는 방법이다CEA는 대장암 조직에서 처음으로 분리된 암 관련 항원으로서 여섯 개의 이황화 결합을 가진 단일 폴리펩티드이고, 40-60% 정도의 당질 잔기로 이루어진 분자량 180-200kDa 정도의 당단백질이다. 또한, CEA는 태아의 대장 점막 이외에도 여러 종류의 소화기 암에서 높게 발현되어 범암종성 항원으로 널리 알려져 있고, 한국인에게 높은 빈도로 발생하는 위암에서도 CEA의 발현이 증대되어 있음이 보고된 바 있다.CEA는 초기에 대장 및 직장암의 특이 표지로 추정되었다. 그러나 정상조직에서도 극소량이 발견되었고, 양성암종이나 다른 종류의 악성종양을 지닌 환자의 혈청에도 존재하는 것이 증명되었다. 따라서, 현재 CEA의 정량법은 대장 및 직장암의 검색, 수술전후 CEA 혈청치의 비교에 의한 암의 재발의 발견 등에 널리 쓰이고 있다.본 기술에서는, 특히 항CEA 79 항체가 특이적으로 인지하는 CEA의 에피토프 부분을 확인하기 위해, Fmoc/고체 상 합성법에 의해 수지비드에 5개씩의 아미노산 잔기를 결합시켜 제조된 1-비드-1-펩타이드 라이브러리를 제조한 후 이를 상기 단클론성 항체와 반응시킨 후, 2차 항체와 결합된 염소 항-마우스 항체를 가하여 결합시킨 후 발색용액으로 발색시켜 상기 항체에 특이적으로 결합하는 펩티드가 결합되어 있는 비드를 선별하고, 상기 비드로부터 펩티드를 분리해낸 후, 아미노산 서열 분석기에 의해 이들의 아미노산 서열을 분석하였다.본 펩타이드들은 소화기암의 특이 항원인 CEA의 에피토프 부분으로서 이들은 소화기 암의 진단 및 치료제의 개발에 이용될 수 있다
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- 포항공과대학교
- 등록일
- 2001-06-23
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보건·의료 > 의약품 제제 개발 기술
파지가 발현하는 펩티드 라이브러리를 이용하여 개발된, 혈관신생(angiogenesis)을 유도하는 인간 엔지오제닌(angiogenin)에 대해 길항능을 지닌 펩티드 및 그를 이용한 혈관신생의 억제방법에 관한 것으로, 혈관신생을 유도하는 인간 엔지오제닌에 대해 길항능을 지닌 펩티드를 개발하고, 이 펩티드를 혈관신생이 비정상적으로 지속되는 포유동물에 투여하여 혈관신생 저해제, 나아가 암치료제로 사용한다.본 기술은 파지가 발현하는 펩티드 라이브러리(펩티드 무작위 서열 혼합물)를 이용하여 개발된 특정 아미노산 서열의 펩티드가 인간 엔지오제닌과 그 수용체인 액틴간의 결합을 농도의존적으로 저해하고, 엔지오제닌과 엔지오제닌을 분비하는 인간 암세포에 의해 유도되는 혈관신생을 효과적으로 저해한다는 사실을 밝힘으로써, 이 펩티드를 혈관신생 저해제 또는 항암제로서 제공한다.암세포의 성장과 전이, 류머티스 관절염 및 당뇨성 실명증 등의 여러 질병에서는 혈관신생이 필수적으로 요구되는데, 이때 혈관신생이 정교하게 조절되지 못하고 지속적으로 일어나게 된다. 한편 엔지오제닌은 생체내 존재하는 강력한 혈관형성 유도단백질로서, 이를 분비하는 인간 암세포들이 생체내에서의 성장 및 전이에 필수적으로 요구된다. 혈관형성에 있어서, 엔지오제닌과 혈관을 생성하는 내피세포의 표면에 존재하는 액틴이라는 수용체와의 결합은 필수적이므로 엔지오제닌과 액틴간의 결합을 저해하는 물질은 엔지오제닌에 의해 유도되는 혈관형성을 저해할 수 있을 뿐만 아니라, 엔지오제닌을 분비하는 암세포의 성장과 전이도 저해할 수 있을 것으로 예측된다.따라서, 본 기술은 종래 항암제에 있어서의 암세포 종류의 다양화, 항암제에 대한 내성획득, 암세포의 전이 등의 문제를 극복할 수 있는 새로운 개념의 항암제로서의 가능성을 가진 혈관신생 저해제이다. 본 기술에서 개발된 펩티드는 전립선 암세포(PC-3)의 성장에 직접적인 영향을 주지 않고서, 전립선 암세포에 의해 유도되는 혈관형성을 특이적으로 저해함으로써 이 펩티드가 전립선 암세포에 의해 분비되는 엔지오제닌이 그 수용체인 액틴과의 결합을 저해하여 전립선 암세포에 의해 유도되는 혈관신생을 억제함을 시사한다.본 기술에 의하면 상기 펩티드는 인간 엔지오제닌을 저해함으로써 기존 혈관에는 어떠한 영향을 미치지 않고서 혈관신생을 억제하므로, 혈관신생이 필수적으로 요구되는 류머티스 관절염, 당뇨성 실명증 등과 같은 질병의 치료제 또는 항암제로서 효과적으로 이용될 수 있을 것이다
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- 포항공과대학교
- 등록일
- 2001-06-25
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보건·의료 > 의약품 제제 개발 기술
DNA 면역방법을 통한, 간경변이나 간암 등의 질병을 일으키는 주요한 원인이 되는 C형 간염바이러스(HCV)에 대한 DNA 면역 백신을 제조하는 방법으로서, DNA 면역방법을 이용하여 HCV의 외피 당단백질인 외피1(E1) 과 외피2(E2), 비구조 단백질인 NS3, NS4와 NS5에 대한 최적의 면역성을 유도해낼 수 있는 DNA 백신을 개발함으로써, HCV에의 감염, 궁극적으로는 간염을 예방하고자 하는 것이다. 본 기술은 DNA 면역방법에 적용되었을 때, 과립구 및 거대식세포-응집 촉진인자 유전자(GM-CSF)를 HCV의 E1, E2 및 NS 유전자와 함께 동일한 벡터에서 발현될 수 있도록 인터널 라이보좀 엔트리 서열(IRES)을 이용한 전달 벡터를 고안하여 HCV DNA 면역방법에 이용함으로써, HCV의 E1,E2 및 NS 단백질에 대한 최적의 면역반응을 유도해낼 수 있는 플라스미드 DNA 면역백신이다. 본 기술에 의하면 상기 DNA 백신 벡터는 보다 최적화된 단백질 특이적인 면역성을 유도할 수 있으므로, 앞으로의 HCV에 대한 DNA 면역방법을 통한 백신 개발에 있어서 유용하게 이용될 수 있다.HCV는 간경변이나 간암 등의 질병을 일으키는 주요한 원인이 되고있다. 현재 알파 인터페론이 이들에 대한 유일한 치료방법으로 일반화되어 사용되고는 있지만, 만족할만한 치료효과는 겨우 10∼30% 정도에 이를 뿐이어서 HCV에 대한 효과적인 백신 개발이 시급한 실정이다. HCV의 외피 당단백질인 E1과 E2 단백질과 HCV NS 단백질은 이들에 대한 세포성 면역반응의 중요성과 더불어 HCV 백신개발 측면에서의 이용가능성이 시사되어 왔다.이에 본 기술에서는 DNA 면역방법을 통한 HCV E1과 E2 단백질 및 NS 단백질에 대한 최적의 면역성을 유도해내기 위해 그 유전자를 변형하여 분비단백질 형태로 발현될 수 있도록 하였으며, 상기 항원들에 대한 면역성을 더욱 증가시킬 수 있도록 보조인자로서 GMCSF 유전자를 이용함으로써 항원특이적인 항체성 및 세포성 면역반응의 현저한 증가를 가져오는 DNA 백신 벡터를 개발하기에 이르렀다. 본 기술의 바이시스트로닉 벡터를 이용한 DNA 면역방법은 E1, E2에 대한 최적의 항체반응은 물론이고, HCV 중화를 유도할 가능성이 있는 여러 type의 HVR1 부위에 대해서도 최적의 항체반응을 보여주고 있으며, 또한 HCV 감염을 막을 수 있는 E1, E2 및 NS 단백질에 대한 최적의 세포면역반응을 유도할 수 있는 장점을 가지고 있다
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- 포항공과대학교
- 등록일
- 2001-05-20
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일반기술
보건·의료 > 의약품 제제 개발 기술
아스페르질러스 테레우스의 배양액에 초산에틸 등의 용매를 가하여 추출하고, 이 추출액의 농축물을 알루미나 컬럼에 흡착시킨 후, 전개용매로 용리하여 건고시킨 다음, 건고물에 무수알코올 용매를 가하여 결정화시키는 것을 특징으로 하는 로바스타틴의 제조 방법에 관한 기술이다.종래 기술들에서 크로마토그래피 메디아로서 고가의 세파덱스 등 두가지 이상의 크로마토그래피 메디아를 사용하는 등 복잡한 정제과정을 거친 것은 로바스타틴의 불순물 중에 착색물질과 오일성분의 불순물이 포함되어 있기 때문이며 종래의 방법으로는 이들의 분리가 어렵다. 그러므로 착색물질의 제거가 용이한 컬럼을 선택하기 위해 여러 가지 실험을 거친 결과 용리수율, 순도 및 비용에서 흡착 크로마토그래피 메디아로서는 알루미나가 가장 우수한 효과를 나타내었으며, 특히 순도가 높아 별도의 컬럼 공정이 없이 컬럼 1회로도 충분히 원하는 순도의 로바스타틴을 수득 할 수 있었다. 크로마토그래피 용매로서는 초산메틸이 가장 바람직하다.본 기술은 종래의 기술에 비하여 세파덱스와 실리카겔 또는 역상 층전물 크로마토그래피 메디아 등의 순차적인 크로마토그래피 과정이 아닌 알루미나 크로마토그래피만을 사용하는 단일 과정으로 단순화되므로 공정 경제 및 환경보호 측면에서 매우 유리하다.
- 보유기관
- 특허법인충정
- 등록일
- 2001-06-23
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보건·의료 > 의약품 제제 개발 기술
단백질, 전분 및 지방 분해효소의 활성이 높은 고활성의 판크레아틴을 제조하는 방법이다. 본 기술은 단백질 분해효소를 크게 활성화시키고, 전분 분해효소와 지방 분해효소의 활성은 거의 손상되지 않은 판크레아틴을 대량 생산할 수 있는 방법을 제공함과 동시에 전체공정을 단축하여 생산성을 향상시켜 경제적으로 매우 우수한 판크레아틴의 제조방법을 제공한다.본 기술은 상온에서 pH 조절에 의하여 단백질 분해효소를 2단계로 활성화시킴으로써 전분 분해효소와 지질 분해효소의 활성이 손상되지 않으면서 단백질 분해효소의 활성이 월등하게 향상된 고활성(30배 이상)의 판크레아틴을 제조할 수 있으며, 본 기술에 의하면 전체 공정이 12시간 이내이므로 하루에 두 번 판크레아틴을 생산할 수 있어 매우 생산성이 높을 뿐만 아니라, 건조전 공정이 모두 상온에서 이루어져서 온도유지 및 변화에 필요한 설비를 갖추지 않아도 되어 매우 경제적이다.판크레아틴은 사람 및 동물의 췌장에서 십이지장으로 분비되어 생체내에서 소화기능을 담당하는 효소제로, 단백질 분해효소와 지방 분해효소 및 전분 분해효소를 함유하는 복합효소제이며, 산업적으로는 소화제 등의 의약제제로 많이 사용되고 식품, 직물, 피혁공업 등에도 응용되고 있다.판크레아틴은 췌장에서는 효소활성이 없는 전구체로 만들어져 십이지장으로 분비된 후, 십이지장의 엔테로펩티다제에 의해 트립신이 활성화되고, 활성화된 트립신은 다른 단백질 분해효소와 지방 분해효소들을 활성화시켜 그 기능을 가지게 된다. 그러므로 췌장에서 판크레아틴을 바로 얻으면 트립신은 트립신 활성억제 단백질과 결합해 있어서 자신이 활성을 가지지 못함은 물론 다른 단백질 분해효소들도 활성화시키지 못하므로 단백질 분해효소의 활성이 매우 낮아 산업적으로 이용이 불가능하다. 따라서 단백질 분해효소를 활성화시키는 과정이 반드시 필요하다.본 기술은 냉동된 돼지 췌장에 소량의 십이지장을 넣고 갈은 후, 상온과 pH 5.0-6.0에서 단백질 분해효소를 1차 활성화시키고, 상온에서 가성소다를 유입하여 pH를 7.5-8.5로 올려 교반반응시켜 단백질 분해효소를 2차로 활성화시킨 후 아세톤을 첨가하여 단백질 침전물을 얻고 이를 진공건조시켜 분말상의 판크레아틴을 회수하는 판크레아틴의 제조방법이다.이 방법에 따르면, 전분 분해효소와 지질 분해효소의 활성이 손상되지 않고 단백질 분해효소의 활성이 30배 이상 향상된 고활성의 판크레아틴을 얻을 수 있으며, 제조공정이 간단하여 제조시간도 단축된다
- 보유기관
- 특허법인충정
- 등록일
- 2001-06-21
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